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微生物
一、名词解释
微生物学:
是研究微生物形态、生理、遗传变异、生态分布、分类及其与人类关系的科学。
灭菌:
指杀灭物体中所有病原微生物和非病原微生物及其芽胞、霉菌孢子的方法。
消毒:
杀灭物体中的病原微生物的方法。
消毒只要求达到消除传染性的目的,而对非病原微生物及其芽胞、孢子并不严格要求全部杀死。
抗生素:
某些微生物在代谢过程中产生的一类能抑制或杀死另一些微生物的物质。
细菌素:
某种细菌产生的一种具有杀菌作用的蛋白质,只能作用于与它同种不同菌株的细菌以及与它亲缘关系相近的细菌,如大肠菌素。
菌落:
在固体培养基上,由单个细胞繁殖形成的肉眼可见的子细胞群体。
质粒:
细菌染色体外的共价闭合环状双链DNA分子,是细菌染色体外的遗传物质。
正常菌群:
由正常动物的体表或体内腔道的微生物所构成的。
侵袭力:
病原菌突破机体的防御屏障在机体内生长繁殖,蔓延扩散的能力。
类毒素:
外毒素在0.4%甲醛溶液作用下,经过一段时间可以脱毒,但仍保留原有抗原性。
抗毒素:
外毒素刺激机体产生特异性的抗体,可用于紧急治疗和预防。
无特定病原体动物:
是指不存在某些特定的具有病原性的或潜在病原性微生物的动物。
包涵体:
是某些病毒感染细胞产生的特征性的形态变化。
在普通光学显微镜下可见胞浆或胞核内出现的呈嗜酸或嗜碱性染色,大小数量不等的,不规则圆形的团块状结构,称为包涵体。
干扰素:
病毒感染刺激细胞产生的具有活性的免疫调节作用的糖蛋白。
细胞病变效应:
病毒感染导致的细胞损伤。
朊病毒:
仅具有传染性蛋白质而无核酸的病原体。
热源质:
菌体中的脂多糖大多是革兰氏阴性细菌产生的,注入人或动物体内能引发热效应。
(少数G+,多数G-产生的多糖耐热物质)
街毒:
从自然发病的病例中分离的病毒。
固定毒:
经实验室人工制弱的病毒株
病毒子:
病毒一般以病毒颗粒或病毒子的形式存在
生物被膜:
是一群附着在动物皮肤、呼吸道、消化道或生殖道粘膜表面或无生命的物体等表面的微生物。
二、细菌总论
1、细菌细胞壁革兰氏阳性和阴性的异同
革兰氏阳性菌:
细胞壁较厚,肽聚糖和磷壁酸和少量脂类组成,无外膜,脂蛋白和脂多糖
革兰氏阴性菌:
细胞壁较薄,肽聚糖含量少,脂类含量多,无磷壁酸,有外膜、脂蛋白和脂多糖
2、细菌的特殊结构及其功能
基本结构:
细胞壁,胞浆膜,细胞浆,间体,核体,核糖体,内含物
特殊结构:
荚膜,鞭毛,菌毛,芽胞。
荚膜:
某些细菌的细胞壁外围包绕的一层粘液样的物质
S层:
由单一的蛋白质亚单位组成的生物膜
鞭毛:
菌体表面长出的丝状物
菌毛:
菌体上生长的一种比鞭毛短的毛发状细丝
芽孢:
在一定环境下菌体内形成的圆形或卵圆形休眠体
荚膜:
抗吞噬作用S层:
作为分子筛和离子通道鞭毛:
是运动器官,有抗原性
菌毛:
不是运动器官,有较强的黏附作用芽孢:
对高温、干燥、辐射有较强的抵抗力。
3、瑞氏染色的步骤和结果:
取病料涂片、自然干燥
滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醛所固定;
加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5分钟;
水洗、吸干、镜检。
结果:
细菌染成蓝色,组织细胞胞浆红色,细胞核蓝色或紫色。
4、革兰氏染色的步骤和结果:
