银杏叶片微生物限度检查法适用性试验.docx
- 文档编号:25924227
- 上传时间:2023-06-16
- 格式:DOCX
- 页数:21
- 大小:24.48KB
银杏叶片微生物限度检查法适用性试验.docx
《银杏叶片微生物限度检查法适用性试验.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《银杏叶片微生物限度检查法适用性试验.docx(21页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
银杏叶片微生物限度检查法适用性试验
编号:
QT-QC-122-1512
验证文件
项目名称:
银杏叶片微生物限度检查法适用性试验
方案编号:
QT-VP-QC-122-1512
报告编号:
QT-VR-QC-122-1512
证书编号:
QT-VC-QC-122-1512
归档日期:
一、验证方案
二、验证报告
三、验证批准证书
文件编号:
QT-VP-QC-122-1512
银杏叶片微生物限度检查法适用性试验方案
方案起草
方案起草人
起草日期
方案审核
方案审核人
审核日期
审核日期
审核日期
审核日期
方案批准
方案批准人
批准日期
1.验证参加人员及其职责
部门
姓名
职责
QC
验证方案起草、负责实施
QA
负责取样,进度跟踪及信息沟通
质量技术部
验证方案、报告审核,负责验证组织实施、评价及偏差调查
质量技术部
验证方案、报告审核与批准
2.概述
银杏叶片是我公司生产的口服固体片剂,主要用于活血化瘀通络。
用于瘀血阻络引起的胸痹、心痛、中风、半身不遂、舌强语謇;冠心病稳定型心绞痛、脑梗死见上述证候者。
其处方为
单位处方批生产量
银杏叶提取物 40g50kg
微晶纤维素 27.6g34.4kg
淀粉 100.8g126kg
蔗糖 20.8g26kg
硬脂酸镁 0.8g1kg
30%乙醇 72g90kg
制成1000片125万片
主要工艺为原辅料过筛,称量,混合制粒,沸腾干燥,整粒,总混,压片,包衣,铝塑包装,外包。
经前期方法确认,本品不具有抑菌性(见银杏叶片微生物方法检查验证报告编号VP-QC-026),确认检查方法为:
取本品10g,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,溶解,混匀,制成1:
10均匀供试液。
细菌数、霉菌和酵母菌数检查:
取1:
10供试液按常规法检查(平皿法)。
3.验证目的
由于中国药典2015年版四部1100生物检查法之1105、1106非无菌产品微生物限度检查法与2010年版规定的方法和条件有所变化,现对新版药典规定的检查法适用性进行确认,以确认所采用的方法适合本产品的无菌检查。
4.接受标准
4.1需氧菌总数、霉菌和酵母菌
试验组各试验菌回收率在50%-200%。
若各试验菌的回收试验均符合要求,照所用的供试液制备方法及计数方法进行本产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。
若还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求,可选择回收最接近要求的方法和试验条件进行本产品的检查。
4.2控制菌(大肠埃希菌)
试验若检出试验菌,按本供试液制备方法和控制菌检查方法进行本品检查;若未检出试验菌,应设计新的方法消除本品的抑菌活性,并重新进行确认。
5.验证前准备
5.1样品来源:
浙江佐力药业股份有限公司生产。
5.2培养基:
购买市售所需培养基,培养基有:
胰酪大豆胨琼脂培养基(北京三药),沙氏葡萄糖琼脂培养基(北京三药),胰酪大豆胨液体培养基(北京三药),麦康凯液体培养基(北京三药),麦康凯琼脂培养基(北京三药)等。
5.3.菌种:
药检所购买。
大肠埃希菌(CMCC(B)44102)、枯草芽胞杆菌(CMCC(B)63501)、金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)、白色念珠菌(CMCC(F)98001)、黑曲霉(CMCC(F)98003)、铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104)。
5.4.仪器与试验材料:
蒸汽灭菌器、净化工作台、无菌隔离舱、集菌培养器(每套3联管)、接种环、试管、刻度吸管、移液管、量筒、酒精灯、75%酒精、镊子等。
5.5.环境监测
无菌隔离舱内及物体表面擦拭消毒,系统能正常启动并保持良好运行,尘埃粒子和沉降菌检测结果符合百级洁净级别要求。
5.6.参与人员已经培训并能充分理解验证方法及操作步骤。
6.参考文献:
《中国药典》2015版四部通则1105、1106非无菌产品微生物限度检查法
