细胞生物学实验报告.docx
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细胞生物学实验报告
实验一细胞的形态观察及其大小测量
【实验目的】
1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察,了解细胞的形态及其显微结构;
2、学习显微测量的方法,对细胞的大小有一直观认识。
【实验用品】
普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片等。
【实验材料】
小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;洋葱。
【实验内容和方法】
(一)细胞形态观察
l、动物细胞的观察
(1)人肝细胞切片:
在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。
注意肝细胞之间的界限、细胞的形状、细胞核的形状和数量、核仁的形状和数量、细胞质的形态构造以及细胞质和细胞核染色的区别。
(2)鸡血细胞涂片的观察:
注意观察血细胞的组成;红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察
(1)取蚕豆叶片横切片的观察:
注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。
(2)洋葱表皮细胞的形态观察:
用镊子撕取洋葱表皮,滴一滴蒸馏水,盖上盖玻片。
在显微镜下观察的形态和结构。
(二)细胞的大小和测量
1、测微尺的使用
目镜测微尺是一块圆形玻片,中心刻有一尺,长5~10mm,分成50~100格。
每格的实际长度因不同物镜的放大率和不同镜筒长度而异。
镜台测微尺是在一块载玻片中央,用树胶封固一圆形的测微尺,长1mm或2mm,分成100格或200格,每格的实际长度0.01mm(10μm)。
当用目镜测微尺来测量细胞的大小时,必须先用镜台测微尺核实目镜测微尺每一格的长度。
方法如下:
(1)卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上,再旋上目镜的上透镜。
(2)将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好,使测微尺分度位于视野中央。
调焦至能看清镜台测微尺的分度。
(3)小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊,可转动目镜上透镜进行调焦),使两尺左边的一直线重合,然后由左向右找出两尺另一次重合的直线(如图所示)。
(4)记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。
按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm:
0
1
2
3
测定目镜测微尺每格实长的图解
上尺:
目镜测微尺;下尺:
镜台测微尺
镜台测微尺的格数
目镜测微尺每格的微米数=—————————×10
目镜测微尺的格数
例如,图中镜台测微尺1格=目镜测微尺6格,代入公式得:
目镜测微尺每格=1/6×10μm=1.66μm
(5)取下镜台测微尺,换上需要测量的玻片标本,用目镜测微尺测量标本。
2、计算:
根据测量结果计算各种细胞及细胞核的体积。
椭球形:
V=4πab2/3a-长半径b-短半径
圆球形:
V=4/3πr3r-半径
圆柱形:
V=πr2hr-半径h-高
【实验结果】
1、数据记录
40×目镜测微尺每格之长度:
X=
=2.5(μm)
洋葱表皮
宽(μm)×长(μm)
72.5×182.5
95×157.5
80×302.5
100×142.5
102.5×210
92.5×130
85×232.5
77.5×242.5
85×267.5
80×252.5
人肝细胞
宽(μm)×长(μm)
25×30
15×22.5
22.5×25
20×25
20×22.5
20×25
12.5×22.5
12.5×25
20×22.5
17.5×10
血细胞
宽(μm)×长(μm)
7.5×10
10×10
7.5×7.5
7.5×7.5
7.5×7.5
5×7.5
10×7.5
10×10
7.5×7.5
7.5×10
2、图片
见图1.1、图1.2、图1.3
【作业与思考】
1、血细胞分为哪几大类?
分别描述你看到的不同血细胞的形态,并阐述其功能。
答:
血细胞分为红细胞、白细胞和血小板。
红细胞是运输氧气的主要媒介;白细胞分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞,其主要功能是抵御病原的入侵和对疾病的免疫作用;血小板的主要功能是凝血和止血,修补破损的血管。
2、任意选择你所看到的动物细胞和植物细胞各一个,绘图并进行适当标注,测量其大小,并比较动植物细胞大小的差异。
答:
动植物细胞图片见图1.1和图1.2.。
通过镜台测微尺的测量,可观察到洋葱表皮细胞明显比人肝细胞大。
洋葱表皮细胞可见到细胞壁,且形状较规则多为矩形,而人肝细胞形状不规则。
3、在不同的放大倍数下,所测得的细胞大小一致吗?
你认为在哪个放大倍数下测定得比较准确?
为什么?
