紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析.docx

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紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析

生长在同一地段而致误采。

其二是三脉叶马兰生长范围较广而且量多，某些药农见利忘义有意伪充。

４．２

药材切成饮片后，形状上较难分辩，但二者的

头状花序较易区分，刘寄奴的呈椭圆形，白色似米粒，小花全为管状花，其叶脉羽状，无离基三出脉。

药材具芳香气，味淡。

而三脉叶马兰头状花序呈半球形，较大，小花有舌状花和管状花，其叶有离基三出脉和羽状脉。

气微，苦、辛。

４．３

二者的显微特征差别较大，刘寄奴药材表面

具“Ｔ”字形非腺毛，腺毛顶面观呈鞋底形；叶主脉底部钝圆略呈圆锥形，上表面稍突起，且中央微凹。

叶

图６三脉叶马兰的粉末显微特征

１．非腺毛２．草酸钙针晶３．方晶４．腺毛５．簇晶６．花粉粒７．叶下表皮及气孔

肉组织与茎髓薄壁细胞中有草酸钙簇晶散在。

三脉叶马蓝无“Ｔ”字形非腺毛，叶主脉上下面突起明显，底部钝圆呈半圆形。

髓部薄壁细胞内含多数短小的草酸钙针晶。

二者花粉粒的形态和大小，表面特征差异也较明显。

参

１

处理２０ｍｉｎ，过滤，取滤液加９５％乙醇稀释至适量浓度。

于岛律ＵＶ２４５０型紫外分光度计上，在２００—

４００

ｎｍ波长范围内测定其紫外光谱。

结果：

刘寄奴

考

文献

在３３０ｎｍ波长处有一最大吸收峰，在３００ｎｍ波长处有肩峰；而三脉叶马兰仅在３２９ｎｍ波长处有一最大吸收峰。

４４．１

中国医学科学院药用植物资源开发研究所，中国医学科学院药物研究所等．中药志．第四册．ｊＥ京：

人民卫生

出版，１９８８：

４３

讨论

刘寄奴的混杂原因可能有二：

其一是二者均

２

李时珍．本草纲目（校点本，上册）．北京人民出版社，

１９９ｌ：

９５９

来源于菊科植物，在开花之前茎叶的形状和色泽均有相似之处，其生长环境与习性相似，且二者常混杂

（２００３一１１—２６收稿）

紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析

周军辉１伍蔚萍１谢子民２孙文基ｈ

（１．西北大学陕西省生物医药重点实验室，西安７１００６９；２．西安市药品检验所，西安７１００６８）

摘要目的：

建立紫菀药材的反相液相色谱定性和定量鉴别分析方法。

方法：

Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ

ＯＤＳ

Ｃ。

。

色谱柱（２５０

ｍｍ×４．６ｍｍ，５斗ｍ），流动相为甲醇－乙腈（１：

２）－０．４％磷酸梯度洗脱，流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为３６０ｎｍ，柱温为２５℃。

