传染病项目SOP.docx
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传染病项目SOP
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
文件编号:
XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
乙型肝炎病毒表面抗原定量测定
生效日期:
第1页共62页
一、目的:
规范乙型肝炎病毒表面抗原测定的标准操作程序,确保乙型肝炎病毒表面
抗原测定的结果准确有效。
二、适用范围:
在AutoLumoA2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒
表面抗原。
三、临床意义
乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病,据估计全球范围内目前
大约有3亿乙肝病毒携带者。
感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝
脏疾病,流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。
HBsAg是乙肝病毒颗粒(HBV)的外壳成分,为大小不一的多肽。
感染乙
型肝炎病毒后,机体会产生各种不同模式的抗原、抗体血清学免疫应答反应。
通过检测这些标志物,不仅可以诊断感染,而且还可以判断疾病的进程和预
后。
HBsAg是HBV感染后第一个标志物,是提示样本是否有潜在传染性的最
好的间接指标。
四、方法原理
本产品采用双抗体夹心法原理进行检测。
用抗-HBs抗体包被磁微粒,用
辣根过氧化物酶标记的抗-HBs抗体制备酶结合物。
通过免疫反应形成抗体-
抗原-抗体-酶复合物,该复合物催化发光底物发出光子,发光强度与HBsAg
含量成正比。
五、标本的采集与处理
5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本,推荐对于使用普通管采血的样
本,离心前样本应37℃孵育至少1h;对于使用促凝管采血的样本,离
心前样本应37℃孵育至少0.5h,离心条件10000g/min,10min;对于使
用抗凝管采血的样本,离心条件10000g/min,10min。
抗凝管推荐使用
肝素作为抗凝剂,避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果,应离心除去,并确定样
本未变质方可使用。
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XZDF-3-MY-02
版本/修订号:
A/0
主题内容
乙型肝炎病毒表面抗原定量测定
生效日期:
第2页共62页
5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。
5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时;如果不在8小时内检测需将样
本放置在2~8℃的冰箱中;若需48小时以上保存或运输,则应冻存于
-20℃以下,避免反复冻融。
使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。
5.5.避免反复冻融。
使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准
1)严重溶血、脂血2)标本标识不明
七、仪器与材料
7.1.仪器:
AutoLumoA2000化学发光检测仪
7.2.试剂:
AutoLumoA2000专用乙型肝炎病毒表面抗原试剂
7.2.1.试剂准备:
本试剂为即用型试剂,可以直接放在仪器上。
7.2.2.试剂盒于2~8℃储存,有效期12个月。
7.2.3.试剂盒应防止冷冻,避免强光照射。
7.2.4.试剂盒开启使用后,2~8℃保存可使用1个月。
7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输,运输过程中应轻拿轻放,避免重压,防止雨雪淋湿和阳光曝晒。
7.2.6.试剂机载稳定性
7.2.6.1.试剂包(磁微粒混悬液、酶结合物)竖直向上存放,
在2~10°C环境下冷藏保存2小时后,才可上机使
用。
首次使用后,机载或在2~10°C环境下稳定期
为28天。
7.2.6.2.校准品开瓶后保存于2~8°C,稳定期可维持1个月;
若需使用更长时间,应根据需要进行分装,于-20℃
冻存(可以保存2个月),但应避免反复冻融。
八、检验方法
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主题内容
乙型肝炎病毒表面抗原定量测定
生效日期:
第3页共62页
8.1.消耗品检查:
8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。
8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。
8.2.试剂包装载:
8.2.1.试剂包首次上机前,轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成
份,避免产生气泡。
不要倒转已经打开的试剂包。
8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。
8.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码,可以手工输入。
8.2.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.3.测试:
8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中,每次测试样本量为150μl。
8.3.2.装载样本架,在仪器软件界面中输入样本信息。
8.3.3.选择“运行”开始测试,系统自动进行试验操作。
8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.4.定标:
8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。
8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡,可以手工输入。
8.4.3.将校准品转移至样本容器,放置在仪器配套样本架中。
