肠球菌溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基.docx
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肠球菌溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
葡萄糖肉浸液肉汤
DextroseMeatInfusionBroth
用途:
用于溶血性链球菌的增菌培养
配方:
(g/L)
牛肉粉
氯化钠
蛋白胨
磷酸氢二钾
葡萄糖
pH值7.5 ± 0.1
3.0
5.0
10.0
2.0
10.0
25℃
原理:
蛋白胨、牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;磷酸氢二钾为缓冲剂;葡萄糖提供碳源。
用法:
称取本品 30.0g,煮沸溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压 灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
在36±1℃培养24小时。
质控菌株
ATCC
生长情况
溶血性链球菌
(10-8)+++
单增李斯特氏菌
27853
(10-8)+++
大肠杆菌
25922
+/-
沙门氏菌
14028
+/-
匹克氏肉汤基础A
Pick’sBrothBaseA
用途:
用于溶血性链球菌的增菌培养
配方:
(g/L)
胰蛋白胨
牛心浸粉
叠氮钠
结晶紫
pH值7.3-7.5
10.0
20.0
0.065
0.002
25℃
原理:
胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;脱纤维兔血(或羊血)为溶血性链球菌提供大量生长因子;结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。
用法:
称取本品 30.0g,加热溶于1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至 50℃左右时,加入脱纤维羊血,混匀。
质量控制:
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
ATCC
生长情况
溶血现象
溶血性链球菌
+++
+(大)
单增李斯特氏菌
27853
++
+(小)
大肠杆菌
25922
-
-
沙门氏菌
14028
-
-
肉浸液肉汤培养基
MeatInfusionBroth
用途:
用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养(GB标准)
配方:
(g/L)
牛肉粉
氯化钠
蛋白胨
磷酸氢二钾
pH值7.5 ± 0.1
3.0
5.0
12.0
2.0
25℃
原理:
蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;磷酸氢二钾为缓冲剂;氯化钠可维持均衡的渗透压。
用法:
称取本品 20.0g,溶解于 1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
溶血性链球菌
ATCC32210
+++
浑浊
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
+++
浑浊
大肠埃希氏菌
ATCC25922
+++
浑浊
沙门氏菌
ATCC14028
+++
浑浊
叠氮钠葡萄糖肉汤
AzideDextroseBroth
用途:
用于链球菌的增菌培养
配方:
(g/L)
胰蛋白胨
牛肉浸粉
氯化钠
葡萄糖
叠氮钠
pH值7.0 - 7.4
15.0
4.5
7.5
7.5
0.2
25℃
原理:
胰蛋白胨和牛肉浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;葡萄糖提供碳源;叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌。
用法:
称取本品 34.7g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装, 121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
肠球菌
+++
/
大肠埃希氏菌
ATCC25922
-
/
粪肠球菌
ATCC29212
+++
/
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
-
/
乙基紫叠氮钠肉汤
用途:
用于链球菌的增菌培养
配方:
(g/L)
酪蛋白胨
酵母浸粉
葡萄糖
氯化钠
磷酸氢二钠
磷酸二氢钠
叠氮钠
乙基紫
pH值7.0±0.2
13.5
6.5
5.0
5.0
2.7
2.7
0.4
0.00083
25℃
原理:
酪蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖提供碳源;叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌;氯化钠维持均衡的渗透压;磷酸氢二钠和磷酸二氢钠做缓冲剂;乙基紫作为指示剂。
用法:
取本品 35.8g,溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
KF链球菌琼脂
KFStreptococcusAgar
用途:
用于链球菌的选择性分离及计数(GB、SN标准)
配方:
(g/L)
月示蛋白胨
酵母粉
甘油磷酸钠
氯化钠
麦芽糖
乳糖
叠氮钠
琼脂
溴甲酚紫
pH值7.2±0.2
10.0
10.0