紫菀药材经８０％甲醇超声处理，进行指纹图谱分析，并对紫菀药材中的主要成分槲皮素进行含量测定。

结果ｉ在该色谱条件下，６份不同紫菀药材的ＲＰ－ＨＰＬＣ指纹图谱中可检出１０个共有峰作为定性鉴别；紫菀药材中槲皮素的含量在０．１３５％一０．２４６％之间。

结论：

本方法样品处理简便，准确性好，可用于紫菀药材的质量控制。

关键词

紫菀槲皮素反相高效液相色谱法

紫菀为菊科植物Ａｓｔｅｒ

ｔａｔａｒｉｃｕｓ

Ｌ￡的干燥根

在我们制定的紫菀指纹图谱中，含有分离较好的槲皮素色谱峰，这样，既可以得到指纹图谱提供的紫菀化学成分组成信息，又可测定槲皮素有效成分的含量。

１

及根茎，有润肺下气、消痰止咳的功能，用于痰多喘咳，新久咳嗽，劳嗽咳血，是许多常用的止咳平喘复方中药制剂中的重要药物之一。

槲皮素（ｑｕｅｒｃｅ．ｔｉｎ）为紫菀中已知的有效成份之一，现代药理研究表明，它具有较好的祛痰、止咳和一定的平喘作用。

－５６２・

仪器与试药

ＢｅｃｋｍａｎＧｏｌｄ

Ｓｙｓｔｅｍ高效液相色谱仪，包括

中药材第２７卷第８期２００４年８月

万方数据　

１２５泵、１６８ＰＤＡ二极管阵列检测器、自动进样器和３２Ｋｒａｔ工作站。

甲醇、乙腈均为色谱纯（ＴＥＤＩＡ，美国）；其它试剂均为分析纯。

槲皮素对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号００８１－９９１５）。

６份紫菀药材分别采自河北祁州（２００２年９月和２００３年５月），购自西安空军４５１医院、陕西西安藻露堂药店、河北某地及河北定州，分别编号为２０９０１、３０５０１、３０９０１、３０９０２、３０９０３、３０９０４。

以上样品均经过陕西省生物医药重点实验室鉴定，留样保存于陕西省生物医药重点实验室。

以上样品粉碎后过４０目筛，６０。

（２干燥１ｈ，密封保存，待用。

２实验部分

２．１

对照品溶液的配制精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每１ｍｌ含２７¨ｇ的溶液，摇匀。

２．２

供试品溶液的配制

精密称取紫菀粉末

１．００９，置具塞锥形瓶中，精密加入２０

ｍｌ

８０％甲醇

溶液，超声３０ｍｉｎ，取出，放冷，补足减失重量，离心，取上清液１０ｍｌ，蒸干，加入适量８０％甲醇溶解，转移至５ｍ１量瓶，用８０％甲醇稀释至刻度，０．４５斗ｍ滤膜过滤。

２．３色谱条件的选择优化ＢｅｃｋｍａｎＵｈｒａｓｐｈｅｒｅ

ＯＤＳ

Ｃ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｒａｍ，５＃ｘｍ）；柱温：

２５。

Ｃ；流速：

１．０ｍ／ｍｉｎ；检测波长：

使用ＰＤＡ二极管阵列检测器记录不同波长的色谱图，结果表明，在

３６０

ｎｍ检测波长下，槲皮素有较大吸收，色谱图中

色谱峰较多，信息丰富，故选择３６０ａｍ为检测波长；流动相：

Ａ．０．４％磷酸水溶液，Ｂ．（甲醇－乙腈，１：

２），梯度洗脱：

０＿５ｍｉｎ，８７％Ａ，１３％Ｂ；５＿５０

ｍｉｎ，７３％

Ａ，２７％Ｂ；５０－－＊７５ｍｉｎ，５５％Ａ，４５％Ｂ。

３方法学研究

３．１

线性关系考察分别精密吸取不同体积的槲

皮素对照品贮备液，用甲醇稀释调配成系列对照品溶液，分别进样１０“ｌ，测定峰面积积分值，以槲皮素进样量（斗ｇ／ｍ１）为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得到槲皮素的线性方程为：

Ｙ＝８０９４８Ｘ一３５０１４８，ｒ＝０．９９９２。

结果表明，槲皮素在２．７—１３．５¨∥ｍｌ（ｎ＝３）范围内线性关系良好。

３．２

重复性实验取同一批号紫菀材料五份，按

“２．２”项方法制得供试品溶液。

按“２．３”项下色谱条件分别测定，得到相应色谱图数据，用计算机辅助相似度评价系统评价整体相似度，结果以相关系数法计算，分别为０．９８８３、０．９６２９、０．９６０３、０．９９０５、０．９６８７，ＲＳＤ＝１．４７％（ｎ＝５）。

计算槲皮素峰的面积，分别为６１１４０６、６０４０８５、５８３６１８、５９０１４６、５８２０８３，

中药材第２７卷第８期２００４年８月

万　

方数据ＲＳＤ＝２．１８％（ｎ＝５）；计算槲皮素峰的保留时间分别为６１．９８ｍｉｎ、６１．８５ｍｉｎ、６１．５２ｍｉｎ、６１．８０ｍｉｎ、６２．１８ｍｉｎ，ＲＳＤ＝０．３９％（ｎ＝５）。