①结晶紫初染②碘液媒染③95%乙醇脱色④沙黄复染
革兰氏染色的结果:
若呈蓝色,则是革兰氏阳性菌;若呈红色,则是革兰氏阴性菌。
5、细菌在代谢过程中生成的产物(有害、无害)
有害的有:
毒素、热原质、侵袭性酶类
无害的有:
自身结构、色素、抗生素、细菌素、光、热、维生素类、芳香物质
6、内外毒素的区别
(1)组成不同。
外毒素是某些病原菌在生长繁殖过程中产生的对宿主细胞有毒性的可溶性蛋白质。
内毒素特指革兰氏阴性菌外膜中的脂多糖成分
(2)分泌方式不同。
外毒素在菌体内合成后必须分泌于胞外。
内毒素是细菌在死亡破裂或用人工方法裂解菌体后才释放。
(3)特性不同
外毒素:
毒性作用极强、具有高度的特异性
内毒素:
毒性作用极弱、极度耐热,耐酸,耐碱
7、细菌毒力的测定:
半数致死量指能使接种的实验动物在感染后一定时限内死亡一半所需的微生物量或毒素量。
8、热源质的特点:
多糖耐热物质(多数为革兰氏阴性和少数的革兰氏阳性),除去方法:
蒸馏。
9、什么是生长曲线?
细菌群体生长繁殖分几个时期?
各个时期有何特点?
生长曲线:
将细菌接种在液体培养基并置于适宜的温度中,定时取样检查活菌数,可发现其生长过程具有规律性。
以时间为横坐标,以活菌数对数为纵坐标,可得出一条生长曲线。
细菌群体的生长繁殖分4个时期:
迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期。
迟缓期:
此时菌体增大、代谢活跃。
RNA含量明显增多,DNA无变化,此时细菌数并不增加。
对数期:
细菌繁殖迅速,呈2ⁿ增长,生长曲线接近一条斜的直线。
该期病原菌致病力最强,其形态染色特性及生理活性均较典型,对抗菌药物等的作用较为敏感。
稳定期:
因营养消耗、代谢产物蓄积等,此时新繁殖的活菌与死菌平衡,活菌数最多。
该期形态染色不特异。
产生毒素等代谢产物。
衰亡期:
细菌死亡速度加大,繁殖速度变小。
此期菌体变形或自溶,染色不典型,难以鉴定。
10、正常菌群存在的意义
正常菌群的存在保持了机体的微生态学平衡,同时维持了宿主的健康状态。
11、外界因素对微生物的影响
温度——
低温:
大多数微生物对低温有很强的抵抗力,低温下,代谢活动降低。
低温的意义:
保存菌种、毒苗、疫苗等。
高温:
高温对微生物有明显的致死作用。
巴氏消毒法:
以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物,而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法。
巴氏消毒的三个温度:
1.低温维持巴氏消毒法63~65℃,30min
2.高温瞬时巴氏消毒法71~72℃,15s
3.超高温巴氏消毒法132℃,1~2s
紫外线的杀菌作用:
波长200-300nm部分具有杀菌作用,以265-266nm的杀菌力最强。
作用机理:
损害DNA构型,影响DNA的复制和转录;使空气中的氧分子变成臭氧而具有杀菌作用。
12、油镜镜头的标志及放大倍数
油镜,放大倍数为90或100(镜头上有标识“100/1.25”),有时标以“油”或“oil”,镜头最长;用来观察细胞内部结构及细菌等微生物(病毒除外)的形态结构。
油镜使用时必须使用香柏油。
13、培养基中氯化钠、磷酸二氢钾的作用
培养基里含有磷酸二氢钾是为了增加K和P元素
NaCl:
提供营养元素Na+,Cl¯,维持渗透压
14、培养基做好后为什么要立即高压蒸汽灭菌?
