清心石斛花旗参为例 MV Template Ver01.docx
- 文档编号:25759602
- 上传时间:2023-06-13
- 格式:DOCX
- 页数:18
- 大小:68.42KB
清心石斛花旗参为例 MV Template Ver01.docx
《清心石斛花旗参为例 MV Template Ver01.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《清心石斛花旗参为例 MV Template Ver01.docx(18页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
清心石斛花旗参为例MVTemplateVer01
清心石斛花旗參方法學考察
說明:
此方法學考察的基礎是建基於CP2005年版,
並按CP2010年版方法學考察為指導,全面評核及補充
此為更新版本。
【名稱】清心石斛花旗參膠囊
【處方】藥材:
西洋參225g石斛113g三七112g
【製法】
【性狀】本品為棕色殼淺綠色身0號膠囊,內容物為淡黃色的粉末。
味微苦回甜,有特有參味。
【檢查】檢查本品,均符合膠囊劑項下有關的各項規定(《中國藥典》2010年版一部附錄IL)。
方法考察試驗-鑒別
薄層鑒別成份及方法選擇說明:
(適用於其他成份有干擾及解釋選擇測試方法說明),如果是前者,一切圖片補充於參考文獻後(附錄).
清心石斛花旗參膠囊薄層鑒別測定-自行研發
鐵皮石斛對照藥材(臣藥石斛)
1.對照葯材溶液的製備
對照藥材溶液的製備:
另取鐵皮石斛對照藥材粉末1g,同法制成對照藥材溶液。
2.供試品、空白樣品及陰性樣品溶液的製備
供試品溶液的製備:
取樣品粉末各1g,置具塞三角燒瓶中滴加氨水6滴,潤濕,密封放置15分鐘,加氯仿5ml,超聲1小時,再于50℃溫浴2小時,放冷濾過,濾液濃縮至乾,殘渣加氯仿0.1ml,為供試品溶液。
陰性對照溶液的製備:
按處方除去石斛按制法工藝製成缺石斛陰性對照溶液,同供試品處理方法製成缺石斛陰性對照溶液。
3.色譜條件
薄層色譜儀,檢測器
CamagLinomat5&CamagReprosat3
薄層板
MerckkGaATLCSilicagel60F254/自製薄層板-固定相為硅胶G
展開劑
氯仿-甲醇(10:
0.8)置氨飽和展開缸內
展距
10cm
溫度
25°C
濕度
50%
點樣量
對照葯材:
10μl,供試品:
10μl
顯色方法
噴以碘化鉍鉀試液(II)
檢視方式
日光
正常測試結果
供試品色譜中,在與鐵皮石斛對照葯材色譜相應位置上,顯相同顏色斑點。
4.測試方法
照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VIB),吸取上述三種溶液各10μl(必要時可增大或減小點樣量),分別點於同一硅膠G薄層板上,以氯仿-甲醇(10:
0.8)為展開劑,在氨蒸氣飽和下展開,展開,取出,晾乾,噴以碘化鉍鉀試液(II)溶液,置日光下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點。
實驗方法
1.儀器
薄層色譜儀,檢測器
CamagLinomat5&CamagReprosat3
分析天秤
ShimadzuAuy220
薄層板
MerckkGaATLCSilicagel60F254
*如手製板可以寫例如
自製薄層板-固定相為硅胶G
2.化學品
試劑:
氯仿
鹽酸
氨
碱式硝酸鉍
甲醇
碘化鉀
試劑均為分析純或色譜純。
3.試藥
清心石斛花旗參膠囊(批號:
1307082);陰性對照樣品(按處方除去西洋參、三七按制法工藝製成)。
4.對照葯材
名稱
牌子
批號
鐵皮石斛
中國藥品生物製品檢定所提供
121501-201201
測試結果
應用照薄層色譜法,供試品色譜中,在與鐵皮石斛對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點(附圖1),陰性樣品檢測中也沒有對照藥材色譜相應的斑點。
圖1.清心石斛花旗參膠囊
1234
斑點1
鐵皮石斛對照藥材
斑點2
缺石斛陰性對照
斑點3-4
清心石斛花旗參樣品
參考文獻:
1)中華人民共和國藥典2010年版一部,附錄VI薄層色譜法
方法考察試驗-含量測定
含量測定成份及方法選擇說明:
(適用於其他成份有干擾及解釋選擇測試方法說明),如果是前者,一切圖譜補充於參考文獻後(附錄).