答:
在不同的放大倍数下,所测得的细胞大小不一致。
因为在不同的目镜放大倍数下,需要重新跟台镜测微尺校准以获得当前放大倍数下目尺的最小分度值,所以在4×、10×、40×下所得细胞大小不一致。
在40×下测得数据更准确,因为在该放大倍数下能够看清楚目尺的最小分度,而在4×和10×的放大倍数下不能分辨出最小分度。
【实验总结】
通过本次实验,学会了用普通光学显微镜观察动植物细胞的构造同时区分它们之间的差别,跟重要的是学会了用镜台测微尺校准目镜测微尺的方法而且知道了如何用镜台测微尺测量细胞的直径的方法。
实验二
PAS(PeriodicAcidSchiff)反应显示糖原
和其它多糖物质
【实验目的】
1、熟悉PAS法原理及操作步骤;
2、观察PAS反应的染色结果,并观察多糖在组织细胞中的分布。
【实验原理】
多糖(polysaccharide)是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。
广泛分布于动、植物界。
一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架,如植物的纤维素和动物的甲壳素,一般称为结构多糖。
另一些多糖在生物体内作为能量贮存,如淀粉(植物)和糖元(动物),在需要时可以通过生物体内酶系统的作用分解,释放出单糖。
还有许多多糖具有更复杂多样的生理功能,如粘多糖、血型物质等,它们在生物体内起着重要的作用。
淀粉和糖原均由D-葡萄糖的分支或直链组成,过碘酸是一种强氧化剂,能将葡萄糖中的乙二醇基(CHOH-CHOH)氧化成两个游离的醛基(-GHO),游离醛基与Schiff试剂反应生成紫红色产物。
【实验用品】
(一)试剂:
1、过碘酸酒精溶液:
取过碘酸(HIO4·2H2O)0.4g溶于35m1纯酒精中,加入5m1的0.2M醋酸钠(醋酸钠2.72g溶于100m1蒸馏水中),再加入15ml蒸馏水。
溶液配好后保存在0℃~4℃的冰箱内,并加黑纸保存,此液如显黄色即失效。
2.Schiff试剂:
将0.5g碱性品红加入100m1煮沸的蒸馏水中,时时摇荡玻璃瓶或者搅拌,煮5min,使之充分溶解;然后冷却至50℃时过滤到具有玻塞的棕色试剂瓶,加入10ml的lmol/L的HCl,冷却至25℃时加入0.5g偏重亚硫酸钠,在室温黑暗条件下静置24h,其颜色呈褐色或淡黄色,加活性炭0.5g剧烈振荡摇匀1min;过滤,滤液为无色。
置棕色瓶密封,外包黑纸,4℃保存。
本试剂可提前一天准备,此液必需保持清澈透明、无色也无沉淀,容器要小,装满后仅留很小的空隙,其中不应有任何氧化剂,不要过长时间暴露在空气中。
如有白色沉淀就不能再用,如颜色变红可以加入少许偏重亚硫酸钠,使其再转变为无色就可以再用。
3、亚硫酸水溶液:
取10%偏重亚硫酸钠Na2S2O5(或K2S2O5)20ml、1mmolL-1HCl20ml和400ml纯水混匀即可。
此液使用前配制,否则会因SO2逸出失效。
(此液中所用的偏重亚硫酸钠或钾要与Schiff试剂中所用的相同):
4、苏木精溶液常用的有5种,其中德拉菲氏苏木精染液(Delafield苏木精染液)配法如下:
甲液(苏木精5g、无水乙醇30ml)
乙液(铵矾,即硫酸铝铵饱和水溶液:
比例为1g硫酸铝:
11ml水,用时配110ml,取100ml)
丙液(甘油125ml、甲醇125ml)。
配法如下:
1.将甲液一滴一滴地加入乙液中,并随时用玻璃棒搅动;2.然后暴露于阳光和空气中约1周到10天;3.加入丙液;4.将混合液静置2个月至颜色变深为止(可过滤),此液成熟后须置于阴冷处塞紧瓶口,可长期保存使用,使用时可将染剂1份用3~5份蒸馏水稀释,则染色后分化更明显。
5、梯度乙醇溶液:
100%,95%,90%,80%,70%,50%各两份。
一份用于脱腊复水,一份用于脱水。
6.二甲苯
7、100%乙醇+二甲苯(1:
1)
(二))用具:
载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片
(三)材料:
土豆;小鼠肝细胞石蜡切片
【实验步骤】
(一)土豆切片的观察
制作土豆徒手切片→过碘酸处理15~30min→70%乙醇1min→schiff试剂15min→亚硫酸水漂洗2~3次→蒸馏水漂洗→镜检
(二)小鼠肝细胞切片的观察
取鼠肝石蜡切片→二甲苯脱蜡约10min→二甲苯+100%乙醇(3min)→梯度乙醇脱二甲苯,在各浓度乙醇(100%,95%,90%,80%,70%,50%)中约2~3min→过碘酸氧化15~30min→蒸馏水漂洗→Schiff试剂15~30min→亚硫酸水漂洗2~3次→蒸馏水漂洗→苏木精染色10min→流水冲洗→梯度乙醇脱水(50%,70%,80%,90%,95%,100%),在各乙醇浓度中约2~3min→100%乙醇+二甲苯2~3min→二甲苯适度透明→指甲油封片→镜检
【实验结果】
1、现象观察:
经过PAS染色反应后的土豆细胞和小鼠肝细胞呈现紫红色。
2、图片
见图2.1、图2.2
【作业与思考】
1、为所观察到的土豆切片和鼠肝切片绘图,标注其多糖的位置,并描述这两种细胞的多糖分布特点。
答:
土豆:
多糖物质呈颗粒状分散于细胞内,且呈聚集状态。
2、影响PAS反应染色效果的关键步骤是什么?