7.菌液制备方法
7.1接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的新鲜培养物少许至胰酪大豆胨琼脂培养基上,接种生孢梭菌的新鲜培养物少许至硫乙醇酸盐流体培养基中,30℃~35℃培养18~24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物少许至沙氏葡萄糖琼脂培养基上,20℃~25℃培养24~48小时。
取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液,2~8℃保存,备用(注配制好的菌悬液应尽快使用,尽可能在24小时内使用)。
7.2接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培斜面培养基上,20℃~25℃培养5~7天,加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,用接种环轻轻将孢子洗脱。
然后用一支10ml无菌球形毛细吸管,其管口用无菌纱布包扎,吸出孢子菌液至无菌试管内,用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的孢子悬液,2~8℃保存,备用。
7.3注意事项
菌悬液配制的稀释过程中,每一级稀释液混合震荡必须充分。
由于菌种为具有特殊活性的生物,菌种的状态、接种量及培养时间对最终菌悬液配制浓度都有影响,因此试验中应严格按照已确定的实验参数。
制备好的原菌悬液以当天使用为宜。
自我保护,防止感染。
7.4菌液计数方法
每次制备菌液量约100ml,将制备好的菌液充分摇匀,用灭菌移液管吸取1ml,置适宜的灭菌试管中,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml,然后充分摇匀,作为10-1倍稀释菌液,再从10倍稀释菌液管吸取1ml,置适宜的灭菌试管中,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml,充分摇匀,作为10-2倍稀释菌液,依次稀释,制备一系列稀释菌液,将各稀释菌液取1ml,涂布于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,接种于胰酪大豆胨琼脂培养平皿中,每种菌液作平行样,30℃~35℃培养18~24小时,计数,取菌液浓度在小于100cfu/ml稀释级的菌液作为供试菌悬液。
白色念珠菌、黑曲霉菌液取1ml分别接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平皿中,每种菌液作平行样,20℃~25℃培养24~48小时,计数。
生孢梭菌培养应在厌氧培养专用袋中培养。
每稀释取样时,移液管须更换,每步稀释菌液应充分混匀,吸取体积要准确。
宜选取10-4~10-8稀释级菌液计数。
8.计数方法验证
验证试验分3组,三批分次独立试验,并分别计算供试品组和对照组试验的菌回收率。
8.1供试品溶液制备
取银杏叶片10g,置适宜三角瓶中,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(可适当均匀加热,温度不超过45℃)100ml,振摇,制成1:
10供试品溶液。
如需稀释时,用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。
8.2试验组
取供试品溶液1ml和适量试验菌(使每ml供试液含菌量不大于100cfu),注入直径90mm的无菌平皿中,每个平皿注入15-20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,倒置培养。
每株试验菌平行2个平皿,按平皿法测定其菌落数,以算术均值作为计数结果。
胰酪大豆胨琼脂培养基培养温度30℃~35℃培养3天(其中接种白色念珠菌和黑曲霉的培养5天);沙氏葡萄糖琼脂培养基20℃~25℃培养5天,计数。
8.3菌液组
取稀释液代替供试液,按试验组操作加入试验菌液,对各试验菌逐一进行微生物回收试验。
8.4供试品对照组
取上述供试品溶液1ml注入平皿,以稀释液代替菌液同试验组操作。
8.5回收率计算
试验组菌回收率(%)=(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)×100%/菌液组平均菌落数
9.控制菌(大肠埃希菌)
9.1菌液制备和计数方法同7.菌液制备方法
9.2供试液的制备8.1供试品溶液制备
9.3试验菌
