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植物病毒鉴定检测方式的研究进展
植物病毒鉴定检测方式的研究进展
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随着现代病毒学近半个世纪的进展历程,病毒的检测手腕和方式也在不断进展和改良,但不管是什么样的方式,都是依照病毒所共有的两个特性而进展起来的,一是病毒的侵染性,二是病毒作为核蛋白的特性,也确实是病毒理化性质。
1.枯斑和指示植物检测法
植物病毒最方便的测定法是利用受病毒侵染能产生枯斑的寄主植物进行检测病毒,此法是美国病毒学家霍姆斯(Hohnes)在1929年发觉的,用感病的植物叶片与少量金刚砂相混,研磨成粗汁液,然后在指示植物的叶片上蘸取汁液,磨擦供试植物的叶片,经清水清洗后,置于室温条件下的温室内待测,2-3d后叶片上会显现局部坏死灶,即圆形的枯斑,在必然的范围内,枯斑数与侵染性病毒的浓度成正比。
枯斑法虽不能测出病毒总的核蛋白浓度,但能测出病毒的相对侵染力,关于病毒的定性有着重要的意义。
诺贝尔奖取得者美国科学家斯坦利(Stanley)第一次提纯出TMV(烟草花叶病毒)时确实是利用此法来检测病毒的。
时至今日,很多实验室和生产检测单位仍然利用此方式检测病毒。
枯斑法在提纯一个未知病毒时,它还可起到追踪病毒踪迹的作用,一旦有了病毒的纯品,利用病毒的稀释曲线,能够换算出病毒的实际浓度。
2.血清学检测法
大体原理是动物受其致病细菌、病毒侵染后,动物体内血液中的球蛋白发生转变而产生抗体,引发动物产生抗体的物质简称为抗血清。
血清中的抗体能与同系的抗原在体外特异的结合,这一特性确实是血清学测定病毒的大体原理。
这种方式已经普遍应用于植物病毒的定性定量分析和医学临床诊断上,其方式的种类也很多,那个地址仅对一些重要的方式做扼要的介绍:
(1)补体结合测定法。
血清中有一种对热不稳固的成份,它能在抗体存在的条件下,溶解红血球或破坏革兰氏阴性菌,这种成份就称之为补体。
补体是一种很复杂具有酶活性的蛋白质,在560(;下加热,30min后补体那么失活,它的一个重要特性是一旦抗体与抗原结合,那么补体也与之结合,通过补体的酶作用能够溶解红细胞。
(2)沉淀法。
相对来讲沉淀法即超级简便,在植物病毒学中应用的极为普遍,其原理是在电解质存在时,抗体与同源抗原彼此结合形成沉淀,不同病毒类型所形成的沉淀也不同。
如杆状、线状病毒形成絮状沉淀,球形病毒多形成颗粒状沉淀,通过稀释终点法,确实是利用抗原稀释终点关于每种病毒来讲是比较稳固的这一特点,来测试病毒的浓度。
3.酶标免疫吸附法(ELISA)
Elisa方式是Enzyme-Linkedimmunosorbentassay的缩写,最先用于动物病毒的检测,近二三十年才应用于植物病毒的检测,并作为病毒的定量方式普遍应用于病理、免疫学的研究和生产实践中,对病毒进行快速检测。
此法的最大优势是灵敏度高,能与放射免疫技术媲美。
有很多的病毒因其浓度太低或某种抑制剂的干扰,常规血清学方式检测不出时,此法就显示出独特的优越性。
该方式第一将同源特异抗体吸附在反映器皿底部,加入欲测试的含病毒的样品,病毒与抗体结合,病毒颗粒被固定,再加入酶标记的特异抗体和酶的底物,酶与底物反映后会显现有颜色的溶液其强度与病毒浓度成正比,用此方式可测定出病毒的浓度。
4.电镜负染检测法
第一台电子显微镜的诞生打开了人类熟悉微观世界的大门,电镜技术在近70年进展历程中,为生物学、细胞学、病毒学领域的进展作出了重要奉献。
正是由于电镜的显现,实现了人类可直观病毒及其他生物大分子的可能。
因此电子显微镜技术能够说是最直接,最准确的检测病毒的手腕,它能够直接看到病毒的形态结构、存在与否,因此在进入了分子水平的今天它仍然有着不可替代的作用。