10.0
5.0
20.0
1.0
0.4
13.0
0.015
25℃
原理:
月示胨和酵母粉提供氮源、维生素和生长因子;麦芽糖和乳糖为可发酵糖类;氯化钠维持均衡的渗透压;叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌;琼脂是培养基的凝固剂;溴甲酚紫为指示剂染料。
用法:
称取本品 69.4g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,冷却至50-60℃时,加入无菌1%TTC溶液10ml,混匀,倾入无菌平皿,备用。
质量控制:
在36±0.5℃下培养48h。
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪性链球菌
CMCC(B)32223
良好
红色或粉红色中心
大肠埃希氏菌
ATCC25922
被抑制
__
肠球菌琼脂(胆盐-七叶苷-叠氮钠琼脂)
EnterococcusAgar(BileEsculinAzideAgar)
用途:
用于食品和水中肠球菌的计数
货号:
HB0133-3
配方:
(g/L)
牛肉浸粉
胰酪蛋白胨
酵母粉
牛胆粉
氯化钠
七叶苷
柠檬酸铁铵
叠氮化钠
柠檬酸钠
琼脂
pH值7.1 ± 0.2
3.0
17.0
5.0
10.0
5.0
1.0
0.5
0.25
1.0
13.5
25℃
原理:
胰酪蛋白胨和牛肉浸粉、酵母粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;细菌水解七叶苷和柠檬酸铁铵中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素;柠檬酸钠、牛胆粉和叠氮化钠为选择性抑菌剂,抑制非链球菌的细菌;琼脂是培养基的凝固剂。
用法:
称取本品 56.3g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至45±1℃,倾入含1ml样品液平皿中约15ml培养基,混匀,凝固。
35±2℃倒置培养基培养24±2h。
注:
从保温开始至做成平板时间不要超过4h。
质量控制:
在36±0.5℃培养24小时。
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪链球菌
CMCC(B)32223
良好
棕黑色,具有棕色晕轮
金黄色葡萄球菌
ATCC6538
被抑制
——
大肠埃希氏菌
ATCC25922
被抑制
——
CATC琼脂
CATCAgar
用途:
用于食品和饮料肠球菌的分离培养
配方:
(g/L)
胰酪蛋白胨
酵母浸粉
磷酸二氢钾
柠檬酸钠
吐温80
碳酸钠
叠氮钠
红四氮唑(TTC)
琼脂
pH值7.0± 0.2
15.0
5.0
5.0
15.0
1.0
2.0
0.4
0.1
15.0
25℃
原理:
胰酪蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、维生素和矿物质,磷酸二氢钾是缓冲剂。
琼脂是培养基凝固剂。
用法:
称取本品 58.5g ,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至 50~55℃时,倾入无菌平皿,备用。
质量控制:
胆盐七叶苷琼脂
BileEsculinAgar
用途:
用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养
配方:
(g/L)
蛋白胨
牛胆盐
柠檬酸铁
七叶苷
琼脂
pH值7.1 ± 0.2
8.0
20.0
0.5
1.0
15.0
25℃
原理:
蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子;细菌水解七叶苷和柠檬酸铁中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素;牛胆盐为选择性抑菌剂,抑制非链球菌的细菌;琼脂是培养基的凝固剂。
用法:
称取本品 44.5g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
在36±1℃培养22-24小时。
质控菌株
ATCC
生长情况
黑色
肠球菌
(10-7)+++
+
大肠杆菌
25922
(10-7)+++
-
金黄色葡萄球菌
25923
-
/
哥伦比亚血琼脂基础
ColumbiaBloodAgarBase
用途:
营养非常丰富,用于各种细菌的基础培养基
配方:
(g/L)
酪蛋白胰酶消化物
心胰酶消化物
玉米淀粉
肉胃酶消化物
酵母浸出粉
氯化钠
琼脂
PH值
10.0g
3.0g
1.0g
5.0g
5.0g
5.0g
10.0g
7.3±0.2
原理:
酪蛋白胰酶消化物、肉胃酶消化物、心胰酶消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、维生素和氨基酸;淀粉能促进奈瑟氏菌的生长和增强链球菌的溶血特性;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
用法:
称取本品 39克,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,冷至45-50℃左右时,加入相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素,混匀,倾入无菌平皿。
质量控制:
在30-35℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
良好
有黄色色素
单增李斯特氏菌
ATCC19114
良好
无色透明小菌落
大肠埃希氏菌
ATCC25922
良好