取供试品溶液10ml和不大于100cfu的大肠埃希菌至100ml的胰酪大豆胨液体培养基中,混匀,按微生物限度检查法标准操作规程(SOP-QC-A-005)之大肠埃希菌检查法检查,在规定的温度和最短时间下培养,观察能否检出大肠埃希菌的反应特征。
9.4阴性对照
取相应稀释液10ml替代供试品溶液,同试验菌试验同法操作,应能检出大肠埃希菌的反应特征。
10.总结与评价
对验证过程及结果进行评估,评估内容包括是否严格按既定的方案组织实施,验证是否按进行了三次独立的试验,培养基的适用性检查是否进行并符合要求,标准菌株管理及试验菌液的制备是否合理,任何偏差是否列入偏差分析并进行调查。
11.再验证计划
若检验程序或产品发生变化可能影响结果时,应重新进行方法适用性试验。
文件编号:
QT-VR-QC-122-1512
银杏叶片微生物限度检查法适用性试验报告
报告起草
方案起草人
起草日期
报告审核
报告审核人
审核日期
审核日期
审核日期
审核日期
报告批准
报告批准人
批准日期
1.验证参加人员及其职责
部门
姓名
职责
QC
验证方案起草、负责实施
QA
负责取样,进度跟踪及信息沟通
质量技术部
验证方案、报告审核,负责验证组织实施、评价及偏差调查
质量技术部
验证方案、报告审核与批准
2.概述
银杏叶片是我公司生产的口服固体片剂,主要用于活血化瘀通络。
用于瘀血阻络引起的胸痹、心痛、中风、半身不遂、舌强语謇;冠心病稳定型心绞痛、脑梗死见上述证候者。
其处方为
单位处方批生产量
银杏叶提取物 40g50kg
微晶纤维素 27.6g34.4kg
淀粉 100.8g126kg
蔗糖 20.8g26kg
硬脂酸镁 0.8g1kg
30%乙醇 72g90kg
制成1000片125万片
主要工艺为原辅料过筛,称量,混合制粒,沸腾干燥,整粒,总混,压片,包衣,铝塑包装,外包。
经前期方法确认,本品不具有抑菌性(见银杏叶片微生物方法检查验证报告编号VP-QC-026),确认检查方法为:
取本品10g,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,溶解,混匀,制成1:
10均匀供试液。
细菌数、霉菌和酵母菌数检查:
取1:
10供试液按常规法检查(平皿法)。
3.验证目的
由于中国药典2015年版四部1100生物检查法之1105、1106非无菌产品微生物限度检查法与2010年版规定的方法和条件有所变化,现对新版药典规定的检查法适用性进行确认,以确认所采用的方法适合本产品的无菌检查。
4.接受标准
4.1需氧菌总数、霉菌和酵母菌
试验组各试验菌回收率在50%-200%。
若各试验菌的回收试验均符合要求,照所用的供试液制备方法及计数方法进行本产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。
若还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求,可选择回收最接近要求的方法和试验条件进行本产品的检查。
4.2控制菌(大肠埃希菌)
试验若检出试验菌,按本供试液制备方法和控制菌检查方法进行本品检查;若未检出试验菌,应设计新的方法消除本品的抑菌活性,并重新进行确认。
5.验证前准备
5.1样品来源
表1
序号
产品批号
规格
生产单位
1
151201
总黄酮醇苷9.6mg萜类内酯2.4mg
浙江佐力药业股份公司
2
151202
总黄酮醇苷9.6mg萜类内酯2.4mg
浙江佐力药业股份公司
3
151203
总黄酮醇苷9.6mg萜类内酯2.4mg
浙江佐力药业股份公司
5.2培养基及适用性检查
表2
序号
名称
批号
有效期至
生产厂商
1
胰酪大豆胨液体培养基
150303
2018.03.02
北京三药科技开发公司
2
沙氏葡萄糖琼脂培养基
150709
2018.07.08
北京三药科技开发公司
3
沙氏葡萄糖液体培养基
2017.05.07
北京三药科技开发公司
4
胰酪大豆胨琼脂培养基
150916
2018.09.15
北京三药科技开发公司
5
麦康凯琼脂培养基
2016.03.04
北京三药科技开发公司
6
麦康凯液体培养基
150924
2018.09.23
北京三药科技开发公司
7
PH7.0氯化钠蛋白胨-缓冲液
150211
2018.02.10
北京三药科技开发公司
上述培养基均经过培养基适用性检查方法检查且符合要。
5.3标准菌种
浙江省食品药品检验研究院。
表3
序号
名称
编号
菌种代数
来源
1
大肠埃希菌
CMCC(B)44102
5
浙江省食品药品检验研究院
2
枯草芽胞杆菌
CMCC(B)63501
3
浙江省食品药品检验研究院
3
金黄色葡萄球菌
CMCC(B)26003
5
浙江省食品药品检验研究院
4
白色念珠菌
CMCC(F)98001
3
浙江省食品药品检验研究院
5
黑曲霉
