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关于民族药雪里见的薄层鉴别研究
【编者按】:
医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
的论说性文章。
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关于民族药雪里见的薄层鉴别研究
【摘要】目的建立雪里见药材的定性分析方法。
方法采用薄层色谱法。
结果方法快
速,简单可行,重复性好。
结论可作为控制雪里见药材质量的标准。
【关键词】雪里见;薄层鉴别;-谷甾醇
雪里见药材为天南星科植物雪里见ArisacmarhizmatumC.E.C.Fiseh.的根茎。
又名半
截烂、躲雷草、避蛇参等,为恩施自治州常用的民族药,主要用于风湿痹痛,肢体麻
木,劳伤疼痛,跌打损伤,结核性溃疡,疮痈肿毒,毒蛇咬伤等,疗效确切;临床上治
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疗风湿性关节炎作用尤为显著。
虽然雪里见的治疗作用明显,但长期以来,对雪里见
的报道大多是资源调查和成分分析;定性分析方法除了显微特征[1]外,还没有薄层鉴别
的报道。
为了有效控制雪里见的质量,笔者对雪里见的薄层鉴别法进行了实验研究。
据资料报道[2],雪里见的主要成分为-谷甾醇,因此笔者用-谷甾醇作对照品,从
提取方法、展开剂和显色剂的选择几方面对雪里见的薄层色谱方法进行探研,拟定出
鉴别方法。
现报道如下。
1材料与仪器
雪里见药材样品3批(批号080701,080925,080601);-谷甾醇对照品(批号080208);
硅胶G板(自制板和商品板);紫外线分析暗箱(型号YOKO-ZX),超声波清洗器(型号
KQ-50B),电热恒温干燥箱(型号GZX-DH);试剂:
三氯甲烷、乙醇、硫酸、羧甲基纤
维素钠(均为分析纯)。
2方法与结果
2.1提取溶剂的选择雪里见主要成分为-谷甾醇,可溶于三氯甲烷和乙醇等。
因此笔
者选用三氯甲烷为提取溶剂。
采用超声提取,过滤。
方法简单快捷。
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2.2显色剂的选择-谷甾醇具有甾体结构,应与磷钼酸,硫酸等发生颜色反应。
笔者
将雪里见药材与对照品-谷甾醇分别溶解、点样、展开后,采用常用的10%的磷钼酸
试液喷后显色和10%硫酸乙醇溶液喷后加热显色两种方法对比。
结果显示,雪里见药
材与对照品-谷甾醇在相同的位置上,均能显出明显的斑点。
但用磷钼酸显色时,有
拖尾现象。
而用10%硫酸乙醇溶液喷后加热显色,不仅日光下能看见斑点,而且置紫
外光灯(365nm)下检视,荧光斑点非常清晰,无干扰,较用磷钼酸显色更易判断。
因此
笔者认为显色剂采用10%的硫酸乙醇溶液为宜。
2.3展开剂的选择-谷甾醇分子中含有羟基具极性。
因此笔者分别用三氯甲烷-甲
醇、三氯甲烷-乙醇、三氯甲烷-乙醚作展开剂进行试验,结果显示供试品与对照品在相
同位置均能显出相同颜色的斑点。
但用三氯甲烷-乙醚作展开剂时,杂质斑点太多,易
产生干扰。
用三氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-乙醇作展开剂,产生的杂质斑点较少,而采用
三氯甲烷-甲醇作展开剂,展开后Rf值更适宜。
所以笔者确定采用三氯甲烷-甲醇为展
开剂用三氯甲烷-甲醇为展开剂时,笔者分别采用(10∶3)、(10∶1)、(20∶1)、(40∶1)
不同比例进行比较,经过多次试验确认(40∶1)最合适。
2.4薄层色谱方法在对提取溶剂、显色剂、展开剂探研的基础上,笔者拟定雪里见药
材薄层鉴别法如下。
2.4.1供试品溶液的制备取本品粉末1g,加三氯甲烷20ml,超声处理20min,过
滤,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷1ml使溶解,即为供试品溶液。
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2.4.2对照品溶液的制备取-谷甾醇对照品,用三氯甲烷制成每毫升含2mg的溶
液,作为对照品溶液。
2.4.3薄层色谱方法[3]吸取上述供试品溶液10l,对照液2l,分别点于同一以羧甲基
纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板(自制板或商品板)上,以三氯甲烷-甲醇(40∶1)为展
开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;置紫外灯(365nm)
下检视,显相同颜色的荧光斑点(日光下色谱图见TLC图1-a,紫外光灯下色谱图见
TLC图1-b)。
a-日光下检视b-紫外光灯下检视1.雪里见(来凤产,批号080601)1.雪里
见(来凤产,批号080601)2.雪里见(贵州产,批号080701)2.雪里见(贵州产,批号
080701)3.雪里见(贵州产,批号080925)3.雪里见(贵州产,批号080925)4.-谷甾醇对照
