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圆二色光谱CircularDichroism(CD),洪远凯,http:
/,1.什么是圆二色谱?
旋光色散谱,2.圆二色谱在生物,医学研究中的应用,产生,特征,WhatisaLight?
1888年,Hertz,光波-电磁波,16世纪,Newton,光谱,17世纪,Huggens,偏振光,1881年,Biot,石英能使偏振光的偏振面旋转,电气石圆二色性,UV,Chiral,UV,Plane(linearly)polarizedlight,Chiral,椭圆偏振光,OpticallyActiveSample,?
X,Y,线偏振光,X,Y,Ex=E0costEy=E0cos(t-/2),Ex2+Ey2=E02,Ex=E0costEy=E0cos(t+/2),X,Y,频率相同,方向相反振幅相同,相位相同,线偏振光,参照面,频率相同,方向相反振幅相同、相位不同,线偏振光,2,参照面,1,y,y,a,x,x,R,L,椭圆偏振光,频率相同,方向相反振幅不同、相位不同,参照面,2,1,y,y,a,x,x,R,L,=tg-1(|ElEr|)/(El+Er),参照面,1,2,=(2-1)/2,左、右旋圆偏振光的合成,椭圆偏振光,OpticallyActiveSample,Chiral,Plane(linearly)polarizedlight,RightandLefthandcircularlypolarizedlight,Preferentialabsorptionoflefthandpolarized,?
振动方程,E=E0cos(t+0),Ex=E0cos(t-L/v)+0,波动方程,Ex=Eocost-(2L/)n+0,Or,L/v=2Ln/c0=2/Ln,圆二色性与振幅,A=lgI0/I=(1/2,303)lnI0/I=CL,Beer-LanmbertLaw,=2.303A/4(弧度),A=AL-AR=CL,L,Opticalactiveobject,Ex=E0cost-(2L/)n+0,?
C:
摩尔浓度L:
光程(dm)l:
degmol-1cm-1ordegcm2dmol-1,摩尔椭圆率,lthemolarellipticity,lMRw=MRwyl/100,比椭圆率ylthespecificellipticity,平均残基椭圆率lMRwthemeanresidueellipticity,l=Mwyl/100,=/CL,旋光色散与位相,?
Opticalactiveobject,=(L/)n(弧度),Dn=nl-nr,=(2L/)n,L,Ex=E0cost-(2L/)n+0,ORD(opticalrotatorydispersion),平均残基旋光度mlthemeanresiduerotation,ml=alMRw/100,C:
g/mLL:
dmMw:
molecularweightMRw:
themeanresidueMw,比旋光度lthespecificrotation,摩尔比旋光度jlthemolarrotation,jl=alMw/100,yl=/CwL,Plane(linearly)polarizedlight,基本原理(principle),RightandLefthandcircularlypolarizedlight,OpticallyActiveSample,Preferentialabsorptionoflefthandpolarized,Chiral,Ex=E0xcost-(2l/)n+0,Light,nl,nr,y,y,a,x,x,R,L,l=f(l),al=f(l),ORD,CD,Kronig-Kramerstransition,relationshipbetweenCDandORDCottoneffect,Cottoneffect,l0,e,l0,l0,+,-,+,-,Positivecottoneffect,Negativecottoneffect,Instrument,http:
/www-structure.llnl.gov/,CDapplication,Secondarystructureofmacromolecule,a-helix,a-helix:
19xnm(+)208nm,222nm(-),b-sheet:
195nm(+)antiparallel:
redshiftparallel:
blueshift215-7nm(-),b-sheet,Unorderedstructure:
(-)below200nm(+)218nmweakband,unordered,b-turn:
180-190nm(-)200-205nm(+)225nm(+)band,weakredshift,科学研究与开发,中科院某研究所根据HIV-1gp41上的两段七肽重复(heptadrepeat,HR)序列1和2(HR1和HR2)对HIV-1的侵入有抑制作用,进行了HR1和HR2的多螺旋蛋白结构与抗病毒活性的研究,所设计的五螺旋蛋白的基因为HR12121。
通过氨基酸连接子(Linker)将三个HR1的基因和二个HR2的基因连接在一起形成一种五螺旋蛋白HR12121的基因。
圆二色谱分析证明HR12121和HR212蛋白发现这两种蛋白富含螺旋结构,这表明HR12121和HR212蛋白非常稳定,不像多肽那样容易降解,并对HIV-1侵染细胞有很高的抑制活性。
目前我们已申请专利“一种抑制囊膜病毒感染的多螺旋蛋白及其编码基因与应用”。
囊膜病毒含有许多引起人类重大疾病的病毒,其中抗艾滋病毒的蛋白药物是最重要的。