CMCC(F)98003
3
浙江省食品药品检验研究院
6
铜绿假单胞菌
CMCC(F)10104
5
浙江省食品药品检验研究院
5.4仪器与试验材料:
主要设备情况
表4
序号
设备名称
型号
状态
1
湿热灭菌柜
MJ-78A(B176)
正常
2
生物安全柜
BHC-1300ⅡA2(B236)
正常
3
细菌培养箱
GNP-9160(B052)
正常
4
霉菌培养箱
MJ-250-I(B094)
正常
5.5环境监测
5.5.1微生物限度检测室检测情况
表5
相对湿度(%)
不同洁净级别相邻房间压差(Pa)
消毒、灭菌情况
尘埃粒子数
沉降菌数
符合要求
≥10
按洁净区管理制度要求进行消毒和灭菌
符合D级洁净度要求
符合D级洁净度要求
结论
符合环境要求。
5.5.2阳性菌室洁净室检测情况
表6
相对湿度(%)
不同洁净级别相邻房间压差(Pa)
消毒、灭菌情况
尘埃粒子数
沉降菌数
符合要求
≥10
按洁净区管理制度要求进行消毒和灭菌
符合C级洁净度要求
符合C级洁净度要求
结论
符合环境要求。
5.5.3生物安全柜检测情况
表7
型号
风速
消毒、灭菌情况
尘埃粒子数
沉降菌数
生物安全柜
BHC-1300ⅡA2(B236)
≥0.35m/s
按净化工作台管理制度要求进行消毒和灭菌
符合A级洁净度要求
符合A级洁净度要求
结论
符合环境要求。
6.6参与人员培训
参与人员已经严格培养,并能正确理解验证内容及具体操作。
6.7参考文献:
《中国药典》2015版四部通则1105、1106非无菌产品微生物限度检查法
7.菌液制备方法
7.1接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的新鲜培养物少许至胰酪大豆胨琼脂培养基上,接种生孢梭菌的新鲜培养物少许至硫乙醇酸盐流体培养基中,30℃~35℃培养18~24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物少许至沙氏葡萄糖琼脂培养基上,20℃~25℃培养24~48小时。
取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液,2~8℃保存,备用(注配制好的菌悬液应尽快使用,尽可能在24小时内使用)。
7.2接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培斜面培养基上,20℃~25℃培养5~7天,加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,用接种环轻轻将孢子洗脱。
然后用一支10ml无菌球形毛细吸管,其管口用无菌纱布包扎,吸出孢子菌液至无菌试管内,用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的孢子悬液,2~8℃保存,备用(按12小时、24小时、48小时、72小时分别计数,考察其菌薮变化情况,确定其贮存期限)。
7.3注意事项
菌悬液配制的稀释过程中,每一级稀释液混合震荡必须充分。
由于菌种为具有特殊活性的生物,菌种的状态、接种量及培养时间对最终菌悬液配制浓度都有影响,因此试验中应严格按照已确定的实验参数。
制备好的原菌悬液以当天使用为宜。
自我保护,防止感染。
7.4菌液计数方法
每次制备菌液量约100ml,将制备好的菌液充分摇匀,用灭菌移液管吸取1ml,置适宜的灭菌试管中,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml,然后充分摇匀,作为10-1倍稀释菌液,再从10倍稀释菌液管吸取1ml,置适宜的灭菌试管中,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液9ml,充分摇匀,作为10-2倍稀释菌液,依次稀释,制备一系列稀释菌液,将各稀释菌液取1ml,涂布于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,接种于胰酪大豆胨琼脂培养平皿中,每种菌液作平行样,30℃~35℃培养18~24小时,计数,取菌液浓度在小于100cfu/ml稀释级的菌液作为供试菌悬液。
白色念珠菌、黑曲霉菌液取1ml分别接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平皿中,每种菌液作平行样,20℃~25℃培养24~48小时,计数。
生孢梭菌培养应在厌氧培养专用袋中培养。
每稀释取样时,移液管须更换,每步稀释菌液应充分混匀,吸取体积要准确。
宜选取10-4~10-8稀释级菌液计数。
记录按无菌检查标准操作规程(SOP-QC-A-043)之菌液制备及活菌计数记录(SOP-QC-A-043-R-02)填写。