品4.-谷甾醇对照品图1雪里见的TLC图
3结论
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荷叶的化学成分及其药理作用的研究进展
作者:
王福刚,曹娟,刘斌,王伟,高允生
【摘要】概述了荷叶中的化学成分及其降脂减肥、抑菌、抗氧化等药理活性的研究
进展,以期为荷叶功能成分的合理开发与利用提供参考。
【关键词】荷叶;化学成分;药理活性
荷叶(Lotusleaf)为睡莲科植物莲NelumbonuciferaGaertn.的干燥叶,据《本草纲
目》记载,荷叶服之,令人瘦劣、生发元气,裨助脾胃。
1991-11中华人民共和
国卫生部卫监发(1991)第45号文件中,荷叶被列入第二批既是食品又是药品的名
单,其在食用及药用两方面均有较广泛的应用[1],具有清热解暑、升发清阳、凉血止
血之功效,主要用于暑热烦渴,暑湿泄泻,血热吐衄,便血崩漏等症[2]。
近年来国内
外学者对荷叶进行了系统研究,发现其主要含有生物碱、黄酮、挥发油等成分,其中
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黄酮和生物碱类化合物的生物活性较高,因而近年来人们加大了对这两种化学成分的
研究。
药理研究表明,荷叶主要具有调脂减肥、抗氧化抗衰老、抑菌作用。
本文对荷
叶的化学成分、药理研究进行了总结,希望为荷叶的进一步研究提供参考。
1化学成分
荷叶的化学成分十分复杂,至今已从荷叶中分离出生物碱、黄酮、挥发油、有机
酸、皂苷、甾体等多种化学成分。
1.1黄酮类成分研究表明,荷叶中含有以槲皮素为主要成分的黄酮类物质,且含量非
常丰富[3]。
Elegami等[4]从荷叶中分离出NympholideA,NympholideB和Myricetin-
3-(6-p-coumaroyl)-glucoside3种黄酮类物质。
田娜等[5]从荷叶中分离出金丝桃苷
(hyperin)、异槲皮素(quercetin)、紫云英苷(Astragalin)、槲皮素4(Quercetin)4种黄酮
类成分。
张贇彬等[6]从荷叶中分离出山萘酚(kaempferol)和槲皮素-3-丙酯。
王玲玲等[7]
从荷叶中首次分离得到异鼠李素(Isorhamnetin)、槲皮素-3-O--D-吡喃木糖(12)--D-吡喃
葡萄糖苷和柯伊利素-7-O--D-葡萄糖苷3种黄酮类成分。
1.2生物碱类成分[8]
荷叶生物碱的发现始于19世纪初,是研究最早也是最多的一类天然有机化合物,自
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日本学者福田真雄等从荷叶中分离出荷叶碱(Nuciferine),莲碱(Roemerine)及O-去甲
基荷叶碱(O-Nornuciferine)3个单体成分以来,至今已从叶中分离出16个生物碱化合
物。
根据母核结构不同可将荷叶生物碱分为以下3类。
1.2.1单苄基异喹啉类包括亚美异粟碱(armepavine),衡州乌药碱(co-claurine)[9],N-
甲基异衡州乌药碱(N-methylisococlaurine),N-甲基衡州乌药碱(N-methylcoclaurine),O-
去甲基异衡州乌药碱(O-methylcoclaurine)。
1.2.2阿朴啡类包括荷叶碱(nuciferine),N-去甲基荷叶碱(N-nornuciferine),O-去甲基
荷叶碱(O-nornuciferine),番荔枝碱(又名牛心果碱)(anonaine),莲碱(roemerine),去氢番
荔枝碱(Dehydroanonaine),鹅掌揪碱(liriodenine),N-去甲基亚美罂粟碱(N-
norarmepavine),2-羟基-1-甲氧基阿朴啡(2-hydroxy-1-methoxyaporphine)。
1.2.3去氢阿朴啡类包括去氢荷叶碱(dehydronuciferinene),去氢莲碱(又名去氢罗默
碱)(dehydroroemerine)。
1.3挥发油类成分尹慧晶等[10]采用均匀设计法以萃取压力、萃取温度、萃取时间为
因素,考察超临界CO2萃取荷叶的最佳萃取工艺条件并对萃取物进行GC-MS分析,
从萃取物中分离出37个可识别峰,共鉴定26个成分,主要成分为1-乙基-吡咯-2-甲
醛。
曾虹燕等[11]用超临界CO2萃取和水蒸气蒸馏法提取荷叶挥发油,利用GC-MS对
它们进行了定性、定量分析。
超临界萃取所得的荷叶挥发油共分离出66个峰,鉴定出
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54种成分,占其挥发油相对总含量的89.45%;主要化学成分为反式石竹烯、反式异柠
檬烯、十六酸、11-14-二烯二十酸甲酯、白菖油萜、3,7,11,15-四甲基-2-十六烯-1-
醇、-法呢烯。
水蒸气蒸馏所得的荷叶挥发油共分离出41个峰,鉴定出31种成分,
占其挥发油总相对含量的94.13%;水蒸气蒸馏所得挥发油的主要化学成分为反式石竹