答:
希夫试剂的浸泡、亚硫酸水的现配现用等。
3、如何制作徒手切片?
应注意什么才能得到薄而均匀的切片?
答:
徒手切片法是指手持刀片将新鲜的或固定的实验材料切成薄片的制作方法。
徒手切片前,应先准备好一个盛有清水的培养皿。
在切片时,用左手的拇指与食指、中指夹住实验材料,大拇指应低于食指2~3mm,以免被刀片割破。
材料要伸出食指外约2~3mm,左手拿材料要松紧适度,右手平稳地拿住刀片并与材料成垂直。
然后,在材料的切面上均匀地滴上清水,以保持材料湿润。
将刀口向内对着材料,并使刀片与材料切口基本上保持平行,再用右手的臂力(不要用手的腕力)自左前方向右后方均匀地拉切。
此时,左手的食指一侧应抵住刀片的下面,使刀片始终平整。
连续地切下数片后,将刀片放在培养皿的水中稍一晃动,切片即漂浮于水中。
当切到一定数量后,可在培养皿内挑选透明的薄片用低倍镜观察检查。
好的切片应该是薄且比较透明、组织结构完整,否则要重新进行切片。
对经检查符合要求的切片,如果只作临时观察,可封藏在水中进行观察。
若要更清楚地显示其组织和细胞结构,可选择一些切片进一步通过固定、染色、脱水、透明及封藏等步骤,做成永久玻片标本。
【实验总结】
通过本次实验,学会了土豆徒手切片的制作方法,学会了配置PAS反应的一些必须试剂的方法。
了解了本次实验中先用降浓度梯度的酒精浸泡小鼠肝细胞之后又用升浓度梯度的酒精浸泡是为了保证肝细胞的完整性,不至于在光镜下观察其受到了损坏。
实验三叶绿体的分离与荧光观察
【实验目的】
1、通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法.
2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法.
【实验原理】
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。
叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行,以免渗透压的改变使叶绿体到损伤。
将匀浆液1000r/min的条件下离心2min,以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。
然后,在3000r/min的条件下离心5min,即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。
分离过程最好在0~5℃的条件下进行,如果在室温下,要迅速分离和观察。
某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态,从激发态回到基态时,就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光),这种光就称为荧光。
若停止供能,荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后,可直接发出荧光(称为自发荧光),如叶绿素的火红色荧光。
有的生物材料本身不发荧光,但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光),如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。
本实验利用荧光显微镜对发荧光的叶绿体进行观察。
利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时,将受到许多因素的影响,如温度,光,淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间,有必要时立即拍照。
另外,在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、盖片和无荧光油。
【实验用品】
1.器材:
1)主要设备:
普通离心机,粗天平,荧光显微镜;
2)小型器材:
剪刀,研钵,移液管,漏斗,滴管,10ml刻度离心管,纱布若干,无荧光载玻片和盖玻片。
2.材料:
新鲜菠菜。
3.试剂:
0.35mol/L氯化钠溶液,
0.01%吖啶橙(acridineorange).