３．３

精密度实验取紫菀药材（祁州）一份，按

“２．２”项方法制得其供试品溶液。

按拟定的色谱条件平行测定５次，得相应色谱图数据，并用计算机辅助相似度评价系统评价整体相似度，结果以相关系数计算，分别为０．９７９２、０．９９１４、０．９９１７、０．９８６８、０．９８６７，ＲＳＤ＝０．５１％（ｎ＝５）。

计算槲皮素峰的面积，分别为５１６５４１、５１６９８３、５２５４８１、５３２４２６、５１６４５ｌ，ＲＳＤ＝１．３７％，槲皮素峰的保留时间分别为６２．４０ｍｉｎ、６２．１２

ｍｉｎ、６２．０７ｍｉｎ、

６２．１８ｍｉｎ、６２．１０

ｍｉｎ，ＲＳＤ＝０．２１％（ｎ＝５）。

３．４

稳定性实验按“２．２”项下制备供试品溶液，

按“２．３”项下色谱条件分别在０ｈ，２ｈ，４ｈ，６ｈ，１２ｈ，２４ｈ进样。

得到相应色谱图数据，用计算机辅助相似度评价系统评价整体相似度，结果以相关系数法计算，分别为０．９９１８、０．９７５８、０．９９１５、０．９８４５、０．９８０９，ＲＳＤ＝０．７０％（ｎ＝５）。

计算槲皮素峰的面积，分别为７６１４１９、７４１５２４、７４２９２２、７３４０６４、７２３１６９，ＲＳＤ＝１．８９％（ｎ＝５）；计算槲皮素峰的保留时间分别为６３．０５