烯、反式异柠檬烯、1-莰醇、-2-葎草烯、4-甲基-1-异丙基-3-环己烯-1-醇、环辛烯、
樟脑、白菖油萜、2-炔-1-醇。
1.4有机酸类成分在荷叶中发现了酒石酸(tartaricacid)、柠檬酸(citricacid)、苹果酸
(malicacid)、草酸(oxalicacid)、葡萄糖酸(maltonicacid)、琥珀酸(amberacid)、没食子
酸(gallicacid),正十八烷酸(stearicacid),苯甲酸(benzoicacid),邻羟基苯甲酸(O-
hydroxybenzoicacid)等有机酸和非挥发性有机酸[12]。
1.5其他类成分荷叶中还含有-谷甾醇、胡萝卜苷、-胡萝卜素、鞣质、皂类、甾
体、维生素C[13]、荷叶多酚[14]、原花青素[15]、碳水化合物、脂质、蛋白质、荷叶
多糖及抗有丝分裂作用的碱性成分[16]。
2药理作用
2.1调脂、减肥作用用含有不同荷叶成分的提取物对高脂血症模型大鼠进行灌胃研
究,结果表明均有降脂的功效,主要活性部位为黄酮和生物碱。
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NergardCS等[17]以高脂血症大鼠为整体模型,观察荷叶水煎剂对血清总胆固醇(TC)
和甘油三酯(TG)的影响,结果表明荷叶水煎剂能使的TC下降25.6%~39.3%,TG下降
18.9%~39.2%,对HDL-C未见明显影响,但随TC、TG的降低,LDL-C显著下降;同
时荷叶水煎剂能降低全血比粘度、红细胞压积,从而改善血液浓粘状态,说明荷叶水
煎剂具有明显降脂作用。
涂长春等[18]以荷叶生物总碱给高脂血症大鼠灌胃,荷叶生物
总碱2.14~10.7mg/kg均可降低肥胖大鼠的TG、TC,与模型组比较有显著差异性(P
0105或P0101),且存在一定剂量依赖性,但对HDL-C作用不明显,中、大剂量的荷
叶生物碱对AI有显著的降低作用。
叶德强等[19]以荷叶黄酮提取物喂饲新西兰兔,结
果显示荷叶黄酮可降低肝脏APN的表达和血清LAP,改变血脂水平,有助于预防胆囊
胆固醇结石的形成。
经实验证明荷叶提取物对人体具有较好的降脂作用,且无毒[20]。
2.2抗氧化及抗衰老作用荷叶不同提取物均有抗氧化作用,余以刚等[21]采用电子自
旋共振法自旋捕集技术研究了荷叶水提物(LLE)对羟基自由基(OH)和超氧阴离子自由
基(O2-)的清除效果。
结果显示26.94gml-1的LLE对次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系产生
O2-的清除率达65.6%,LLE浓度大于8.98mgml-1时可以全部清除由Fenten反应体
系产生的OH,大约40gml-1的LLE就可以清除O2-。
可见荷叶的水提物是一种较
好的抗氧化剂,在较低的浓度下即可显示出非常强的抗氧化能力。
邓胜国等[22]分别采
用DPPH法、硫氰酸铁(FTC)法及硫代巴比妥酸(TBA)法测定和评价荷叶黄酮的抗氧化
效果,实验结果表明,荷叶黄酮具有良好的DPPH清除能力,在油脂自动氧化体系
中,荷叶黄酮均显示出较强的抑制亚油酸氧化的能力。
当荷叶黄酮的浓度为0.3mgml-
1时,其抗氧化能力最强,可与0.01%BHI相媲美。
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2.3抑菌作用荷叶提取物抑菌作用明显,张贇彬等[23]研究发现荷叶乙醇提取物对青
霉,酵母菌,黑曲霉,红酵母都有一定的抑菌作用,并且随着提取物浓度的增大,抑
菌作用增强;在同一浓度下对不同菌的抑菌效果不同,对酵母菌、红酵母比较敏感,对
青霉、黑曲霉抑菌作用稍次之,荷叶乙醇提取物对4种菌的最低抑菌和最低杀菌浓度
约在20~2000mgL-1之间。
2.4其他作用荷叶生物碱成分具有抗病毒、抗炎抗过敏作用[24];荷叶总生物碱对平滑
肌有解痉作用和抗有丝分裂的作用,对胰脂肪酶有抑制作用[25];荷叶提取物有抑制
HIV增殖的作用[26]。
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本实验采用的薄层色谱法经
过自制硅胶G板与商品硅胶G的比较,结果一致。
本鉴别方法采用超声提取,方法快速,非常简单。
笔者对多批雪里见药材进行了相同方法的实验,本文仅用3批样品作代表,结果显
示,在相应位置上均显相同颜色的斑点,重复性好,说明方法可行。
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【参考文献】
[1]吴绍敏,杨红艳.土家名药半截烂资源调查及生药学研究[J].中国民族民间医药杂
志,2005,3:
177.
[2]周杰,国兴明,徐裕彬,等.贵州中药雪里见化学成分分离和纯化的初步研究[J].
山地农业生物学报,2005,3:
265.
[3]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:
化学工业出版社,2005:
附录31.
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