电镜负染技术是20世纪60年代开始利用于英国实验室,那时人们发觉一些重金属离子能绕核蛋白体周围沉淀下来,形成一个黑暗的背景,在核蛋白体内部不能沉积而形成一个清楚的亮区,其图像犹如一张照相的底片,因这人们适应地称为负染色,电镜负染技术也就由此而生。
5.免疫电镜检测法
免疫电镜技术是将免疫学原理与电镜负染技术相结合的产物,在电镜制样进程中,病毒颗粒不能集中的沉积在有效的电镜视野内,而容易造成电镜观看时的疏漏,免疫电镜法利用了抗体、抗原的亲和性与吸附性的这一特点,在电镜制样进程中,于铜网上先铺展一层细胞色素A,稍后再添加一滴抗体,多余液滴用滤纸吸掉,最后点上一滴抗原和染液,由于细胞色素A的作用,减少了样品即抗体、抗原的表面能力,能形成均匀的涂层,再加抗体、抗原的吸附作用使病毒能较集中地沉集在有效视野内,从而便于电镜下的观看,大大提高了检测概率。
6.电镜超薄切片法
该技术的进展已经达到病毒的体内定位研究和体内复制及侵染进程的动态研究水平,并能直观病毒生物大分子的亚基单位,已经从细胞水平进展到分子水平。
尤其对一些未知病毒,难于提纯的病毒材料,负染技术不能解决的检测材料都可用此方式,通过对组织细胞的直接观看而取得解决,因此在病毒学检测和脱毒快繁的实际生产中均有着特殊的重要性和不可取代的作用。
7.基因检测技术
基因工程技术的兴起在对病毒的检测手腕中带来了新的飞跃,检测水平已经达到超微量,即微克水平。
其成熟的方式也很多,如分子探针杂交检测技术,利用必然序列的核苷酸合成探针,通过度子杂交技术,检测出供试样品中与之相补的碱基序列。
PCR技术是通过体外扩增能够使供试样品中的目的基因片段专门快扩增,使之达到了对即便是病毒含量极低的样品,也能灵敏准确地取得定性的结果。
基因检测技术对病毒的检测已经达到分子水平,其灵敏度和特异性是任何生化方式的检测所不能比拟的,同时能够省略大量的病毒提纯和血清的制备工作。
以上所介绍的几种方式都是植物病毒鉴定检测技术中行之有效的方式,但在生产实践中,具体利用哪一种方式就要依照病毒的不同类型,技术把握程度,设备条件等具体条件的不同,选择相宜的鉴定检测方式。
(中国农业信息网)2003/09/28
植物病毒病检测方式
2007年3月20日01:
25网络
植物病毒病是农业生产上一种重要病害,严峻阻碍农作物的产量和质量,目前尚未1种医治成效较理想的药剂,对发病植株做到初期诊断及提早检测就显得尤其重要。
植物病毒学历经近百年的进展,植物病毒的检测方式与手腕也在不断进展与改良。
经常使用的方式有侵染力测定法、血清学方式、电子显微镜计数和分子生物学法等。
侵染力测定法
侵染力测定法是将病毒样本接种在植物上,依照侵染力的大小定量。
它的灵敏度在所有定量法中是比较高的,而且是其他定量法的基础。
设计一种新的定量法,若是不通过侵染力的验证,将无法判定测定的是病毒或是具有侵染力的病毒。
侵染力测定法包括局部枯斑法、淀粉-碘斑法、系统感染率的测定法等。
侵染力测定多用粗汁液来接种,为了幸免抑制物质的作用和使半叶枯斑数量操纵在必然范围,须用缓冲液稀释接种物。
局部枯斑法1929年发觉TMV在心叶烟(Nicotianaglutinosa)接种叶片上引发局部坏死斑点,在必然的病毒浓度范围内,所产生的斑点数量与病毒浓度成正比例。
这一发觉成为病毒侵染性定量测定的基础(田波,1987)。
所有机械传染的病毒都有可能应用局部斑点法,但事实上只有少数病毒具有可用于定量测定的局部斑寄主。
一个待测样品所形成的斑点数量除取决于接种物中病毒浓度外,还受实验植物种类、环境条件和接种物中是不是含有病毒抑制物质的阻碍。
淀粉-碘斑法当所研究的病毒没有过敏性枯斑寄主时,采纳此法。
Holmes(1931)发觉TMV接种的烟叶上有时形成明显的黄化斑块,但不能用于计数。
将这种接种叶用95%乙醇加热到80℃固定,然后用I2和KI混合液(10克I2,30克KI,1500毫升H2O)染色时,那么侵染点处显现淀粉-碘的蓝色反映。
