转基因食品PCR定性检测_精品文档.ppt
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转基因食品PCR定性检测,转基因大豆及制品检测试验,参照国家标准,相关系列标准:
应用范围:
GB/T19495的本部分规定了转基因产品检测的核酸定性PCR方法。
本部分适用于种子、饲料、食品和环境样品中转基因成分的定性PCR检测。
检测原理:
一般原理:
定性分析包括对测试样品目标核算序列的筛选检测和特异性检测。
在设置合适的对照和在检测下限的情况下,定性检测结果要清楚判断样品是否为转基因产品。
本检测方法包括:
目标序列的扩增和检测,扩增片段特异性的确证。
PCR扩增目标序列的扩增是在反应缓冲液中,脱氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在DNA聚合酶的作用下进行的催化反应。
在反应混合体系中不应存在DNA聚合酶的抑制剂。
DNA扩增是一个循环的过程:
通过加热使双螺旋DNA变性为单链核酸:
在合适的温度下引物和目标序列发生退火;在合适的温度下,结合在两条单链上的引物通过DNA聚合酶作用进行PCR延伸反应。
PCR产物检测和确证,可以通过凝胶电泳或其他方法检测PCR产物,必要是可以将PCR产物从凝胶中分离出来进行检测。
可以通过限制性内切酶酶切分析、杂交、DNA序列分析或者熔点曲线分析等方法对PCR产物进行确证。
采用实时荧光PCR方法检测时,扩增及检测同时进行。
检测步骤:
引物设计原则,PCR方法的选择:
PCR反应条件及验证,结果判定:
植物基因组DNA提取方法:
CTAB法SDS法试剂盒法,一、物种特异性检测:
PCR反应体系:
PCR反应参数设置:
PCR结果确证:
二、筛选检测方法,PCR反应体系:
PCR反应参数:
PCR结果确证:
三、结构基因特异性检测,PCR反应体系:
PCR反应参数,PCR反应确证:
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