在配制培养基过程中落入培养基中的微生物,如果不灭菌,杂菌就会开始利用培养基中的营养物质开始生长繁殖,因为这就造成了培养基的污染。
所以一般要在配制完培养基之后马上灭菌。
三、病毒总论
1、病毒的特点、化学组成
特点:
(1)形体微小,缺乏细胞结构
(2)只含有一种核酸,DNA或RNA;
(3)以自身的核酸为模板进行复制;
(4)缺乏完整的酶和能量系统;
(5)严格的细胞内寄生(利用宿主细胞的核糖体和转移RNA合成病毒的蛋白质)
化学组成:
(1)核酸:
只含有一种核酸,DNA或RNA
(2)蛋白质:
结构蛋白(组成病毒颗粒的蛋白),非结构蛋白(在复制过程中产生的中间产物酶)
(3)脂类、糖类
2、带囊膜的结构特点
(1)囊膜与宿主细胞膜融合,病毒的核衣壳直接进入细胞浆内
(2)病毒胞饮:
细胞膜吞入
3、病毒分离培养的方法,优缺点
(1)动物接种:
优-易接种,易成功,易观察;缺-污染环境,有危险
(2)鸡胚接种:
优-操作简单,成本较低;缺-有局限性,一般采用孵化9-12天的鸡胚,按病毒种类不同接种于鸡胚的不同部位。
(3)细胞培养:
优-a.每个细胞生理特性基本一致,对病毒易感性相等b.无个体差异,准确性和重复性好c.可严格执行无菌操作d.细胞培养本身就能显示病毒的生长特征e.应用空斑技术可进行病毒的克隆化
4、什么是复制周期?
包括几个阶段?
一个完整的复制周期主要包括吸附、穿入和脱壳、生物合成、组装和释放四个步骤。
(1)病毒基因组一旦从衣壳中释放后,就利用宿主细胞提供的低分子物质合成大量的病毒核酸和结构蛋白。
(2)早期,病毒复制合成所必需的复制酶和一些抑制蛋白
(3)生物合成阶段,病毒处于隐蔽期
(4)根据病毒基因组如何转录成mRNA、如何指令合成蛋白质,病毒的生物合成过程可基本归为6大类:
双股DNA病毒、单股DNA病毒、单正股RNA病毒、单负股RNA病毒、逆转录病毒和双股RNA病毒。
5、干扰素的作用机理
抗病毒作用(机理):
干扰素不直接作用于病毒,而是作用于邻近的细胞,使其产生抗病毒蛋白,这些抗病毒蛋白降解病毒mRNA、抑制蛋白合成。
干扰素作用具有宿主特异性,而无病毒特异性。
6、衣壳的对称形式
①螺旋对称②二十面体对称③复合对称
7、衣壳的作用
(1)保护病毒核酸,使之免遭环境中的核酸酶和其它理化因素破坏。
(2)参与病毒的感染过程。
因病毒引起感染首先需要特异地吸附于易感细胞表面,而无包膜病毒是依靠衣壳吸附于细胞表面的。
(3)具有良好的抗原性,诱发机体的体液免疫与细胞免疫,这些免疫应答不仅有免疫防御作用,而且可引起免疫病理损害,与病毒的致病有关。
8、培养病毒的细胞类型
①原代细胞:
动物组织经胰蛋白酶消化处理,使细胞分散而得到的细胞。
②二倍体细胞:
将长成的原代细胞消化分散成单个细胞,继续培养传代,其细胞染色体数与原代细胞一样,仍为二倍体。
③传代细胞:
能在体外持续增殖传代的细胞,大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。
9、病毒的测量单位:
纳米(nm)
10、病毒用抗生素治疗可行吗?
病毒对抗生素是不敏感的。
抗生素的主要作用部位是细胞壁和核糖体,而病毒都没有这些结构,但在病毒感染的同时会伴随免疫力的下降,常用抗生素来防止继生性感染。
11、为什么75%的酒精比95%的酒精消毒的效果好?