8.4.4.装载样本架,在仪器软件界面中输入定标信息。
8.4.5.选择“运行”开始测试,生成定标曲线。
8.4.6.定标曲线有效期为28天。
8.4.7.参考相应的仪器系统操作说明。
8.4.8.出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成:
8.4.8.1.质控结果经重复测定后仍然超出范围;
8.4.8.2.试剂盒或发光底物液的批号更改;
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乙型肝炎病毒表面抗原定量测定
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第4页共62页
8.4.8.3.超出定标曲线的有效期限;
8.4.8.4.仪器重要部件更换或维修。
8.5.质控:
8.5.1.使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。
8.5.2.出现以下情况需要进行质控:
8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时;
8.5.2.2.更换新的试剂盒;
8.5.2.3.重新生成定标曲线;
8.5.2.4.停机。
8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围,以确
保合适的测试性能。
8.5.4.质控值应落在规定的范围内,如出现失控,应采取纠正措施。
8.6.稀释
8.6.1.使用手工稀释或仪器自动稀释功能,仪器自动稀释的最大比例为
1:
100。
8.6.2.手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释,将得到的检测结果
乘以稀释倍数计算最终结果。
8.6.3.选择仪器自动稀释功能,可以得到准确的检测结果,参考相应的仪
器系统操作说明以及帮助系统。
8.6.4.稀释后的样本含量应不低于0.05IU/ml。
8.7.结果计算:
选择适当的曲线拟合方式,本试剂盒推荐采用四参数拟合方式,以校
准品浓度值为x轴,以校准品发光强度log值为y轴建立定标曲线。
根据
待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。
仪器自动操作系统可通过存储
的定标曲线以及样本测试得到的发光值自动计算样本测试结果。
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主题内容
乙型肝炎病毒表面抗原定量测定
生效日期:
第5页共62页
九、参考范围
检测1040例样本,用ROC曲线方法确定正常参考值为<0.05IU/ml;
建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值。
本试剂盒
仅作为诊断的辅助手段之一,供临床医生参考。
十、检验结果的解释
10.1.用本试剂盒检测结果浓度值为0.04~0.06IU/ml的弱反应性可疑样本,
建议复孔重新测定,如果双孔复查浓度值均小于0.05IU/ml,结果判为
阴性,如果单份或双份测定不低于0.05IU/ml,结果判为有反应性,有
条件的实验室建议做中和确证实验,同时动态观察。
10.2.本试剂盒测定范围为0.05~250IU/ml,浓度值大于250IU/ml的样本,
其结果是通过定标曲线外延得出的计算结果。
如果要获得其更准确的结
果,需对样本进行稀释后重新测定,推荐稀释比例为1/500,使用系统
通用样品稀释液进行稀释。
稀释后仍超出线性范围的建议手工稀释并增
大稀释比例。
10.3.由于方法学或免疫特异性等原因,使用不同生产商的试剂对同一份样
本进行检测可能会得到不同的检测结果,因此不同试剂检测所得结果
不应直接相互比较,以免造成错误的医学解释,建议实验室在检测报
告中注明所用试剂特征。
系列监测中,如果改变试剂类型,则应进行
额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线
值。
十一、检验方法的局限性
11.1.本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一,临床诊断应与临床检查、病史
及其他检测相结合。
11.2.样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果。
此类样本不适合
用本试剂盒进行检测。
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主题内容
乙型肝炎病毒表面抗原定量测定
生效日期:
第6页共62页
11.3.溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。
十二、产品性能特征
12.1.阴性参考品符合率:
检测国家阴性参考品20份,不出现假阳性。
12.2.阳性参考品符合率:
检测国家阳性参考品3份,不出现假阴性。
12.3.最低检出量:
用国家灵敏度参考品进行检测,符合相应参考品要求。
12.4.精密性:
10孔平行检测浓度值为0.5IU/ml样本,CV%≤15.0%;10
孔平行检测浓度值为1.5IU/ml样本,CV%≤10.0%。
12.5.线性:
在0.05IU/ml~250IU/ml范围内,线性相关系数(r)不低于
0.9900。
12.6.分析特异性:
与抗-HIV(1+2)、抗-HCV、抗-HAV等病毒性抗体无
交叉反应。
2.5mg/ml血红蛋白、200mg/L胆红素、20g/L甘油三酯和
500mg/dl胆固醇对检测结果无显着干扰。
十三、参考文献
1.LokASE,McMahonBJ.AASLDpracticeguidelines:
chronichepatitisB.
Hepatology,2004,34:
1225-1241.
2.LavanchyD.HepatitisBvirusepidemiology,diseaseburden,treatment,and
currentandemergingpreventionandcontrolmeasures.JViralHepat,2004,11:
97-107.
3.巴德年,1998年.当代免疫学技术与应用.北京医科大学中国协和医科大学联
合出版社.
4.陶义训,1997年第二版,免疫学与免疫学检验.人民卫生出版社.
5.中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.
中华传染病杂志,2001,19:
56-62.