当下午采摘叶片,褪色留宿,然后用碘液染色,那么侵染点较周围组织着色浅;当采摘叶片前,植株先在黑暗中放几个小时,再用碘液染色,那么侵染点组织着色深。
这是由于病毒侵染既降低光合组织中碳水化合物的形成,也降低碳水化合物从光合组织中的运出。
淀粉-碘染色的强弱受环境条件的阻碍较大,不如局部枯斑法靠得住,但在标准化条件下仍可用于侵染性的定量测定。
侵染性滴度法当上述方式都不适历时,可采纳侵染性滴度法。
即把欲测定样品用缓冲液稀释,可用十倍稀释、成倍稀释、半倍稀释或更低稀释。
这种方式的缺点是需用大量实验植物,但可取得较好的结果。
此方式可用于介体传染的病毒。
血清学方式
血清学方式原理是利用抗原抗体的体外特异性结合检测植物病毒。
要紧包括沉淀反映、凝聚反映、酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫电镜(IEM)、放射免疫测定(RIA)、PCR(聚合酶莲式反映)法等。
沉淀反映将可溶性抗原与相应的抗体混合,当二者的比例适合,并有盐类存在时,即有沉淀物显现,叫做沉淀反映。
由于沉淀物主若是由抗体球蛋白所组成,为了保证有足够的抗体,因此实验时通常要稀释抗原,不稀释抗体。
凝聚反映在微生物细胞悬液中,加入含有特异性抗体的血清,有必然浓度的电解质,微生物细胞凝聚成团,叫做凝聚反映。
分为直接凝聚反映与间接凝聚反映。
由于病毒是可溶性抗原,必需把病毒的抗体先吸附于一种与免疫无关的颗粒表面,然后与相应的抗原结合反映。
用于吸附抗体的颗粒有皂土、乳胶、炭末、红细胞等。
酶联免疫吸附实验(EnzymelinkedImmunosorbentassay,简称ELISA)将酶标记物同抗原抗体复合物的免疫反映与酶的催化放大作用相结合,既维持了酶催化反映的灵敏性,又维持了抗原抗体反映的特异性,因此极大的提高了灵敏度;同时它又是一种非均相分析进程,即在反映中的每一步以后都有洗涤进程,从而排除未反映物质的干扰。
自1976年Voller和Clark等第一次将ELISA应用于植物病毒检测,已形成多种测试方式。
经常使用的方式有有细胞直接法、细胞间接法、竞争法、酶抗酶法、双夹心法(Doublesandwichmethod)、双抗体夹心法(Doubleantibodysandwichmethod)测定方式(侯义龙,2000)。
这种方式的灵敏度高(可测出1-10纳克/毫升的浓度),特异性强,操作简便,已普遍应用于病毒测定和诊断(盛树力,1978;马德芳等,1981)。
免疫电镜(IEM)是用电镜检测抗体特异性结合于抗原的技术。
Anderson等(1961)和Lafferty与Oertelis(1961)进展了这一方式。
其灵敏度高于ELISA。
放射免疫测定(RIA)在抗原抗体反映体系中,当同位素标记抗原(Ag*)与有限量的抗体彼此作历时,形成有标记抗原的复合物(Ag*Ab)。
如下式所示:
Ag*+AbAg*Ab
AgAgAb
电子显微镜计数
本世纪三十年代初电子显微镜的发明,使咱们能够观看到病毒的分子及其细微结构。
1940年Kausche和Melcher第一次在电子显微镜下观看到烟草花叶病毒的颗粒。
电镜技术的成立对病毒学的进展起了庞大的推动作用。
在实际生产进程中,依照病毒的种类与特点的不同,往往需要把几种方式结合起来,就可望成立一套快速、灵敏、准确、高效的水体植物病毒的检测方式。
.分子生物学法
分子生物学检测法能够检测病毒的侵染能力。
此方式灵敏度最高,能检测到pg级乃至fg级[1fg(飞克)=1×10-15g]的病毒,特异性强,检测速度快,操作简便,可用于大量样品的检测(侯义龙,2000)。
目前,经常使用的分子生物学方式有核酸分子杂交技术、dsRNA电泳技术、多聚酶链式反映技术等。
侯义龙.果树要紧病毒RT-PCR检测体系的成立、优化及病毒特异DNA片段克隆测序研究.[博士学位论文].沈阳:
沈阳农业大学,