95%的酒精会使细菌表面蛋白质迅速凝固,形成了一层薄膜,阻止了酒精继续向内部渗透,细菌内部的细胞不能彻底杀死。
而用75%的酒精则可以彻底杀死细菌。
四、细菌各论
三个重点胞内菌:
1、李氏杆菌:
革兰氏染色阳性,需氧或兼性厌氧,短杆状;不形成荚膜、无芽胞,有鞭毛有运动性;生长温度为1-45℃,最适生长温度为30-37℃。
普通琼脂平板可生长,在血清或全血琼脂培养基上生长良好,加入适量葡萄糖或甘油生长更佳。
2、布氏杆菌:
革兰氏阴性需氧杆菌,柯兹罗夫染色法染成红色。
球形或短杆形;多单在,无芽胞,无荚膜,无鞭毛不运动。
S型菌落无色透明,表面光滑湿润。
R型菌落不太透明,多呈颗粒状。
有时出现黏液型(M)菌落。
3、牛分枝杆菌:
革兰氏阳性菌,细长微弯的杆菌,无荚膜,无芽孢,无鞭毛;染色采用抗酸染色;有特殊的糖脂成份,能有效刺激动物免疫系统,可制免疫佐剂——弗氏佐剂。
细菌特点及其引起疾病
猪链球菌:
革兰氏阳性球菌,无荚膜、芽孢、鞭毛;引起猪脑膜炎、关节炎、肺炎、心内膜炎,因败血症死亡。
人感染后表现脑膜炎、败血症等。
金黄色葡萄球菌:
革兰氏阳性球菌,个别形成荚膜,无芽孢、鞭毛;引起两类疾病:
1、化脓性疾病:
主要引起化脓性炎症。
通过各种途径侵入机体,导致皮肤或器官的各种感染,甚至败血症。
2、毒素性疾病:
由葡萄球菌产生的外毒素引起。
大肠杆菌:
革兰氏阴性杆菌,散在或成对,周毛菌,有菌毛。
大多数为肠道正常菌群,少部分致病菌,引起腹泻。
沙门氏菌:
革兰氏阴性杆菌,处鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌无鞭毛不运动外,其余均以周边毛运动。
是一种重要的人畜共患病,很容易在人与人,人与动物、动物与动物之间传播,根据宿主适应性不同可分为:
(1)专嗜性:
如鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌;
(2)偏嗜性:
如猪霍乱和都柏林个沙门氏菌;(3)泛嗜性:
如肠炎和鼠伤寒沙门氏菌。
巴氏杆菌:
革兰氏阴性菌,瑞氏染色或美蓝染色,中央微凸短杆状,引起出血性败血症、肺炎,如猪蹄疫。
禽霍乱等。
嗜血杆菌:
酶系统不完全的革兰氏阴性杆菌,多为短杆状,有时呈多形性,无鞭毛、芽胞,新分离的致病菌株有荚膜。
G-菌,两极着色。
引起人和多种动物发病,其毒力因子包括荚膜、菌毛和内毒素等。
与兽医有关的嗜血杆菌有:
(1)、副猪嗜血杆菌:
可引起猪的心肌炎、腹膜炎、胸膜炎以及关节炎等,常与猪流感病毒联合引起猪流感。
(2)、副禽嗜血杆菌:
可引起鸡传染性鼻炎,导致产蛋量迅速下降。
炭疽芽孢杆菌:
革兰氏阳性,菌体平直,两端平截。
在组织和血液中,单在或短链,经培养后形成长链。
在组织中或含血液的培养基中可形成荚膜。
芽孢在有氧条件下形成,位于菌体中央,不膨出菌体。
无鞭毛。
毒力与荚膜和毒素有关,与EF或LF与PA结合时,才有致死或水肿效应。
本菌可引致各种家畜、野兽和人类的炭疽,草食动物易感性最强,此菌主要通过消化道传染,也可经呼吸道及皮肤创伤或通过吸血昆虫传播。
产气荚膜梭菌:
革兰氏染色阳性,一般条件下不形成芽胞,在无糖培养基上可形成。
芽胞大而卵圆,位于菌体中央或近端,使菌体膨胀。