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版本/修订号:
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主题内容
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定
生效日期:
第7页共62页
一、目的:
规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序,确保乙型肝炎病毒表面
抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围:
在AutoLumoA2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒
表面抗体。
三、临床意义
乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病,据估计全球范围内目前
大约有3亿乙肝病毒携带者。
感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝
脏疾病,流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。
表面抗体(Anti-HBs)是一种保护性抗体,是乙肝感染后痊愈或趋向治愈
的象征;全程(3针)疫苗接种结束后1个月检测保护性表面抗体(Anti-HBs)
的浓度,能够判定免疫效果。
关于表面抗体与保护力的关系,世界标准未完
全统一,目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值≥10mIU/ml,就有足够的保
护作用;高危人群表面抗体浓度值≥100mIU/ml,具有足够的保护作用。
肝
移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值,每次检测值≥
100mIU/ml为宜。
四、方法原理
本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。
用表面抗原包被磁微粒,用辣
根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。
通过免疫反应形成抗原-抗体-酶
标抗原复合物,该复合物催化发光底物发出光子,发光强度与表面抗体的含
量成正比。
五、标本的采集与处理
5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本,推荐对于使用普通管采血的样
本,离心前样本应37℃孵育至少1h;对于使用促凝管采血的样本,离
心前样本应37℃孵育至少0.5h,离心条件10000g/min,10min;对于使
用抗凝管采血的样本,离心条件10000g/min,10min。
抗凝管推荐使用
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版本/修订号:
A/0
主题内容
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定
生效日期:
第8页共62页
肝素钠作为抗凝剂,避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果,应离心除去,并确定样
本未变质方可使用。
5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。
5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时;如果不在8小时内检测需将样
本放置在2~8℃的冰箱中;若需48小时以上保存或运输,则应冻存于
-20℃以下,避免反复冻融。
使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准
1)严重溶血、脂血2)标本标识不明
七、仪器与材料
7.1.仪器:
适用于AutoLumoA2000化学发光检测仪。
7.2.试剂:
AutoLumoA2000专用乙型肝炎病毒表面抗体试剂
7.2.1.试剂准备:
本试剂为即用型试剂,可以直接放在仪器上。
7.2.2.试剂盒于2~8℃储存,有效期12个月。
7.2.3.试剂盒应防止冷冻,避免强光照射。
7.2.4.试剂盒开启使用后,2~8℃保存可使用1个月。
7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输,运输过程中应轻拿轻放,避免重压,防止雨雪淋湿和阳光曝晒。
7.2.6.试剂机载稳定性
7.2.6.1.试剂包(磁微粒混悬液、酶结合物)竖直向上存放,
在2~10°C环境下冷藏保存2小时后,才可上机使
用。
首次使用后,机载或在2~10°C环境下稳定期
为28天。
7.2.6.2.校准品开瓶后保存于2~8°C,稳定期可维持1个月;若
需使用更长时间,应根据需要进行分装,于-20℃冻
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主题内容
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定
生效日期:
第9页共62页
存(可以保存2个月),但应避免反复冻融。
八、检验方法
8.1.消耗品检查:
8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。
8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。
8.2.试剂包装载:
8.2.1.试剂包首次上机前,轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成
份,避免产生气泡。
不要倒转已经打开的试剂包。
8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。
8.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码,可以手工输入。
8.2.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.3.测试:
8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中,每次测试样本量为50μl。
8.3.2.装载样本架,在仪器软件界面中输入样本信息。
8.3.3.选择“运行”开始测试,系统自动进行试验操作。
8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.4.定标:
8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。
8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡,可以手工输入。
8.4.3.将校准品转移至样本容器,放置在仪器配套样本架中。
8.4.4.装载样本架,在仪器软件界面中输入定标信息。
8.4.5.选择“运行”开始测试,生成定标曲线。
8.4.6.定标曲线有效期为28天。
参考相应的仪器系统操作说明。
出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成:
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版本/修订号:
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主题内容
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定
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第10页共62页
质控结果经重复测定后仍然超出范围;
试剂盒或发光底物液的批号更改;
超出定标曲线的有效期限;
仪器重要部件更换或维修。
8.5.质控:
8.5.1.使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。