核酸分子杂交技术具有必然同源性的2条核酸单链在必然的条件下(适宜的温度及离子强度等)可按碱基互补原那么退火形成双链。
此杂交进程是高度特异性的。
杂交的两边是利用的探针和要检测—的核酸。
待测核酸能够是克隆的基因片段,也能够是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。
依照利用的方式,被检测核酸能够是提纯的(膜上印迹杂交或液相杂交),也能够在细胞内杂交(细胞原位杂交)(卢圣栋,1999)。
双链RNA(dsDNA)电泳技术ssRNA病毒在植物体内增殖,通过核酸互补而形成一种健康植物没有的碱基配对dsRNA。
DsRNA经提纯、电泳、染色后,在凝胶上所显示的谱带能够反映每种病毒组群的特异性,而且有些单个病毒的dsRNA在电泳图谱上也显示必然的特点。
因此,利用病毒dsRNA的电泳图谱能够检测出病毒的类型和种类(董颖苹,2001;李鹏翔,2000)。
此法已用于一些病毒组(如黄化病毒组、马铃薯Y病毒组、番石竹潜病毒组、烟草坏死病毒组、黄瓜花叶病毒组、绒毛烟斑驳病毒组)的分类研究。
多聚酶链式反映(polymerasechainreaction,PCR)技术是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方式,是近10年来进展和普及最迅速的分子生物学新技术之一(吴乃虎,2000;)。
由于它具有壮大的扩增能力,而且可与其它分子生物学方式(如核酸杂交)和免疫学方式(如ELISA)相结合应用,使其灵敏性和特异性都大大增强;因此普遍地应用于生物医学领域的各个学科(梁国栋,2001)。
灵敏度最高,仪器价钱昂贵,实验技术要求高。
病毒的发现
古代著作中关于病毒病的记录
病毒学是一门比较年轻的学科,从病毒的发现到目前仅有百余年的研究历史。
然而,人类对病毒病的明确记载却已经有四百多年了。
早在1566年就有了关于疯狗咬人致病,即狂犬病的记载,
并发现它能够传染给其它许多动物。
当时在世界范围内对狂犬病的病原进行了长期的探索,直到1885年人们还不知道狂犬病是由什么引起的。
尽管如此,人们与狂犬病进行了艰苦的斗争,十六世纪人们勇敢地用木棍打疯狗,希望减少该病的危害。
现在英国伦敦的皇家医学院还珍藏着一幅由ThomasSpackman绘制的患狂犬病的病狗图。
说到狂犬病,人们自然会想到关于法国著名科学家巴斯德(Pasteur,1822-1895)那段脍炙人口的故事。
在细菌学说占统治地位的年代,
巴斯德并不知道狂犬病是一种病毒病,但从科学实践中他知道有侵染性的物质经过反复传代和干燥,会减少其毒性。
他将含有病原的狂犬病的延髓提取液多次注射兔子后,再将这些减毒的液体注射狗,以后狗就能抵抗正常强度的狂犬病毒的侵染。
1885年人们把一个被疯狗咬得很厉害的9岁男孩迈斯特尔(Meister)送到巴斯德那里请求抢救,巴斯德犹豫了一会后,就给这个孩子注射了毒性减到很低的上述提取液,然后再逐渐用毒性较强的提取液注射。
巴斯德的想法是希望在狂犬病的潜伏期过去之前,使他产生抵抗力。
结果巴斯德成功了,孩子得救了。
迈斯特尔后来当了巴斯德研究所的守门人。
在1886年还救活了另一位在抢救被疯狗袭击的同伴时被严重咬伤的15岁牧童朱皮叶,现在记述着少年的见义勇为和巴斯德丰功伟绩的雕塑就坐落的巴黎巴斯德研究所外。
巴斯德在1889年发明了狂犬病疫苗,他还指出这种病原物是某种可以通过细菌滤器的“过滤性的超微生物”。
除了狂犬病外,我们还见到有关于另一种病毒病软疣的报告,这张1841年的手绘图就是一个证据。
中国医学古籍的病毒病记载
第一种有据可查的病毒病大概是由天花病毒引起天花。
在17到18世纪间,欧洲曾发生过天花大流行。
我国早在10世纪就有接种人痘预防天花的记载,16世纪的明代则已经发明了用病人的皮痂磨成粉末通过鼻孔接种来预防此病的方法。