合作方式:
有愿投资者,投资方可获得专利的独家使用权,约需1000-2000万元投资。
签订意向书后,具体事宜面议。
克山病探究-硒缺乏,模型动物心肌线粒体膜的CD谱,正常对照,病区粮,病区粮,补加蔬菜,烟草花叶病毒侵染膜蛋白,引自:
吉尚戎等生物物理学报,2004,20,Unfolding/folding,216nm,222nm,Conformationalvaries,216nm,CDspectraofGCN4leucinezipperinthepresenceofdifferentconcentrationsofSDS,LeucinezipperpeptidewastreatedwithSDSfor5min.ItsCDspectrawasthenmeasuredatafinalpeptideconcentrationof20M.ThefinalSDSconcentrationswere0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.6,1.0,1.2mMforcurves1,2,3,4,5,6,7,and8,respectively.Curve9isforthecompletelyunfoldedpeptidetreatedwith4Mguanidiniumchloride.Theexperimentswerecarriedoutat20oC.,Conformationaltransition:
fromalpha-helixrichtobeta-sheetrich,Scout,NearUVspectra:
toinvestigatethetertiarystructure,振动圆二色谱,X射线磁性圆二色吸收谱利用同步辐射的圆偏振和波长连续可调特性,测量铁磁性材料对方向相反的圆偏振光的吸收。
由于铁磁性材料对圆偏振光的吸收跃迁不仅取决于轨道量子数,而且与磁量子数有关,因此材料对圆偏振方向相反的光的吸收存在差异,圆二色吸收谱即是研究这种差异所表达出的信息。
ProteinConcentration:
0.5mg/mlCellPathLength:
0.5mmStabilizers(Metalions,etc.):
minimumBufferConcentration:
5mMoraslowaspossiblewhilemaintainingproteinstability,TypicalInitialConcentrations:
Onemayfindthattheproteinconcentrationneedstobeadjustedtoproducethebestdata.Changingthishasaprofoundeffectonthedata,sosmallincrementsordecrementsarecalledfor.Ifthatdoesnotproducereasonablygooddata,achangeinbuffercompositionmaybenecessary.ItwouldalsobeagoodideatocheckthesampleforunforeseenaggregationviaDynamicLightScattering(DNArepairenzymesareanespeciallygoodexampleofthisbehavior).Ifabsorptionposesaproblem,cellswithshorterpath(0.1mm)andacorrespondinglyincreasedproteinconcentrationandlongerscantimecanhelp.,参考文献,生物物理学赵南明,周海梦,高教出版社施普林格出版社2000,330园二色性和旋光色散在分子生物学中的应用鲁子贤,崔涛,施庆洛,科学出版社1987CircularDichroismandLinearDichroism,AlisonRodgerandBengtNordn,OxfordUniversityPress1997分析仪器手册朱良漪,孙亦梁,陈耕燕,化学工业出版社1997,p247CircularDichroismandOpticalRotaryDispersionofProteinsandPolypeptides,A.J.Alder,N.J.GreenfieldandG.D.Fasman,Meth.Enzymology,27,675(1973).ComputedCircularDichroismSpectrafortheEvaluationofProteinConformation,N.GreenfieldandG.D.Fasman,Biochemistry,8(10),4108(1996)C.R.CantorandP.R.Schimmel,BiophysicalChemistry,Vol.2,Chapter8(1980)EffectofTrifluoroethanolonProteinSecondaryStructure,F.D.Soennichsen,J.E.VanEyk,R.S.HodgesandB.D.Sykes,Biochemistry,31(37),8791(1992)ProteinSecondaryStructureandCircularDichroism:
APracticalGuide,W.C.Johnson,PROTEINS,7,205-214(1990),P3
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