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食品中毒素的检测,2011级生物技术第三组,美味的外表之下深藏着毒素一常见的动物性天然毒素,动物肝脏中的毒素河豚毒素岩蛤毒素螺类毒素组胺,1动物肝脏中的毒素,大家对动物肝脏的认识也许仅仅是美味和含维生素A可以治疗夜盲症。
动物中主要的毒素有胆酸,牛磺胆酸和脱氧胆酸。
他们都是中枢神经系统的抑制剂,其中牛磺胆酸的毒素最强。
脱氧胆酸对结肠癌,直肠癌的发生有促进作用。
所以食用过多或食用时处理不当,都会对身体造成伤害。
2河豚毒素河豚鱼是一种味道鲜美却含剧毒的鱼类。
它的肝脏,皮肤,血液等都有剧毒,其中卵和卵巢的毒性最大。
河豚鱼中毒是世界上最严重的动物性食物中毒。
3岩蛤毒素它的毒素源于一些属于膝勾藻科的藻类,这种藻类大量繁殖可引起赤潮。
摄食这种藻类,他所含的岩蛤毒素及膝勾藻毒素一无毒状态积累在肠腺中,当摄食蛤肉后,毒素被释放出来。
4螺类毒素绝大多数食用安全性较高,但少数种类含有有毒物质。
5组胺组胺属于生物碱,易溶于水,是由于鱼体内的游离组氨酸在鱼中存放过程经脱胺而形成的。
组胺中毒大多由于食用不新鲜或腐败变质的鱼类引起的。
它能在弱碱条件下,与偶氮反应生成橙色物,从而被定性和定量检测。
二、常见的植物性天然毒素1氰苷氰苷进人体内水解后产生HC,从而具有较强的毒性。
含有氰苷的食源性植物有木薯、豆类以及一些果树的种子如杏仁、桃仁、枇杷仁及亚麻仁等。
氰化物在酸性条件下可产生HCN气体,HCN可使苦味酸试纸显红色,据此可对含有氰苷的物质进行定性检测。
2红细胞凝集素这是一类对红细胞具有凝集作用的蛋白质,多为糖蛋白。
含有红细胞凝集素的食源性植物有蓖麻、豆类及花生的种子。
不同植物的红细胞凝集素其毒性是不同的,以蓖麻凝集素的毒性最强,红细胞凝集素比较耐热,80数小时不能使之失活,100需经过1h可完全破坏其活性。
3皂苷也称皂素,很多豆科植物如黄豆、菜豆、蚕豆等不仅含有红细胞凝集素、氰苷,还含有有毒的皂苷。
其中菜豆中毒是天然食物中毒中较常见的。
菜豆中的毒皂苷对消化道粘膜有强烈的刺激作用。
4龙葵碱龙葵碱又名茄碱、马铃薯毒素、龙葵毒素,不溶于水,能溶于乙醇,与稀酸共热可发生分解。
龙葵碱广泛存在于马铃薯、番茄及茄子等中。
马铃薯中龙葵碱的含量一般在0.13050.01,且随着贮存时间的增加而渐增,发芽的马铃薯其幼芽及芽眼部分的含量可高达0.30.5。
人摄人0.20.4g龙葵碱即可引起中毒。
5秋水仙碱秋水仙碱是鲜黄花菜(也称金针菜)中的一种生物碱,其本身无毒,但当它进人人体后会转化成一种剧毒物质:
二秋水仙碱,后者对胃肠道、泌尿系统、神经系统等具有毒性。
成人一次摄人0.10.2mg秋水仙碱可引起中毒,摄入320mg可致死。
食用鲜黄花菜时一定要用开水焯,浸泡后,再经充分烹饪,以防中毒。
食用干黄花菜较安全。
6棉酚棉酚系萘的衍生物,在结构上有醛、烯醇及醌式三种同分异构体。
溶于中等极性的有机溶剂,不溶于水及己烷等。
棉酚对心、肝、肾及神经系统、生殖系统均有毒性。
棉酚在棉籽中的含量为0.150.28,冷榨棉籽油中可高达l1.3,因此不可食用冷榨棉籽油或毛棉籽油。
7毒蘑菇毒蘑菇所含有的有毒成分可分为生物碱类、肽类及其他化合物,根据中毒的症状可分为胃肠毒素、神经精神毒素、血液毒素、原浆毒素和其他毒素五类。
磨菇毒素的检验常用纸层析法或薄层层析法。
食品中毒素的检测,挥发性盐基氮的检测水产品中组胺的测定棉籽油中棉酚含量的检测马铃薯毒素的检测黄曲霉素B1的检测,
(一)挥发性盐基氮的检测,挥发性盐基氮,是动物性食品在腐败过程中,由细菌酶的作用使蛋白质分解而形成的物质,此类物质属带碱性的含氮物质,故也称碱性总氮(TVBN),主要包括氨及少量伯胺和叔胺等,均具有挥发性。
TVBN与动物性食品腐败程度之间有明确的对应关系,常用于判定食品的新鲜程度和确定食品质量的好坏。
TVBN的检测方法有半微量定氮法和微量扩散法。
1、半微量定氮法,原理:
样品浸提液在弱碱性(MgO)条件下,碱性含氮物质游离并被蒸馏出来,用标准酸溶液滴定计算含量。
仪器与试剂,仪器:
半微量凯氏定氮器试剂:
氧化镁混悬液(10%/L):
城区1.0g氧化镁,加100mL水,振摇成混悬液;硼酸吸收液(20g/L)0.010mol/LHCl标准液;混合指示剂(2g/L甲基红-乙醇指示液与1g/L次甲基蓝指示剂,临用时等量混合)。
实验步骤,试样处理:
将试样除去脂肪、骨或鳞等非食用部分后,绞碎拌匀,称取约10.0g,置于锥形瓶中,加100mL水,不时振摇,浸渍30min后过滤备用。
蒸馏滴定:
装好半微量凯氏定氮器,将盛有10mL硼酸吸收液及56滴混合指示剂的锥形瓶置于冷凝管下端,并使端口处于液面以下。
准确吸收5.0mL上述滤液于蒸馏器反应室内,加5mL氧化镁混悬液,迅速盖塞,并用水封口,通入蒸汽,蒸馏5min后停止。
吸收液用盐酸标准溶液滴定至蓝紫色为终点,同时做试剂空白。
注意事项,样品浸渍液可用多层纱布过滤除渣,如过滤液不马上使用,应放冰箱保存。
按GB27331996鲜、冻动物性水产品卫生标准要求,海水鱼类挥发性盐基氮含量应低于30mg/100g,淡水鱼类,鲜(冻)禽肉应低于20mg/100g(GB2710)。
2、微量扩散法,原理:
挥发性含氮物质可在37碱性溶液中释放出,挥发后被硼酸吸收液吸收,用标准酸溶液滴定,计算含量。
仪器与试剂,仪器:
微量扩散皿(标准型)。
试剂:
饱和碳酸钾溶液:
称取50g碳酸钾,加50mL水,微加热助溶,使用上清液;水溶性胶:
称取10g阿拉伯胶,加10mL水、5mL甘油、5g无水碳酸钾(或无水碳酸钠),研磨均匀。
其与试剂同半微量定氮法。
实验步骤,将水溶性胶涂于扩散皿的边缘,在皿中央内室加入1mL硼酸吸收液及1滴混和指示剂,在皿外室一侧加入1.00mL样品滤液,另一侧加1mL饱和碳酸钾溶液,注意勿使两液接触,立即盖好。
将密封后的扩散皿于桌面上轻轻转动,使样液与碱液混合,置37恒温箱内放置2h,揭开盖后用0.010mol/L盐酸标准溶液滴至终点,同时做空白试剂。
式中符号意义同半微量测定法。
(二)水产品中组胺的测定,1.原理鱼体中的组胺用正戊醇提取,遇偶氮试剂显橙色,与标准系列比较定量。
2.试剂正戊醇碳酸钠溶液(50g/L)三氯乙酸溶液(100g/L)氢氧化钠溶液(250g/L)等试剂,3.实验步骤
(1)样品处理称取510g绞碎并混合均匀的试样,置于具塞锥形瓶中,加入15.020.0mL三氯乙酸溶液,浸泡23h,过滤。
吸取2.0mL滤液,置于分液漏斗中,加氢氧化钠溶液使呈碱性。
每次加入3mL正戊醇,振摇5min,提取3次,合并正戊醇提取液于分液漏斗中,每次加3mL盐酸溶液(1+11)振摇提取3次,合并盐酸提取液并稀释至10.0mL,备用。
(2)测定吸取2.0mL盐酸提取液于10mL比色管中。
另吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL组胺标准使用液(相当于0mg、4mg、8mg、12mg、16mg、20mg组胺),分别置于10mL比色管中,加水至1mL,再各加1mL溶液(1+11)。
试样及标准试管各加3mL碳酸钠溶液、3mL偶氮试剂,加水至刻度,混匀,放置10min后用1cm比色杯以零管调节零点,于480nm波长处测吸光度。
绘制标准曲线比较,或与标准系列目测比较。
(3)计算结果,式中X样品中组胺含量,mg/100gV加入三氯乙酸溶液的体积,mLm1由标准曲线查得样品溶液中组胺的含量,gm2样品质量,g,(三)棉籽油中棉酚含量的检测,我国种植的棉花属于陆地棉及草棉,棉籽中常含有0.15%2.8%游离棉酚.冷榨棉籽油时,大部分棉酚转入棉籽油中,可高达1%3%.食用冷榨棉籽油或毛棉籽油,极易引起中毒.棉籽油中含有0.02%游离棉酚对动物健康无影响,0.05%以上时对动物有危害,国标规定,棉籽油中游离棉酚=0.02.,紫外分光光度法,原理:
样品中游离棉酚经用丙酮提取后,在378nm有最大吸收,其吸收值与棉酚量在一定范围内成正比,与标准系列比较定量。
试剂与仪器:
仪器:
紫外分光光度计试剂:
a.丙酮70:
将350mL丙酮加水至500mLb.配制棉酚标准使用液:
吸取棉酚标准溶液5.0,置于100容量瓶中,加70丙酮稀释至刻度,此溶液每毫升相当于50.0g棉酚。