痘苗最初是用天花痘痂制成的,叫做“时苗”。
实际上就是用人工方法感染天花,所以危险性比较大。
后来改用经过接种多次的痘痂作疫苗,叫做“熟苗”。
熟苗的毒性已减,接种后比较安全。
在清代医学著作《种痘心法》中说:
“其苗传种愈久,则药力之提拔愈清,人工之选炼愈熟,火毒汰尽,精气独存,所以万全而无害也。
若时苗能连种七次,精加选炼,即为熟苗。
”从这段文字看,我国人民在人痘苗选种培育上是完全符合现代疫苗的科学原理的。
这种对人痘苗“提拔愈清,人工之选炼愈熟,火毒汰尽,精气独存”的选育工作,是和今天用于预防结核病的“卡介苗”的定向减毒选育而保存抗原性方法的原理完全一致的。
卡介苗是20世纪初才研制成的活菌苗。
它是把一株有毒力的牛型结核杆菌,通过牛胆汗培养基培养,每3个星期左右传代一次,一共传代230多次,费时历13年之久得到的无毒活菌株,然后用来制成了卡介苗。
而我国早在公元16世纪60年代,已经有通过人体“火毒汰尽,精气独存”的痘苗了。
人痘接种法的发明,不但有效地保卫了我国儿童的健康,而且不久就传到国外。
清康熙27年(公元1688年),俄国医生到北京来学习种人痘的方法。
以后更由俄国传入土耳其。
英国驻土耳其大使夫人孟塔古,在君士坦丁堡看到当地人为孩子们种痘以预防天花,效果很好,由于她的弟弟死于天花,她自己也曾感染,就在1717年给她的儿子种了人痘。
后来又把这方法传入英国,得到英国国王的赞同。
不久,种人痘法就盛行于英国,更由英国传到欧洲各国和印度。
至于日本等国,种人痘法是十八世纪中叶直接由我国传去的。
种痘法的发明,可以说是我国对世界医学的一大贡献。
而琴纳发明牛痘,可能也受到我国的影响。
牛痘接种法的发明
公元1796年英国医生琴纳(EdwardJenner,1749-1823)接种牛痘预防天花试验成功,公元1798年发表了有关论文。
种牛痘法于公元1805年(清嘉庆十年)由澳门的葡萄牙商人传入我国。
因为牛痘比人痘更加安全,我国也逐渐用牛痘代替了人痘,并改进了种痘技术。
因此病毒的人工免疫法是中国人发明,由英国人完善的。
这也说明我国人民不仅善于发明创造,而且善于接受外来的科学文化,使我国固有的科学文化更加灿烂光辉。
美丽的郁金香与植物病毒病
第一个记载的植物病毒病当属郁金香碎色花病,因为至今荷兰阿姆斯特丹的博物馆还保存着一张1619年荷兰画家的一幅得病的郁金香静物画。
为什么要画得病的郁金香呢?
那是因为病花特别漂亮。
你很难想象当时人们对郁金香病花的狂热了,一枚得病的郁金香球茎竟能换来一头牛、一头猪或羊,甚至成吨的谷物或上千磅的奶酪。
当时的荷兰种植者就知道用嫁接的方法使健康的郁金香球茎变成病球茎。
烟草花叶病毒(TMV)
谈起植物病毒,首先要提到的就是烟草花叶病毒。
一百多年以来,烟草花叶病毒在病毒学发展史乃至遗传学、生物化学以及当代基因工程中起到了里程碑的作用。
在病毒学研究的许多阶段,它都扮演着重要角色,它使人们了解到什么是病毒、病毒的结构、病毒的侵染、复制以及抗病毒基因工程等等。
时至今日,它仍然是病毒学工作者的宠儿。
首先让我们来看看它在病毒的发现中所起的作用。
1859年斯威腾(VanSwieten)是最初描述烟草花叶病症状的人。
但是明确知道病毒病则是1886年的事了。
那时在荷兰工作的德国人麦尔(AdolfMayer)把烟草花叶病株的汁液注射到健康烟草的叶脉中,引起了烟草的花叶病,证明这种病是可以传染的。
1892年俄国的伊万诺夫斯基(Ivanowski)不但重复了麦尔的试验,而且发现其病原能通过细菌所不能通过的过滤器,可是他本人并没有意识到这一现象的重要意义,反而抱怨他用的过滤器出了毛病。
用这个出了“毛病”的过滤器滤过的细菌培养液,保持了几个月都未污染细菌的事实也没能改变他的看法。
这也难怪,因为他生活在巴斯德细菌致病说的极盛时代,没有足够的勇气冲破思想上的无形禁区。