清心石斛花旗參膠囊含量測定-自行研發
人參皂苷Rb1(君藥西洋參)
1.對照品溶液的製備
精密稱取人參皂苷Rb1對照品約25.0mg,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得(每1ml中含人參皂苷Rb12.50mg)。
2.供試品、空白樣品及陰性樣品溶液的製備
供試品溶液的製備取本品細粉約2.0g,精密稱定,置錐形瓶中,精密加入甲醇100ml,稱定重量,加熱回流1.5小時,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續濾液作為供試品溶液。
空白樣品溶液的製備按以上的製備方法,除去樣品製備空白樣品溶液。
缺西洋參、三七陰性樣品溶液的製備按處方除去西洋參、三七,照制法工藝製成陰性樣品。
取陰性樣品,同供試品溶液的製備方法處理,製成缺西洋參、三七陰性樣品溶液。
4.色譜條件
高效液相色譜儀
AgilentHP1260/HP1100
檢測器
Agilent二極體陣列檢測器
色譜柱
AlltimaC18250mm4.6mm,5µm
流動相
時間(分鐘)
乙腈(%)
水用磷酸調整pH值至3(%)
0
20
80
20
40
60
30
20
80
時間
30分鐘
後運行時間
10分鐘
色譜柱溫度
25oC
流速
1.0ml/min
檢測波長
203nm
進樣量
10l/20l
實驗方法
1.儀器
高效液相色譜儀
Agilent–HP1260,HP1100
分析天秤
ShimadzuAuy220
色譜柱
AlltimaC18250mm4.6mm,5µm
2.化學品
試劑
甲醇
乙腈
水
試劑均為分析純或色譜純,水為三重蒸餾水。
3.試藥
清心石斛花旗參(批號:
1307082);
陰性對照樣品(按處方除去西洋參、三七按制法工藝製成)。
4.對照品
名稱(純度)
牌子
批號
人參皂苷Rb1(92.9%)
中國藥品生物製品檢定所提供
110704-201122
4.系統適用性
4.1.儀器精密度:
精密吸取對照品溶液(0.4812mg/mL)10l,重複進樣6次,測定,記錄峰面積,求得相對標準偏差%RSD。
表1.儀器精密度(所使用儀器AgilentHP1260)
進樣號
人參皂苷Rb1峰面積
峰面積平均值
RSD(%)
1
979.48106
975.87312
1.50
2
976.22278
3
956.42792
4
991.09070
5
990.98389
6
961.03235
4.2.理論塔板數及分離度:
從精密度樣品1的圖譜取得待測峰及其鄰峰的半峰寬及保留時間,以半峰寬及保留時間計算理論塔板數及分離度。
表2.系統適用性
參數
理論塔板數
分離度
得到的資料
240875
1.90
要求
4000
≥1.50
結論
合格
合格
結論:
系統適用性的目的是要確定這系統是合適的。
測試結果表1列出儀器的精密度相對標準偏差%RSD<2.0%。
測試結果表2列出理論塔板數4000及分離度1.50。
結果顯示這系統適合測試人參皂苷Rb1的含量。
測試結果
1.線性及範圍
精密稱取人參皂苷Rb1對照品25.9mg,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得(每1ml中含人參皂苷Rb12.40611mg)。
根據下表,用甲醇稀釋貯存液以製備標準曲線:
溶液
抽取貯存液容量(ml)
總容量(ml)
濃度(mg/mL)
工作溶液1
0.50
5
0.2406
工作溶液2
1.00
5
0.4812
工作溶液3
1.50
5
0.7218
工作溶液4
2.00
5
0.9624
工作溶液5
2.50
5
1.2031
製備含人參皂苷Rb10.2406mg/mL至1.2031mg/mL的標準曲線溶液,取得溶液的峰面積,得到的峰面積與對應的進樣量作標準曲線圖並進行線性回歸。
表3.人參皂苷Rb1的線性
操作儀器
AgilentHP1260
操作日期
14-11-2013
進樣量
10uL
進樣濃度(mg/ml)
進樣量(mg)
人參皂苷Rb1的峰面積
0.2406
0.002406
484.03537
0.4812
0.004812
977.85388
0.7218
0.007218
1448.63440
0.9624
0.009624
1913.96240
1.2031
0.012031
2420.85376
線性回歸方程
Y=199897.1493X+6.1444
R
0.9999