多数菌株可形成荚膜,无鞭毛。
A型:
人气性坏疽和食物中毒;B型:
羔羊痢疾:
C型:
绵羊猝狙;D型:
牛肠毒血症;E型:
犊牛、羔羊肠毒血症。
破伤风梭菌:
革兰氏染色阳性,两端钝圆、细长的杆菌,无荚膜,多具周鞭毛而能运动。
在动物体内外均能形成圆形芽胞,位于菌体一端,呈鼓槌状,或顶芽胞。
此菌产生两种毒素:
(1)破伤风痉挛毒素:
引起神经兴奋性的异常增高和骨骼肌痉挛。
(2)破伤风溶血素:
不耐热,对氧敏感,可溶解马及家兔的红细胞,与破伤风梭菌的致病性无关。
重点细菌
1、布氏杆菌
分类9个种(马耳他布氏杆菌、流产布氏杆菌、猪布氏杆菌、绵羊布氏杆菌、沙林鼠布氏杆菌、犬布氏杆菌、田鼠布氏杆菌、牛布氏杆菌、海豚和海豹布氏杆菌)
(1)染色特点:
革兰氏染色阴性,但着色不佳。
柯兹罗夫染色法染成红色,其他菌呈绿色。
(2)细菌培养:
①本菌专性需氧,在初代分离培养时尚需5%-10%CO2,泛酸钙和内消旋赤藓糖醇可刺激某些菌株生长。
在培养基中加入少量血液、血清或肝浸液可促进生长,不溶血。
生长缓慢,常需5-10d甚至20-30d。
②液体培养基上呈轻微浑浊生长,时间长可形成很厚的菌膜;在固体培养基上有S、M、R型菌落,大小不一。
(3)临床症状及感染特点:
①主要致病物质有内毒素、荚膜和透明质酸酶。
侵袭力强,可通过完整的皮肤、粘膜进入体内,并有很强的繁殖与扩散能力。
动物体内常局限于腺体组织与生殖器官(与赤藓醇含量较高有关),故病畜主要表现为睾丸炎、附睾炎、乳腺炎、子宫炎等。
孕期动物对布氏杆菌最敏感,感染后常引起流产。
(4)临床诊断:
①细菌学检查:
意义不大。
血清学检查:
用已知的布氏杆菌检查动物的血清抗体
②凝集试验(虎红平板凝集试验)感染初期检测。
大动物血清凝集价达1:
100时阳性,1:
25可疑;小动物1:
50为阳性,1:
25为可疑。
补体结合试验:
慢性布氏杆菌病诊断。
规定1:
10被检血清阻止溶血
③变态反应检测
2、炭疽芽孢杆菌
(1)芽孢位置:
菌体中央
(2)细菌培养:
1.需氧菌或兼性厌氧,最适生长温度30℃-37℃,营养要求不高,普通培养基中即能生长良好。
2.在血琼脂上一般不溶血,但个别菌株也可轻微溶血。
3.液体培养基中呈絮状沉淀生长4.明胶穿刺培养,呈倒松树状,表面液化呈漏斗状5.在含青霉素的培养基中,可形成串珠反应,与其它需氧芽孢杆菌区别。
3、产气荚膜梭菌
(1)革兰氏染色阳性
(2)血清型:
A,B,C,D,E五个血清型
(3)致病动物:
人、牛、羔羊、绵羊、犊牛
4、结核分枝杆菌
(1)特殊染色方法:
抗酸染色
(2)染色结果:
红色
(3)特殊染色原因:
细胞壁有特殊的糖脂。
革兰氏染色不易着色。
(4)特殊培养方法:
专性需氧菌,对营养要求严格,在添加特殊营养物质的培养基(罗杰二氏培养基)上才能生长,但生长缓慢。
(5)卡介苗的制备:
即将牛分枝杆菌在含甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年230代传代而获得的减毒活疫苗株,现广泛用于预防接种。
(6)牛结核病诊断方法
1.涂片镜检:
抗酸染色红色
2.分离培养:
强酸或强碱处理后接种罗杰二氏培养基
3.细菌鉴定:
