实验室常用试剂缓冲液配制.docx
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实验室常用试剂缓冲液配制
实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1MTris-HCl □组份浓度1MTris-HCl
(pH7.4,7.6,8.0) □配制量1L
□配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值 浓HCl
7.4 约70mL
7.6 约60mL
8.0 约42mL
4.将溶解定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5MTris-HCl □组份浓度1.5MTris-HCl
(pH8.8) □配制量1L
□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TEBuffer □组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA
(pH7.4,7.6,8.0) □配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTris-HClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL
500mMEDTA(pH8.0)20mL
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
3.将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
4.室温保存。
4、3M醋酸钠 □组份浓度3M醋酸钠
(pH5.2) □配制量100mL
□配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3.加入去离子水将溶液定容至100mL。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
5、PBSBuffer □组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4
□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。
NaCl 8g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.42g
KH2PO4 0.27g
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
6、10M醋酸铵 □组份浓度10M醋酸铵
□配制量100mL
□配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100~200mL烧杯中,加入约30mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意:
醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
7、Tris-HCl平衡苯酚 □配置方法
1.使用原料:
大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。
但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。
同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。
因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2.操作注意:
苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。
所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
3.苯酚平衡:
因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。
从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。
该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。
有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇 □配置方法
1.说明:
从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇(25:
24:
1)。
氯仿可使蛋白(25:
24:
1)质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配置方法:
将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:
1)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
9、10%(W/V)SDS □组份浓度10%(W/V)SDS
□配制量100mL
□配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水,68℃加热溶解。
2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
3.将溶液定容至100mL后,室温保存。
10、2NNaOH □组份浓度2NNaOH
□配制量100mL
□配置方法
1.量取80mL去离子水置于100~200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
3.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100mL。
4.将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。
11、2.5NHCl □组份浓度2.5NHCl
□配制量100mL
□配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸(11.6N),均匀混合。
2.室温保存。
12、5MNaCl □组份浓度5MNaCl
□配制量1L
□配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中,加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
13、20%(W/V)Glucose □组份浓度20%(W/V)Glucose
□配制量100mL
□配置方法1.称取20gGlucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
14、SolutionI □组份浓度25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose
(质粒提取用) □配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTris-HCl(pH8.0) 25mL
0.5MEDTA(pH8.0) 20mL
20%Glucose(1.11M) 45mL
dH2O 910mL
2.高温高压灭菌后,4℃保存。
3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mL)。
15、SolutionII □组份浓度250mMNaOH,1%(W/V)SDS
(质粒提取用) □配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10%SDS 50mL
2NNaOH 50mL
2.加灭菌水定容至500mL,充分混匀。
3.室温保存。
此溶液保存时间最好不要超过一个月。
注意:
SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
16、SolutionIII □组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH
(质粒提取用) □配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc 147g
CH3COOH 57.5mL
2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至500mL。
4.高温高压灭菌后,4℃保存。
17、0.5MEDTA □组份浓度0.5MEDTA
(pH8.0) □配制量1L
□配置方法1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O,置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌。
3.用NaOH调节pH值值8.0(约20gNaOH)。
注意:
pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。
4.加去离子水将溶液定容至1L。
5.适量分成小份后,高温高压灭菌。
6.室温保存。
18、1MDTT □组份浓度1MDTT
□配制量20mL
□配置方法1.称取3.09gDTT,加入到50mL塑料离心管内。
2.加20mL的0.01M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3.适量分成小份后,-20℃保存。
19、10mMATP □组份浓度10mMATP
□配制量20mL
□配置方法1.称取121mgNa2ATP•3H2O,加入到50mL塑料离心管内。
2.加20mL的25mMTris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。
3.适量分成小份,-20℃保存。
分子生物学实验常用培养基的配制方法
1、Ampicillin □组份浓度100mg/mlAmpicillin
(100mg/ml) □配制量50mL
□配置方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。
2.加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
3.用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
2、IPTG □组份浓度24mg/mLIPTG
(24mg/mL) □配制量50mL
配置方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
3.用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
3、X-Gal □组份浓度20mg/mLX-Gal
(20mg/mL) □配制量50mL
□配置方法1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。
2.加入40mLDMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL。
3.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。
4、LB培养基 □组份浓度1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)YeastExtract,1%(W/V)NaCl
□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中
Tryptone 10g
YeastExtract 5g
NaCl 10g
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4.高温高压灭菌后,4℃保存。
5、LB/Amp培养基 □组份浓度 1%(W/V) Tryptone
0.5%(W/V) YeastExtract
1%(W/V) NaCl
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中
Tryptone 10g
YeastExtract 5g
NaCl 10g
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1L。
5.高温高压灭菌后,冷却至室温。
6.加入1mLAmpicillin(100mg/mL)后均匀混合。
7.4℃保存。
6、TB培养基 □组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone
2.4%(W/V) YeastExtract
0.4%(V/V) Glycerol
17mM KH2PO4
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