ｍｉｎ、６１．８８ｍｉｎ、６１．８７ｍｉｎ、６１．８５ｍｉｎ、

６１．８０ｍｉｎ，ＲＳＤ＝０．８７％（ｎ＝５）。

３．５

加样回收率精密称取已知含量的样品粉末

５份，准确加人一定量的槲皮素对照品，按“２．２”项下色谱条件测定槲皮素的含量，计算回收率。

结果平均回收率９８．２０％，ＲＳＤ为１．７８％（ｎ＝５）。

３．６

系统适用性按“２．２”项方法处理６种不同

产地的样品，得到相应的供试品溶液。

在拟定色谱条件下分别测定，结果均以槲皮素峰计算理论塔板数。

结果表明，理论塔板数以槲皮素峰计算不得

暑

■ｌ‘Ｊ■１●ｌｔ－●

图１

紫菀药材（Ａ）和槲皮素对照品（Ｂ）ＨＰＬＣ色谱图

・５６３・

表１

不同紫菀药材Ｉ－ＩＰＬＣ图谱中共有峰相对保留时间比较

共有峰相对保留时间（ｄ）

样品编号———２————了—————４—————６—————７————１—１————１—２————１—３————１—４————Ｓ———＿１６

３

２０９０１３０５０１３０９０１３０９０２３０９０３３０９０４

ｄ

０．２４６０．２４８０．２３６０．２３５０．２４９０．２３６０．２４２２．７５

０．２５４０．２５６０．２４６０．２４３０．２５６０．２４５０．２５０２．３９

０．３１００．３０９０．３０００．３０００．３１００．３０２０．３０５１．６４

０．３９８０．３９６０．３９７０．３９３０．３９７０．３９４０．３９６０．４９

０．４６８０．４６４０．４５９０．４５９

０．６５２０．６３９０．６４４

０．６９００．６９３０．６８１０．６８００．６８８０．６８００．６８５０．８３

０．７３５０．７３８０．７２５０．７２６０．７３４０．７２６０．７３２０．７７

０．７７６０．７９６０．７６５０．７６５０．７７６０．７６６０．７７４１．１５

１１．１４９１．１４５１．１５２１．１５１１．１５１１．１５８１．１５ｌ

０．６４３

０．６５００．６４３

０．４６４

０．４６００．４６２０．７８

０．６４５

０．７６

ＲＳＤ！

％

００．３７

表２不同紫菀药材Ｉ－ＩＰＬＣ图谱中共有峰相对峰面积比较

比较６批供试品的ＨＰＬＣ图谱发现，其中有ｌＯ个色谱峰是６批供试品所共有的。

计算图谱中各共有色谱峰相对于参照峰（ｓ，槲皮素）的相对保留时间（０【＝ｔｉ／ｔ。

）和相对峰面积值（Ａ。

＝Ａｉ／Ａ。

）（见表１、２）。

计算每个紫菀样品的色谱图中槲皮素峰的面积积分值（ｎ＝３）。

图２

６批不同紫菀药材色谱图

５

相似度评价及样品分析

以２、１１和ｓ峰作为标记峰，分别用中南大学计

从下至上依次为２０９０１，３０５０１，３０９０１，３０９０２，３０９０３，３０９０４

低于４０００。

４

算机辅助相似性评价系统和西北大学中草药指纹图谱比对系统计算６批不同批次的紫菀药材相似度，结果见图２和表３。

６

标准指纹图谱的建立与槲皮素定量分析分别精密吸取槲皮素对照品溶液适量和６批供

试品溶液各１５恤ｌ，注入液相色谱仪，色谱图见图１。

・５６４・

讨论

中药材第２７卷第８期２００４年８月

万方数据　

６．１

样品处理过程中曾使用水煮醇沉法，８０％甲不尽相同（如表４中两种软件的相关系数法计算结果），因此应制定合适的相似度软件评价标准，使结果具有一定的统一性。

６．３

醇超声和甲醇超声等不同方法，其中甲醇超声所得槲皮素的含量最高，８０％甲醇超声稍次之，水煮醇沉方法所得样品中槲皮素含量最低。

但使用甲醇超声法得到的样品的色谱图基线噪音明显，容易使色谱柱污染，柱效降低；而使用８０％甲醇超声可以避免以上问题，并更多兼顾紫菀药材中极性不同的化合物的提取，制定的指纹图谱更反映紫菀药材的全貌。

因此，选用８０％甲醇超声提取方法。

且超声５０ｍｉｎ可以使槲皮素基本提取完全。

６．２

从西安药材市场购得紫菀伪品两批，采用本

文方法得到的色谱图与紫菀色谱图有明显不同。

与紫菀标准指纹图谱比较，两者相似度均低于０．２００。

致谢：

感谢西北大学分析科学研究所生物及过程分析化学实验室提供西北大学中草药指纹图谱比对系统，中南大学中药现代化研究中心提供计算机辅助相似性评价系统。

＋通讯联系人

由表３可以看出，使用不同的相似度评价软

件，基于相同的数学模型，计算同样的数据，结果也

Ｓｔｕｄｉｅｓ

ｔｈｅＦｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔａｎｄＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＡｎａｌｙｚｅｓｏｆＱｕｅｒｃｅｔｉｎｆｒｏｍＡｓｔｅｒｔａｔａｒｉｃｕｓ

Ｚｈｏｕ

（２００４—０４—２１收稿）

ｏｎ

Ｊｕｎｈｕｉｌ，ＷｕＷｅｉｐｉｎ９１，ＸｉｅＺｈｉｍｉｎ２，ＳｕｎＷｅｎｊｉｌ

（１．ＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ７１００６９；２．Ｘｉ’ａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｘｉ’ａｎ７１００６８）

Ａｂｓｔｒａｃｔ

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：

Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈ

ａ

ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ

ａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈＲＰ－ＨＰＬＣｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆＡｓｔｅｒｔａｔａｒｉｃｕｓ

ｗｅｒｅ

ａｓ

Ｌ￡Ｍｅｔｈｏｄｓ：

ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅＲＰ－ＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄ

ｆｏｌｌｏｗｓ：

ＵｈｒａｓｐｈｅｒｅＯＤＳＣ１８ｃｏｌｕｍｎｓ（２５０ｍｍ

ｒａｔｅ

ｗａｓ

ｘ

４．６ｍｍ，

ｗａｖｅ．

５Ｉｚｍ），ａｎｄ

１ｅｎｇｔｈｓ

ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ

ｍｅｔｈａｎｏｌ・ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（１：

２）旬．４％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ，ｔｈｅｆｌｏｗ

ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗｅｒｅ

１．０

ｍｌ／ｍｉｎ，ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ

ｗａｓａｔ

３６０ｎｍａｎｄｔｈｅｃｏｌｕｍｎ

Ｗａｓ２５℃．Ｔｈｅｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｄｅａｌｔｂｙｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｂａｔｈａｎｄｔｈｅ

ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｑｕｅｒｃｅｔｉｎｔｉｏｎｓ．ｔｈｅ１０ｍｕｔｕａｌ

ｆｉｎｉｓｈｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｌｅｃｔｅｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：

Ｕｎｄｅｒｔｈｅｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｃｏｎｄｉ—

ａｓ

ｐｅａｋｓｉｎＲＰ—ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ６ｄｉｆｆｅｒｅｎｔＡｓｔｅｒｔａｔａｒｉｃｕｓＬｆ．ｃａｎｂｅｕｓｅｄ

ｉｎｄｅｘ

ｐｅａｋｓｆｏｒ

ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ＩｎＲＰ—ＨＰＬＣＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：

ＴｈｅＬ￡

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ

ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ

ａｎａｌｙｓｉｓ．ｔｈｅ

ａｃｃｕｒａｔｅ

ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ

ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ

ｉｎＡｓｔｅｒｔａｔａｒｉｃｕｓＬｆ．ｗｅｒｅ０．１３５％一０．２４６％．

ａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｑｕｉｃｋａｎｄｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎａｌｍａｔｅｒｉａｌｏｆＡｓｔｅｒｔａｔａｒ＆ｕｓ

Ａｓｔｅｒｔａｔａｒｉｃｕｓ；Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ＲＰ—ＨＰＬＣ

高效液相色谱法鉴别儿茶及其混伪品

林静吟１许晓峰２

（１．广州市越秀区正骨医院，广州５１００３０；２．广州中医药大学，广州５１０４０５）

儿茶为豆科植物儿茶Ａｃａｃｉａｃａｔｅｃｈｕ（Ｌｆ．）Ｗｉｌｌｄ．的去皮枝、干的干燥煎膏，具有收湿生肌敛疮的功效，可用于溃疡不敛、湿疹、口疮、跌扑伤痛、外伤出血等。

常作为外科、骨科制剂的原料。

在药材采购过程中发现部分批次的儿茶原料药为混伪品，以至影响制剂的质量。

用经典的化学反应检测均显阳性反应，不能作为鉴别依据。

采用高效液相色谱法对正品及混伪品中的儿茶素及表儿茶素进行定量检测，即可加以区分，方法简便，结果准确可靠。

１

生物制品检定所提供）、儿茶浸膏及混伪品均经广州中医药大学中药鉴定教研室周诚副教授鉴定；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。

２２．１

Ｉｘｍ

方法与结果

色谱条件：

色谱柱：

Ｄｉｏｎｅｘ

１２０Ａ，４．６

ｘ

ＡｃｃｌａｉｍＴＭ１２０Ｃ１８５

１５

ｍｍ；流动相：

０．０４ｍｏｌ／Ｌ枸橼酸

溶液一Ｎ，Ｎ二甲基甲酰胺一四氢呋喃（４５：

８：

２），等度洗脱，流速：

１．２ｍｌｆｍｉｎ，检波波长２８０ｎｍ，柱温：

３５℃。

２．２

仪器与实验材料

Ｄｉｏｎｅｘｓｕｍｍｉｔ

对照品溶液制备：

精密称取儿茶素对照品，加

Ｐ６８０高效液相色谱仪（德国）；

甲醇－水（１：

１）配制成０．１６５４ｍｇ／ｍｌ的溶液，即得。

另精密称取表儿茶素对照品，加甲醇．水（１：

１）配制成０．１０６２ｍｇ／ｍｌ的溶液，即得。

・５６５・

ＤｉｏｎｅｘＰＤＡ

１００二极管阵列检测器；Ｓａｒｔｏｆｉｕｓ电子

天平（德国）；儿茶素、表儿茶素对照品（由中国药品

中药材第２７卷第８期２００４年８月

万方数据