培养特性、生化特性4.动物接种:
兔有致病性
5.变态反应:
PPD皮内注射法,4mm以上为阳性;2-4mm为可疑;2mm以下为阴性。
6.血清学检查:
ELISA检测特异性抗体
7.免疫特点:
(1)机体产生的抗体,无保护作用。
(2)以细胞免疫为主。
(3)传染性免疫(带菌免疫)。
5、葡萄球菌
(1)分类:
①金黄色葡萄球菌:
多数致病
表皮葡萄球菌:
偶可致病
腐生葡萄球菌:
不致病
(2)金黄色葡萄球菌引起的疾病:
①化脓性疾病:
主要引起化脓性炎症。
通过各种途径侵入机体,导致皮肤或器官的多种感染,甚至败血症。
②毒素性疾病:
由葡萄球菌产生的外毒素引起。
(3)毒力因子:
主要包括酶和毒素
6、大肠杆菌
(1)分类:
根据毒力因子与发病机制不同,将病原性大肠杆菌分为5类:
①产肠毒素大肠杆菌(ETEC)
②产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC)
③肠致病性大肠杆菌(EPEC)
④尿道致病性大肠杆菌(UPEC)
⑤败血性大肠杆菌(SEPEC)
(2)产毒素大肠杆菌的毒力因子:
引起人和动物腹泻,主要毒力因子有两类:
黏附素:
菌毛能黏附宿主的小肠上皮细胞,虽不是直接的致病因子,却是首要的毒力因子。
肠毒素:
分泌到胞外的一种蛋白质性毒素。
(1)不耐热肠毒素,对热敏感,可转变成类毒素,具有A和B亚单位。
(2)耐热肠毒素,耐热,分子量小,无免疫原性。
7、沙门氏杆菌
(1)主要抗原成分:
①菌体抗原(O抗原):
其成分为LPS的多糖侧链。
至少60种,耐热,1个菌株可含多种,以阿拉伯数字表示。
②鞭毛抗原(H抗原):
其成分为蛋白质,不耐热,63种。
③荚膜抗原(K抗原):
与毒力有关,又称Vi抗原。
有的菌株有,有的菌株无。
可抗补体系统的溶解作用及吞噬细胞的吞噬作用。
8、巴氏杆菌
(1)细菌中的特殊颗粒。
(2)染色:
瑞氏染色或美蓝染色;结果为两极弄染。
(3)引起疾病名字:
出血性败血症、肺炎,如猪肺疫、禽霍乱等。
口蹄疫病毒
猪蓝耳病
(猪繁殖与呼吸综合征病毒)
禽流感病毒
传染性法氏囊病病毒
狂犬病病毒
小反刍兽疫病毒
新城疫病毒
猪圆环病毒
犬细小病毒
猪瘟病毒
病毒名称
微RNA病毒科
动脉炎病毒科
正黏病毒科
双RNA病毒科
弹状病毒科
副黏病毒科
副黏病毒科
圆环病毒科
细小病毒科
黄病毒科
科
无
有
有
无
有
有
有
无
无
有
有无囊膜
单股正链RNA
不分节段
单股正链RNA
单负链RNA
分节段
双股RNA
单负链RNA
不分节
单负链RNA
单负链RNA
不分节段
单股环状DNA
单股线状DNA
正链单股RNA
遗传物质种类
各型间无交叉免疫性
有传染性
有2种纤突H和N
有2个血清型
有血凝性
有血凝性
有血凝性
抵抗力强
病原特点
20面体对称
立体对称
螺旋对称
20面体对称
螺旋对称
螺旋对称
螺旋对称
20面体对称
20面体对称
20面体对称
衣壳空间结构
口蹄疫
流产、死胎
高致病性禽流感
传染性法氏囊病
狂犬病
小反刍兽瘟
新城疫
呼吸消化综合症
出血性肠炎
心肌炎
猪瘟
病症
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