倒是荷兰的一位细菌学家贝叶林克(Beijerinck)敢于正视现实,于1898年重复和肯定了伊万诺夫斯基的结果并且证明显微镜下看不到病原物,试管里用培养细菌的方法也培养不出来,但它能扩散到凝胶中。
因此得出结论认为病原是一种比细菌还小的“有传染性的活的流质”。
不难看出,真正发现病毒存在的是贝叶林克,给病毒起拉丁名叫“Virus”也是他。
1898年德国细菌学家勒夫勒(Loeffer)和费施(Frosch)发现引起牛口蹄疫的病原体也可以通过细菌滤器。
1915-1917年图尔特(Twort)和迪海莱(D'Herelle)都分别发现了细菌噬菌体。
欧洲许多国家从事马铃薯退化病的研究,特别是在荷兰以Quanjer为首的研究者,在30年代证明了马铃薯退化病是有传染性的。
那时Virus一词传到中国,有人把它译成“毒素”。
我国微生物学界的老前辈俞大绂先生最初直译为“威罗斯”,后来改为“病毒”即能致病的毒物。
同时我国著名的植物病毒学家周家炽先生建议把“疒”和“毒”字加在一起,成为一个双音的单字,可惜没有被大家接受。
1935年斯坦利(Stanley)首次获得了烟草花叶病毒(TMV)的结晶,Kausche于1939年在电镜下看到了TMV,1952年Harris揭示了TMV外壳蛋白的化学性质。
1955年FraenkelConrat成功地将TMV的核酸及其蛋白亚单位重建出感染性的TMV,1956年FraenkelConrat证明TMV-RNA分子具有侵染性。
到1960年,Tsugita测定了TMV外壳蛋白的氨基酸序列;1980年完成了TMV核酸全序列的测定,到1986年Beachy领导大的研究小组成功地获得了抗病毒的转基因烟草,开辟了防治植物病毒的新途径。
病毒学发展大事记
年份
科学家
主要成就
1798
琴纳(E.Jenner)
接种牛痘预防天花
1885
巴斯德(L.Pasteur)
制成狂犬疫苗
1892
伊万诺夫斯基(Iwanovski)
发现TMV病原的滤过性
1898
贝叶林克(M.W.Beijerinck)
证实TMV的滤过性病原
洛夫勒(F.Loeffler).
发现口蹄疫病原的滤过性
1915
图尔特(F.W.Twort)
发现噬菌体
迪海莱(F.D'Herelle)
发现噬菌体
1935
斯坦利(W.M.Stanley)
获得TMV结晶
1939
考齐(G.A.Kausche)
在电镜下看到TMV
1949
恩德尔(J.J.Enders)等.
利用单层细胞培养脊髓灰质炎病毒
1952
赫尔希(A.D.Hershey)
证明一种噬菌体DNA具有感染性
杜尔贝科(Dulbecco)
利用单层细胞培养进行蚀斑试验
1956
弗伦克尔-康拉特()等
证明TMV-RNA分子具有侵染性
1957
伊萨克(Isaacs)等.
发现干扰素
1960
次田(A.Tsugita)等.
测定了TMV外壳蛋白的氨基酸序列
1965
斯皮格曼(S.Spiegelman)
成功地在体外复制了Qβ噬菌体RNA
1967
迪纳尔(T.O.Diener)等
阐明类病毒的本质
1968
亨雷(G.Henle)等.
揭示EBV与传染性单核细胞增多症及Burkitt淋巴瘤有关
1970
特明(H.M.Temin)巴尔的摩(D.Baltimore)
发现逆转录酶
1977
桑格(F.Sanger)等
测定了φX174的DNA全序列
1979
谷口(T.Taniguchi)
人干扰素基因工程宣告成功
1983
蒙塔格尼(Montagnier)嘎洛(R.C.Gallo)
分离到与AIDS相关的人类逆转录病毒
1985
巴登(derPatten)等
利用逆转录病毒为载体将外源基因导入小鼠
1982
普什纳(Prusiner)
提出朊病毒
1984
发现CD4+是HIV受体
1996
发现HIV的协同受体
病毒的形态和结构
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