槐米中芦丁的提取和精制实验报告之欧阳术创编.docx
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槐米中芦丁的提取和精制实验报告之欧阳术创编
实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定
时间:
2021.02.02
创作:
欧阳术
(一)实验目的要求
1.制备芦丁,供药用。
2.通过芦丁的制备,掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
3.熟悉重结晶技巧。
4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
(二)实验的基本原理
1.芦丁的提取原理
利用芦丁结构中含有多个酚羟基,呈酚酸性,能在碱水中溶解的性质,可用碱性溶剂进行提取,提取液加酸后可沉淀析出(碱溶酸沉法)。
也可利用芦丁在冷水中溶解度小,在热水中溶解度大的性质进行提取。
2.芦丁的分离原理
利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小,在热乙醇中溶解度大,以及在热水中溶解度大,在冷水中溶解度小的性质分离。
芦丁用溶剂加热溶解后,趁热抽滤,滤液放冷后能析出而达到分离的目的(如不纯可再重复操作进行分离)。
也可采用醇溶水沉法进行精制。
3.芦丁的鉴定原理
(1)利用吸附薄层色谱的分离原理,芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开,显色,以达到鉴定芦丁的目的。
(2)通过专属的化学显色反应(如三氯化铝显色反应),确定芦丁的成分类型(黄酮类)。
(三)实验内容
1.用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。
2.用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。
3.溶剂重结晶精制芦丁。
4.薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁
(四)实验药材仪器与试剂
1.实验药材槐米20g。
2.仪器:
磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯,1000ml烧杯,50ml烧杯,250ml园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置,布氏漏斗,抽滤瓶、层析缸等。
3.试剂:
硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。
(五)实验步骤
1.提取(水提取法)
称取槐米粗粉20g,在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中,加水200ml,用磁力加热搅拌器加热煮沸30min,趁热过滤。
残渣同法操作一次,合并两次滤液,放置冰箱中析晶,待全部析出后,减压抽滤,用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶,抽干,得粗制芦丁,干燥,称重,计算得率。
2.精制(醇-水重结晶法)
取粗制芦丁1g,置于250ml园底烧瓶中,加80%乙醇30ml加热回流15分钟,趁热抽滤。
滤液置250ml烧杯中,向滤液中加蒸馏水(约3~4倍量)至溶液呈明显混浊,室温放置,抽滤得精致芦丁。
用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶,晾干,称重。
(六)过程与现象记录
Day1(2011-05-07)
1.提取
①称取研碎的粗槐米20.02g,组装仪器。
②原料放入500mL烧瓶中加水200mL(1-2),磁力搅拌加热。
烧瓶中为咖啡色悬浮液,有甘苦气味,沸腾前不断产生小气泡上,液体中有明显漩涡(1-3)。
102℃沸腾,产生大量气泡,药渣翻滚,漩涡被气泡遮盖(1-4)。
加热过程中时常停止沸腾,续略升温2~3℃。
随着时间的延长,液体颜色加深。
煮沸规程中应控制液量,过少难以提出药品,过多容易喷出瓶口。
③最初用抽滤法分离残渣(1-5),但是溶液很稠且含糖分较多,难以流下(1-6),并且易阻塞和冲破滤纸,还渐渐冷却。
后改用离心法,5000r,15min(1-7),效果略好,但是溶液还是冷却,溶解的提取物较少。
滤液为深黄色色,粘稠,气味浓厚甘甜。
④再次将滤渣至于放入500mL烧瓶中加水200mL磁力搅拌加热30min,液体颜色略比第一次深。
⑤将两次得到的浸液(约300mL)收集放入冰箱备用。
Day2(2011-05-08)
2.精制
1.将粗提物抽滤(1-7)(1-8)(1-9),干燥得粗制芦丁(1-10)。
2.取粗制芦丁1.008g,置于250ml园底烧瓶中,加80%乙醇30ml,加热回流15分钟(1-11),加热前没有充分分散固体粗提物,趁热抽滤(1-12),得到黄色油状液体(1-13)。
2.另旋转蒸发粗提物的滤液(1-14),没有产物。
Day3(2011-05-14)
3.鉴定
(1)点滴显色反应从放置一周的粗提物中取芦丁的甲醇溶液(供试液)分别点在滤纸上,挥去溶剂,紫外照射,光吸收明显(1-15),然后分别添加供试液芦丁的甲醇溶液和显色剂2%三氯化铝乙醇溶液,显黄色(1-16),在紫外灯下λ365nm观察有明显亮斑(1-17)。
(2)薄层色谱鉴定
吸附剂:
硅胶GF254薄层板(5.0cmX10.0cm)。
样品:
自制芦丁(用甲醇溶解,浓度约1mg/ml)
对照品:
芦丁对照品的甲醇溶液。
展开剂:
三氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶3∶0.5)
显色:
a.先在可见光下观察,然后在紫外光下观察,有明显紫外吸收。
(365nm紫外灯下观察)
b.遮挡硅胶板左侧喷三氯化铝试剂(1-18),365nm紫外灯下观察,右侧有显色剂呈黄色,左侧有明显紫外吸收(1-19)。
4.注意事项
(1)硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合,起保护邻二酚羟基,不被氧化破坏的作用。
实验证明,提取时加入硼砂,产品的质量会好些。
(2)石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的,还可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂(形成钙盐沉淀),但PH不能过高和长时间煮沸,因为会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物,影响产品的质量和产率。
(3)PH过低(酸性太强)会使芦丁形成洋盐而收率降低。
(4)称量芦丁时,先将带滤纸的漏斗称重,再将盛样品的带滤纸的漏斗称重,差重即为样品的重量。
(七)结果计算及分析
产率小漏斗+滤纸重29.69g
抽滤后小漏斗+滤纸+样品重30.20g
样品净重0.51g
产率=(0.51/1.008)×100%=50.60%
比移值Rf=3/5.75=0.522
分析:
1、水提法不能充分溶解芦丁;
2、精制时粗提物聚集成固体颗粒,没有充分溶解;
3、抽滤、转移等过程的损失。
(八)心得体会
第一次做这样长时间的实验,渐渐喜欢上了实验室这样安静的气氛,在这里做实验,只需要关注操作和实验过程,思考、分析反应机理和得到某个结果的原因,不需要考虑实验之外的那些世俗和喧嚣。
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创作:
欧阳术
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