線性回歸的要求R>0.9980
合格
圖2人參皂苷Rb1的標準曲線
表4.人參皂苷Rb1的線性
操作儀器
AgilentHP1100
操作日期
15-11-2013
進樣量
10uL
進樣濃度(mg/ml)
進樣量(mg)
人參皂苷Rb1的峰面積
0.2406
0.002406
502.16269
0.4812
0.004812
984.80884
0.7218
0.007218
1457.14661
0.9624
0.009624
1957.2179
1.2031
0.012031
2427.10229
線性回歸方程
Y=200418.445X+19.0012
R
0.9999
線性回歸的要求R>0.9980
合格
圖3人參皂苷Rb1的標準曲線
結論:
人參皂苷Rb1的標準曲線範圍由0.2406mg/mL至1.2031mg/mL。
測試結果表3,4及圖23性資料。
在一般的工作濃度(33–166%)均為線性,線性回歸R>0.9980。
這證明此方法在測試供試品中人參皂苷Rb1的含量,範圍能達到一定精密度、準確度和線性,測試方法適用於高低限濃度或量的區間。
2.專屬性
圖4.對照品人參皂苷Rb1的色譜圖
圖5.清心石斛花旗參膠囊樣品的色譜圖
圖6.空白樣品的色譜圖(例子)
圖7.陰性樣品的色譜圖
結論:
從色譜圖中(附錄圖4及圖5),顯示了人參皂苷Rb1是完整而獨立的。
從附錄中圖6,顯示在人參皂苷Rb1峰的保留時間並沒有無關的峰,空白樣品不會對測試造成干擾。
從附錄中圖7,陰性樣品檢測中也沒有人參皂苷Rb1的峰。
因此證明以這分析方法來檢驗樣品中人參皂苷Rb1的成份是專屬的。
3.精密度
3.1重複性:
於同一天以方法學考察的步驟預備六個相同的樣品,進樣量為10uL,以表3及表4計算每個樣品人參皂苷Rb1的含量,以相對標準偏差(%RSD)表達。
表5.人參皂苷Rb1精密度(所使用儀器AgilentHP1260及AgilentHP1100)
樣品號
1
2
3
4
5
6
取樣量(g)
2.0050
2.0046
2.0078
2.0015
2.0095
2.0010
人參皂苷Rb1峰面積值
1138.62256
1134.12730
1161.69641
1150.34387
1151.49829
1143.25403
人參皂苷Rb1含量(mg/g)
28.26
28.15
28.40
28.20
28.51
28.43
平均值(mg/g)
28.33
RSD(%)
0.50
RSD(%)<5%
合格
註:
分析樣品1,2,5,6用表1計算,分析樣品3,4用表2計算。
3.2中間精密度:
兩個操作員在不同日子準備分別準備兩個樣品,進樣量為10uL,以各自線性計算樣品在不同儀器下計算的含量結果並以相對標準偏差(%RSD)表達。
表6.人參皂苷Rb1中間精密度(所使用儀器AgilentHP1260及AgilentHP1100)
樣品號
樣品重量(g)
樣品峰面積
人參皂苷Rb1
含量(mg/g)
平均值(mg/g)
RSD(%)
RSD(%)<5%
1
2.0050
1138.62256
28.25
28.25
0.38
合格
2
2.0046
1134.12730
28.15
3
2.0078
1161.69641
28.40
4
2.0015
1150.34387
28.20
註:
分析樣品1,2用表3計算(操作員1於2013年11月14日進行),
分析樣品3,4用表4計算(操作員2於2013年11月15日進行)。
計算解釋如下表5:
表7.中間精密度試驗計算解釋
樣品號
樣品重量
(g)
樣品峰面積
每10ul所含的
人參皂苷Rb1(mg)
每100ml所含的
人參皂苷Rb1(mg)
人參皂苷Rb1含量(mg/g)
1
2.0050
1138.62256
(1138.62256-6.1444)/199897.1493=0.005665mg
(0.005665mgx100x103)/10=56.65mg
56.65/2.0050
=28.25mg/g
2
2.0046
1134.12730
(1134.12730-6.1444)/199897.1493=0.005643mg
(0.005643mgx100x103)/10=56.43mg
56.43/2.0050
=28.15mg/g
3
2.0078
1161.69641
(1161.69641-19.0012)/200418.4455=0.005702mg
(0.005702mgx100x103)/10=57.02mg