8.5.2.出现以下情况需要进行质控:
8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时;
8.5.2.2.更换新的试剂盒;
8.5.2.3.重新生成定标曲线;
8.5.2.4.停机。
8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围,以确保
合适的测试性能。
8.5.4.质控值应落在规定的范围内,如出现失控,应采取纠正措施。
8.6.稀释
使用手工稀释或仪器自动稀释功能,仪器自动稀释的最大比例为
1:
100。
手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释,将得到的检测结果
乘以稀释倍数计算最终结果。
选择仪器自动稀释功能,可以得到准确的检测结果,参考相应的仪
器系统操作说明以及帮助系统。
稀释后的样本含量应不低于5mIU/ml。
8.7.结果计算:
选择适当的曲线拟合方式,本试剂盒推荐采用四参数拟合方式,以校
准品浓度值为x轴,以校准品发光强度log值为y轴建立定标曲线。
根据
徐州市东方人民医院检验科免疫室作业指导书
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版本/修订号:
A/0
主题内容
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定
生效日期:
第11页共62页
待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。
仪器自动操作系统可通过存储
的定标曲线以及样本测试得到的发光值自动计算样本测试结果。
九、参考范围
正常参考值:
<10mIU/ml
建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值。
本试剂盒
仅作为诊断的辅助手段之一,供临床医生参考。
十、检验结果的解释
10.1.用本试剂盒检测结果浓度值为8.0~12.0mIU/ml的弱反应性可疑样
本,建议双份重新测定,如果双份复查浓度值均小于10mIU/ml,结果
判为阴性,如果单份或双份测定不低于10mIU/ml,结果判为阳性,同
时建议动态观察。
10.2.本试剂盒测定范围为5~1000mIU/ml,浓度值大于1000mIU/ml的样本,
其结果是通过定标曲线外延得出的计算结果。
如果要获得其更准确的结
果,需对样本进行稀释后重新测定,推荐稀释比例为1/100,使用系统
通用样品稀释液进行稀释。
稀释后仍超出线性范围的建议手工稀释并增
大稀释比例。
10.3.由于方法学或免疫特异性等原因,使用不同生产商的试剂对同一份样
本进行检测可能会得到不同的检测结果,因此不同试剂检测所得结果
不应直接相互比较,以免造成错误的医学解释,建议实验室在检测报
告中注明所用试剂特征。
系列监测中,如果改变试剂类型,则应进行
额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线
值。
十一、检验方法的局限性
11.1.本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一,临床诊断应与临床检查、病
史及其他检测相结合。
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版本/修订号:
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主题内容
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定
生效日期:
第12页共62页
11.2.样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果。
此类样本不适合
用本试剂盒进行检测。
11.3.溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。
十二、产品性能特征
12.1.符合率:
与SFDA批准的试剂平行检测1024份临床样本,阴性符合率
99.58%,阳性符合率99.02%,总符合率99.41%。
12.2.最低检出限:
≤10mIU/ml。
12.3.精密性:
10孔平行检测浓度值为10mIU/ml样本,CV%≤15.0%;10孔
平行检测浓度值为100mIU/ml样本,CV%≤10.0%。
12.4.线性:
在5~1000mIU/ml范围内,线性相关系数(r)不低于0.9900。
12.5.分析特异性:
与抗-HIV(1+2)、抗-HCV、抗-HAV等病毒性抗体无交叉
反应。
2.5mg/ml血红蛋白、200mg/L胆红素、10g/L甘油三酯和500mg/dl
胆固醇对检测结果无显着干扰。
12.6.HOOK效应:
测定HBsAb浓度值为30000mIU/ml的样本,未出现HOOK
效应引起的假阴性结果。
十三、参考文献
1.LokASE,McMahonBJ.AASLDpracticeguidelines:
chronichepatitisB.
Hepatology,2004,34:
1225-1241.
2.LavanchyD.HepatitisBvirusepidemiology,diseaseburden,treatment,and
currentandemergingpreventionandcontrolmeasures.JViralHepat,2004,11:
97-107.
3.巴德年,1998年.当代免疫学技术与应用.北京医科大学中国协和医科大学联
合出版社.
4.陶义训,1997年第二版,免疫学与免疫学检验.人民卫生出版社.
5.中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.
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文件编号:
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版本/修订号:
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主题内容
乙型肝炎病毒e抗原定量测定
生效日期:
第13页共62页
一、目的:
规范乙型肝炎病毒e抗原测定的标准操作程序,确保乙型肝炎病毒e抗原
测定的结果准确有效。
二、适用范围:
在AutoLumoA2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒
e抗原。
三、临床意义
乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg),一般通称e抗原。
它来源于乙型肝炎病
毒的核心,是核心抗原的亚成分,或是核心抗原裂解后的产物,是可溶性蛋
白[1]。
当核心抗原裂解时,可溶性蛋白部分(即e抗原)就溶于血清中,存
在于血液循环中。
有研究表明,在PegIFNα2a治疗过程中,HBeAg水平对乙
肝治疗应答有较好的预测价值[2]。
许多专家关注聚乙二醇干扰素治疗过程中
HBeAg或HBsAg浓度的动态变化,认为这种量的变化往往是抗原消失或血
清转换的前提,具有疗效预测作用。
对于乙肝治疗过程中HBeAg和HBsAg
浓度明显下降的患者应鼓励继续治疗,以争取获得更好的疗效[3]。
四、方法原理
本产品采用双抗体夹心法原理进行检测。
用抗-HBe制备磁微粒,辣根过
氧化物酶标记抗-HBe制备酶结合物。
通过免疫反应形成抗体-抗原-酶标抗体
复合物,该复合物催化发光底物液发出光子,发光强度与HBeAg的含量成正
比。
五、标本的采集与处理
5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本,推荐对于使用普通管采血的样
本,离心前样本应37℃孵育至少1h;对于使用促凝管采血的样本,离心
前样本应37℃孵育至少0.5h,离心条件10000g/min,10min;对于使用
抗凝管采血的样本,离心条件10000g/min
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