无色透明大菌落
沙门氏菌
ATCC14028
良好
无色大菌落
铜绿假单胞菌
CMCC10104
良好
有绿色色素
LIM培养基
LIMMedium
用途:
用于链球菌的分离培养(Japan方法)
配方:
(g/L)
牛肉粉
胰蛋白胨
葡萄糖
碳酸氢钠
氯化钠
磷酸氢二钠
pH值7.8 ± 0.1
10.0
20.0
2.0
2.0
2.0
0.4
25℃
原理:
胰蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖提供碳源;氯化钠维持均衡的渗透压磷酸氢二钠作为缓冲剂。
用法:
取本品 36.4g,溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,待培养基冷至 45-50℃时,加入多粘素 E10mg 和萘啶酮酸 15mg ,混匀
质量控制:
BETA-SSA琼脂
BETA-SSAAgar
用途:
用于链球菌的选择性分离培养
配方:
(g/L)
蛋白胨
大豆蛋白胨
氯化钠
麦芽糖
琼脂
抑菌剂
pH值7.1 - 7.5
15.0
5.0
5.0
0.25
13.0
0.0262
25℃
原理:
蛋白胨和大豆蛋白胨提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
用法:
取本品 38.3g,溶解于1000ml蒸馏水中,115℃高压灭菌 20 分钟,冷至 50℃左右时,无菌加入5-10%的脱纤维羊血,混匀,倾入无菌平皿。
质量控制:
粪肠球菌琼脂
EnterococcusfaecalisAgar
用途:
用于粪肠球菌的选择性分离
配方:
(g/L)
月示胨
麦芽糖
酵母浸粉
甘油磷酸钠
氯化钠
乳糖
溴甲酚紫
叠氮钠
TTC
琼脂
pH值7.2 ± 0.2
10.0
20.0
10.0
10.0
5.0
1.0
0.015
0.4
0.1
13.0
25℃
原理:
月示胨和酵母浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;乳糖是大肠菌群可发酵的糖类;叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌;溴甲酚紫和TTC作为指示剂;琼脂是培养基的凝固剂。
用法:
取本品 70.0g , 加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,煮沸5 分钟,冷至50℃左右,倾入无菌平皿,备用。
质量控制:
缓冲蛋白胨水
BufferedPeptoneWater
用途:
用于阪崎杆菌前增菌培养(GB2008标准)
配方:
(g/L)
蛋白胨
氯化钠
磷酸氢二钠(含12个结晶水)
磷酸二氢钾
pH值7.2 ± 0.2
10.0
5.0
9.0
1.5
25℃
原理:
白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;磷酸二氢钾和磷酸氢二钠是缓冲剂
用法:
称取本品 20.0g ,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟备用。
质量控制:
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
单增李斯特氏菌
ATCC19114
+++
浑浊
沙门氏菌
ATCC14028
+++
浑浊
胆汁液态培养基
Bilebroth
用途:
用于粪链球菌的胆汁耐受试验。
配方:
(g/L)
猪胆粉
脑心浸液肉汤
pH值 7.4 ± 0.1
20.0
23.1
25℃
原理:
用法:
称取本品 43.1g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装试管,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
在36±1℃培养18-24小时。
M-肠道菌琼脂
M-EnterococcusAgar
用途:
用于水中或其它物质中肠球菌分离培养和计数(滤膜法或划线法)
配方:
(g/L)
胰酪蛋白胨
大豆蛋白胨
酵母浸粉
葡萄糖
磷酸氢二钾
叠氮化钠
TTC
琼脂
pH值7.2 ± 0.2
15.0
5.0
5.0
2.0
4.0
0.4
0.1
10.0
25℃
原理:
胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、维生素和矿物质,葡萄糖提供碳源,磷酸盐是缓冲剂,琼脂是培养基凝固剂。
用法:
称取本品 42g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,煮沸 1 分钟,冷至 45-50℃左右时, 倾入无菌平皿。
无需高压灭菌。
质量控制:
THB培养基
THBMedium
用途:
用于链球菌增菌培养
配方:
(g/L)
牛肉粉
胰蛋白胨
葡萄糖
碳酸氢钠
氯化钠
磷酸氢二钠
pH值7.8 ± 0.1
10.0
20.0
2.0
2.0
2.0
0.4
25℃
原理:
牛肉粉、胰蛋白胨提供氮源、维生素和矿物质,葡萄糖提供碳源,氯化钠维持均衡的渗透压,磷酸盐是缓冲剂。
用法:
称取本品 36.4 g,溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15分钟,待培养基冷至 45-50℃时, 加入多粘素E 10mg 和萘啶酮酸 15mg ,混匀。
PS琼脂
PSAgar
用途:
用于消化球菌的培养
配方:
(g/L)
蛋白胨
牛肉浸粉
酵母浸粉
葡萄糖
半胱氨酸盐酸盐
氯化钙
硫酸镁
磷酸氢二钾
磷酸二氢钾
碳酸氢钠
氯化钠
吐温80
琼脂
10.0
3.0
3.0
2.0
0.5
0.008
0.008
0.04
0.04
0.4