记录及结果见附件。
8.计数方法验证
验证试验分3组,三批分次独立试验,并分别计算供试品组和对照组试验的菌回收率。
8.1供试品溶液制备
取银杏叶片10g,置适宜三角瓶中,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(可适当均匀加热,温度不超过45℃)100ml,振摇,制成1:
10供试品溶液。
如需稀释时,用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。
配制记录见本微生物检查记录。
附件。
8.2试验组
产品批号:
151201
试验菌
枯草芽胞杆菌
金黄色葡萄球菌
白色念珠菌
铜绿假单胞菌
黑曲霉
平行
81
79
65
7
68
均值
80
68
86
79
72
试验菌
白色念珠菌
黑曲霉
平行
71
69
64
68
均值
70
66
产品批号:
1512.2
试验菌
枯草芽胞杆菌
金黄色葡萄球菌
白色念珠菌
铜绿假单胞菌
黑曲霉
平行
76
82
66
72
81
79
76
84
74
68
均值
79
69
80
80
71
试验菌
白色念珠菌
黑曲霉
平行
68
64
72
66
均值
66
69
产品批号:
151203
试验菌
枯草芽胞杆菌
金黄色葡萄球菌
白色念珠菌
铜绿假单胞菌
黑曲霉
平行
73
79
69
71
84
78
77
73
71
79
均值
76
70
81
75
75
试验菌
白色念珠菌
黑曲霉
平行
73
75
65
69
均值
74
67
8.3菌液对照组
产品批号:
151201
试验菌
枯草芽胞杆菌
金黄色葡萄球菌
白色念珠菌
铜绿假单胞菌
黑曲霉
平行
93
97
73
81
91
97
82
92
92
88
均值
95
77
94
97
84
试验菌
白色念珠菌
黑曲霉
平行
78
84
79
81
均值
81
80
产品批号:
151202
试验菌
枯草芽胞杆菌
金黄色葡萄球菌
白色念珠菌
铜绿假单胞菌
黑曲霉
平行
91
95
73
81
91
97
82
92
92
88
均值
93
77
94
97
84
试验菌
白色念珠菌
黑曲霉
平行
85
79
84
78
均值
82
81
产品批号:
151203
试验菌
枯草芽胞杆菌
金黄色葡萄球菌
白色念珠菌
铜绿假单胞菌
黑曲霉
平行
91
95
76
84
91
97
83
87
92
88
均值
93
80
94
85
84
试验菌
白色念珠菌
黑曲霉
平行
87
89
88
78
均值
88
83
8.4供试品对照组
供试品本底菌数。
产品批号
2
151203
需氧菌总数
霉菌及酵母菌总数
需氧菌总数
霉菌及酵母菌总数
需氧菌总数
霉菌及酵母菌总数
平行
0
均值
0
0
0
0
0
0
8.5试验菌株回收率计算
试验组菌回收率(%)=(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)×100%/菌液组平均菌落数。
试验组菌回收率(%)
产品批号
2
151203
平均回收率(%)
枯草芽胞杆菌回收率
84.2
84.9
81.7
83.6
金黄色葡萄球菌回收率
88.3
89.6
87.5
88.5
白色念珠菌回收率
需氧菌
91.5
85.1
86.2
87.6
霉菌及酵母菌
86.4
80.5
84.1
83.7
铜绿假单胞菌回收率
81.4
82.5
88.2
84.0
黑曲霉回收率
需氧菌
85.7
84.5
89.3
86.5
霉菌及酵母菌
82.5
85.2
80.7
82.8
结论
符合规定
符合规定
符合规定
符合规定
9.控制菌(大肠埃希菌)
9.1菌液制备和计数方法同7.菌液制备方法
9.2供试液的制备8.1供试品溶液制备
9.3试验菌及阴性对照
依法检查,记录微生物限度检查法(SOP-QC-A-005)之非无菌产品微生物限度检查原始记录(SOP-QC-A-005-R-01)。
10.总结与评价
对验证过程及结果进行评估,评估内容包括是否严格按既定的方案组织实施,验证是否按进行了三次独立的试验,培养基的适用性检查是否进行并符合要求,标准菌株管理及试验菌液的制备是否合理,任何偏差是否列入偏差分析并进行调查。
11.再验证计划
若检验程序或产品发生变化可能影响结果时,应重新进行方法适用性试验。
附件:
附件1:
附件2
验证证书
验证项目名称
银杏叶片微生物限度检查法的方法学验证
验证文件编号
QT-VC-QC-122-1509
产品规格
每粒0.33g
验证报告日期
年 月 日
方法描
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 银杏 叶片 微生物 限度 检查法 适用性 试验