57.02/2.0078
=28.40mg/g
4
2.0015
1150.34387
(1150.34387-19.0012)/200418.4455=0.005645mg
(0.005645mgx100x103)/10=56.45mg
56.43/2.0015
=28.20mg/g
結論:
精密度是指在規定的測試條件下,同一個均勻樣品,經多次取樣測定所得結果之間的接近程度,一般以相對標準偏差(%RSD)作表示。
重複性及中間精密度為其中兩個測試。
在相同操作條件下,由同一個分析人員在較短的間隔時間內測定所得結果的精密度因重複性;在同一個實驗室,不同時間由不同分析人員用不同儀器測定結果之間的精密度為中間精密度。
從測試結果表5,表6中,重複性及中間精密度的相對標準偏差<5%,因此證明這方法提供一致的結果。
4.耐用性
4.1.供試品穩定性
在測定條件有小變動時測定供試品溶液。
取供試品溶液一份,於製備後0小時、2小時、4小時、6小時、8小時分別進樣10uL進行檢測,計算峰面面積,並以相對標準偏差(%RSD)表達。
表7.供試品穩定性(所使用儀器AgilentHP1200)
進樣時間
人參皂苷Rb1的峰面積
峰面積平均值
RSD(%)
0hr
1144.70825
1158.324146
1.01
2hr
1175.95203
4hr
1162.42615
6hr
1155.17676
8hr
1153.35754
結論:
耐用性是指在測定條件有小的變動時,測定結果不受影響的承受程度,為使方法用於常規檢驗提供依據。
在這方法學考察中,是次色譜法變動因數為測試供試品溶液的穩定性。
測試結果表7展示出供試品溶液相應面積峰在測定不同測定時間並沒有明顯的改變RSD(%)1.01%。
因此證明這變動因數能通過設計的系統適用性試驗,證明此方法有效。
1.
2.
3.
4.
5.
6.準確度
取已經測試含量的同一批號供試品6份(28.33mg/g),每份約0.6g,分別精密稱定重量後,每份精密加入對照品約14.0mg,然後照供試品溶液的製備方法處理,進樣測試其中人參皂苷Rb1的含量,進量為10μl,以表1計算其中人參皂苷Rb1的含量並計算回收率。
表8.加標樣品的製備(所使用儀器AgilentHP1260)
樣品號
取樣量(g)
樣品中人參皂苷Rb1的總含量(mg)
加入對照品的量(mg)
實測總含量(mg)
加樣回收率(%)
平均加樣回收率(%)
RSD(%)
1
0.6010
17.02
14.40
31.93
103.5
104.7
2.81
2
0.6097
17.27
14.15
32.64
108.6
3
0.6015
17.03
14.32
32.10
105.2
4
0.6048
17.13
14.20
31.30
99.8
5
0.6071
17.19
14.17
32.02
104.7
6
0.6088
17.24
14.54
32.69
106.3
結論:
準確度是指以該方法測定的結果與真實值或參考值的相似程度。
測試結果表8顯示人參皂苷Rb1回收率於90%-110%之間,相對標準偏差為<5%,證明此分析方法的準確度及重複性高。
因此證明以這分析方法能可靠地提供準確的結果。
7.含量限度-樣品測定(例子)
以多批樣品測試結果的平均值計算出產品標準:
表9.多批樣品測試結果
批號
含量(%)
平均值(%)
1307082
2.825
2.825
1307083
2.825
1307084
2.825
本品含西洋參以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計,不得少於1.00%。
【功能及主治】此方含優質西洋參(花旗參),配以正霍山石斛及三七(田七)8,功能補氣生津,滋陰提神,活血定痛,增強人體免疫功能,減少體內脂肪積聚,同時亦可使皮膚光滑,減少粉刺等皮膚問題。
【用量或使用方法】成人每日口服2次,每次1粒,溫水送服。
【使用注意事項】孕婦忌服。
十二歲或以下小童慎服。
【包裝規格】每盒一瓶,每瓶裝60粒膠囊,每粒膠囊淨重為450毫升。
【貯存指示】避免兒童免服。
貯存於室溫乾燥處。
參考文獻
1)中華人民共和國藥典2010年版一部,附錄XVIIIA中藥品質標準分析方法驗證指導原則
*註:
最後的數值均以四捨五入的方法計算
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 清心石斛花旗参为例 MV Template Ver01 清心 石斛 花旗