0.08
1.0
13.0
原理:
蛋白胨、牛肉浸粉 、酵母浸粉提供氮源、维生素和矿物质,葡萄糖提供碳源,磷酸氢二钾和磷酸二氢钾是缓冲剂。
氯化钠维持均衡的渗透压,琼脂是培养基凝固剂。
用法:
称取本品 33.1g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中 ,分装 , 121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
肠球菌肉汤
EnterococcusBroth
用途:
用于肠球菌增菌培养
配方:
(g/L)
胰蛋白胨
牛肉浸粉
酵母浸粉
牛胆粉
氯化钠
柠檬酸钠
七叶苷
柠檬酸铁铵
叠氮化钠
pH值7.1 ± 0.2
17.0
3.0
5.0
10.0
5.0
1.0
1.0
0.5
0.25
25℃
原理:
胰蛋白胨和酵母浸粉、牛肉浸粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;细菌水解七叶苷和柠檬酸铁铵中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素;柠檬酸钠、牛胆盐和叠氮化钠为选择性抑菌剂,抑制非链球菌的细菌。
用法:
称取本品 42.8g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
在36±0.5℃培养24小时。
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪链球菌
CMCC(B)32223
良好
棕黑色,具有棕色晕轮
金黄色葡萄球菌
ATCC6538
被抑制
——
大肠埃希氏菌
ATCC25922
被抑制
——
脑心浸液肉汤(BHI)
BrainHeartInfusionBroth
用途:
用于细菌的增菌培养
配方:
(g/L)
蛋白胨
脱水小牛脑浸粉
脱水牛心浸粉
氯化钠
葡萄糖
磷酸氢二钠
pH值7.4 ± 0.2
10.0
12.5
5.0
5.0
2.0
2.5
25℃
原理:
蛋白胨、脱水小牛脑浸粉、脱水牛心浸粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖可为多种细菌提供能源;氯化钠维持均衡的渗透压;磷酸氢二钠为缓冲剂。
用法:
称取本品 38.5g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
质控菌株接种后于35±0.5℃培养24h,结果如下:
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪性链球菌
CMCC(B)32223
良好
肉汤混浊
乙型溶血性链球菌
CMCC(B)32210
良好
肉汤混浊
大肠埃希氏菌
ATCC25922
良好
肉汤混浊
脑心浸萃液肉汤
BrainHeartInfusionBroth
用途:
用于营养苛求细菌的增菌培养
配方:
(g/L)
月示蛋白胨
牛脑浸出粉
牛心浸出粉
氯化钠
葡萄糖
磷酸氢二钠
pH值7.4 ± 0.2
10.0
10.0
9.0
5.0
2.0
2.5
25℃
原理:
月示蛋白胨、牛脑浸出粉、牛心浸出粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖可为多种细菌提供能源;氯化钠维持均衡的渗透压;磷酸氢二钠为缓冲剂。
用法:
称取本品 38.5g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中, 121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
在35±0.5℃培养24h,
菌 名
菌 号
生长状况
培养特征
粪性链球菌
CMCC(B)32223
良好
肉汤混浊
乙型溶血性链球菌
CMCC(B)32210
良好
肉汤混浊
大肠埃希氏菌
ATCC25922
良好
肉汤混浊
脑心浸液琼脂(BHIA)
BrainHeartinfusionAgar
用途:
用于营养苛求细菌的增菌培养
配方:
(g/L)
牛脑浸粉
牛心浸粉
蛋白胨
酪蛋白胨
氯化钠
葡萄糖
磷酸氢二钠
琼脂
pH值7.4 ± 0.2
4.0
4.0
5.0
16.0
5.0
2.0
2.5
13.5
25℃
原理:
牛脑浸粉、牛心浸粉、蛋白胨、酪蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖可为多种细菌提供能源;氯化钠维持均衡的渗透压;磷酸氢二钠为缓冲剂,琼脂为凝固剂。
用法:
称取本品 52.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:
控菌株接种后于35±0.5℃培养24h
菌 名
菌 号
生长状况
粪性链球菌
CMCC(B)32223
良好
乙型溶血性链球菌
CMCC(B)32210
良好
大肠埃希氏菌
ATCC25922
良好
Pfizer肠球菌选择性琼脂(PSE琼脂)
PfizerEnterococcusSelectiveAgar
用途:
用于粪链球菌的选择性分离和计数(SN标准)
配方:
(g/L)
蛋白胨
酵母浸粉
牛胆汁物
氯化钠
柠檬酸钠
柠檬酸铁铵
叠氮化钠
七叶苷
琼脂
pH值
20.0g
5.0g
10.0g
5.0g
1.0g
0.5g
0.25g
1.0g
15.0g
7.1±0.2
原理:
蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;细菌水解七叶苷和柠檬酸
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- 关 键 词:
- 球菌 溶血 链球菌 检验 培养基