主要分析步骤提取:
称取1.00三级棉籽油置于100具塞锥形瓶中,加入20.070丙酮,并加入玻璃珠粒,在电动振荡器上振荡,然后在冰箱中放置过夜.上清液,过滤。
标准系列制备:
吸取0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6棉酚标准使用液(相当于5,10,15,20,25,30g棉酚),分别置于具塞试管中,各加70丙酮至10,密塞混匀,静置10min。
测定吸光值:
取滤液及标准溶液于1cm玻璃比色杯中,以70丙酮溶液调节零点,于378nm波长处测吸光度,绘制标准曲线比较。
结果计算X=式中X-试样中游离酚棉的含量,g/100gm1-样品管中游离酚棉的质量,gm2-试样质量,g.,苯胺法,1仪器:
分光光度计2试剂:
苯胺(A.R.)丙酮70%:
同上;棉酚标准溶液:
同上;乙醇(95%),实验步骤:
称取1.0试样置于150具塞锥形瓶中,加入20mL丙酮,玻璃珠粒,剧烈震动1小时,在冰箱中过夜,过滤,滤液备用.在两支25mL具塞比色管中,各加入2mL上述滤液,以甲管为试样管,乙管为对照管,另吸取、0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0棉酚标准使用液(相当于0.0、5.0、10.0、20.0、40.0、50.0g棉酚)各两份,分别置于甲乙两组25mL具塞比色管中,各管均加入丙酮至2mL,甲组标准管与试样管甲管各加入3mL苯胺,在80度水浴中加热15min,取出冷至室温,各加入乙醇至25mL,乙组标准管与试样管乙管各加入乙醇至25mL。
两组溶液再加乙醇后均放15min,以甲组的零管为试剂空白,以一组的零管为溶剂空白,用1cm比色杯,在波长445nm处,测定两组的吸光度,以两组对应的吸光度之差,与相应标准浓度绘制标准曲线,以试样甲管与乙管的吸光度之差从标准曲线从标准曲线查出棉酚含量。
计算结果:
X=式中X-试样中游离酚棉的含量,g/100gm1-样品管中游离酚棉的质量,gm2-试样质量,g.实验要求:
精密度要求在重复条件下获得的两次独立测定的结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.,(四)、马铃薯毒素的检测,龙葵碱对胃肠道粘膜有较强刺激性和腐蚀性,对中枢神经有麻痹作用,对红细胞有溶血作用。
其中毒作用主要是通过抑制胆碱酯酶的活性而引起的。
测定龙葵碱含量的方法主要是比色法,原理龙葵碱不溶于水、乙醚、氯仿,但能溶于乙醇。
龙葵碱在稀硫酸中与甲醛溶液作用生成橙红色化合物,与520nm波长下比色测定。
仪器与试剂A仪器:
匀浆机、离心机、旋转蒸发器、721分光光度计B试剂:
龙葵碱标准溶液(精确称取0.1000g龙葵碱,以1%硫酸溶液溶解并定容至100ml,此溶液中龙葵碱浓度为1mg/mL),实验步骤A样品提取a称取捣碎的马铃薯样品20g于匀浆器中,加100mL95%乙醇,匀浆3min。
b将匀浆离心10min(4000r/min)取上清液,残渣用20mL乙醇洗涤两次,合并上清液。
将上清液浓缩至干。
用5%硫酸溶液溶解残渣,过滤后将滤液用氨水调至中性,再加12滴浓氨水调PH至1010.4,在80C水浴中加热5min,冷却后至冰箱中过夜,目的是使龙葵碱沉淀完全。
C离心弃去上清液,以1%氨水洗至无色透明,将残渣用1%硫酸溶液溶解并定容至10mL,此为龙胆碱提取液。
B标准曲线制作用龙葵碱储藏液配成100ug/mL浓度的标准使用液,分别吸取0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL龙葵碱标准使用液相当于0ug、10ug、20ug、30ug、40ug、50ug龙葵碱于10mL比色管中,用1%硫酸溶液补足至2mL,在冰浴中各滴加浓硫酸5mL,摇匀。
静置3分钟,然后在冰浴中滴加1%甲醛溶液3mL。
静置90分钟,于520nm波长下测吸光度
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