0.01%吖啶橙的配制:
称取0.1g吖啶橙加蒸馏水100ml做干液,贮棕色瓶,置4℃冰箱保存。
放冰箱备用,临用前取1ml母液加1/15mol/L磷酸缓冲液(pH4.8)9ml稀释。
吖啶橙(AcridineOrange,AO)是一种荧光色素,其激发滤光片波长488nm。
阻断滤光片波长515nm。
它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,可发出不同颜色的荧光(即着色特异性),这是由于DNA是个高度聚合物,吸收荧光物质的位置较少,发绿色荧光,而RNA聚合度低,能和荧光物质结合的位置多,故发红色荧光。
【实验方法】
1、叶绿体的分离
(1)选取新鲜的菠菜嫩叶,洗净擦干后,去除叶梗及粗脉并剪碎,称取2g左右,置于预冷的研钵;
(2)加10ml的0.35mol•L-1NaCl溶液研磨匀浆;
(3)用6层纱布过滤,滤液盛于烧杯中;
(4)取滤液4ml于1000rpm离心2min,弃去沉淀;
(5)将上清液3000rpm离心5min,弃去上清液,沉淀即为叶绿体(混有部分细胞核);
(6)沉淀用0.35molL-1NaCl溶液悬浮。
2、叶绿体的观察
(1)滴叶绿体悬浮液一滴于载片上,加盖片;在普通光镜下观察,注意观察所分离的叶绿体的形态以及其是否完整。
(2)滴叶绿体悬浮液一滴于无荧光载片上,加无荧光盖片;在荧光显微镜下观察叶绿体有无自发荧光,其颜色如何。
(3)滴叶绿体悬浮液一滴在无荧光载片上,再滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料,加无荧光盖片后即可在荧光显微镜下观察其次生荧光。
3.完整细胞中的叶绿体观察
(1)用镊子撕取一片菠菜叶子表皮,平铺于载玻片上,滴加一滴提取缓冲液,加盖片后轻压,备用。
(2)用镊子撕去菠菜叶子的表皮,用刀片刮下一些叶肉细胞,放于载玻片上,滴加一滴提取缓冲液,加盖片后轻压,备用。
(3)将以上两种制片进行一下三种方式的观察:
a在普通光镜下观察。
b在荧光显微镜下观察。
c再滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料,加无荧光盖片后,在荧光显微镜下观察。
【实验结果】
1、现象观察:
在普通光学显微镜下可以观察到绿色的叶绿体,但是可能由于离心过程中转速过快导致叶绿体破碎,很难观察到完整的椭球状叶绿体;在荧光显微镜下可以观察到明显的荧光现象。
2、图片
见图3.1、图3.2
【作业与思考】
1、描述你所观察到的实验现象,自发荧光和次生荧光的区别?
答:
荧光是通过外界的激发光激发后而发射出来的另外一种光,比如说紫外线对叶绿体的激发使其激发出另一种波长的光;而次生荧光主要是指磷光,当照射于叶绿体上的激发光源撤销后,叶绿体仍然继续辐射出极微弱的红光。
发射出的磷光寿命比自发荧光的较长,为10-3—10-2s,但其强度仅为荧光的1%左右,一般只能用灵敏的光学仪器才能测出。
2.叶绿体分离的原理是什么?
操作过程中应注意什么?
答:
将植物组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。
一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状、稠密度,也与离心力以及悬浮介质的粘度有关。
在一给定的离心场中,同一时间内,密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。
依次增加离心力和离心时间,就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部,分批收集即可获得各种亚细胞组分。
叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行,以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
将匀浆液在1000r/min的条件下离心2min,以去除其中的组织残渣和一些末被破碎的完整细胞。
然后在3000r/min的条件下离心5min,即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。
分离过程最好在0~4℃的条件下进行;如果在室温下,要迅速分离和观察。
【实验总结】
通过本次实验学会了分离叶绿体的方法,但是对于撕取菠菜叶表皮也观察完整叶绿体的这个操作不甚熟练,操作技术仍需要加强。
另外本次实验的一个失误就是将离心机的转速设置过高,导致在显微镜下观察到的叶绿体形态大都破裂了。
实验四吖啶橙(acridineorange)染色
观察口腔上皮荧光
【目的要求】
1、熟悉荧光显微镜的原理及使用方法。
2、观察荧光染料染色后结合物发出的荧光。
【实验原理】
吖啶橙荧光染料可与细胞内DNA和RNA结合。
其吸收光谱405nm,发射的荧光光谱是530~640nm,因此,吖啶橙和不同的细胞成分结合后,可发射红橙黄绿蓝各色荧光。
【实验用品】
1.器材:
荧光显徽镜、载玻片、盖玻片、染色缸、牙签;
2.材料:
口腔黏膜上皮细胞临时制片;
3.试剂:
1)0.1mol/LpH7.0PBS液。
A液:
NaH2PO4·H202.76g加蒸馏水至100ml;
B液,Na2HPO4·7H205.36g加蒸馏水至100ml;
取A液16.5ml、B液33.5ml、NaCl8.5g用蒸馏水稀释至100ml。
2)0.1%吖啶橙原液:
0.1g吖啶橙加蒸馏水至100ml。
临用时配制0.01%吖啶橙染液:
将0.1%吖啶橙原液用PH7.0PBS液稀释。
3)95%乙醇
【方法与步骤】
1.用牙签刮取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上;
2.95%乙醇溶液固定5min;
3.滴加0.01%吖啶橙染液染色5min;
4.用PBS缓冲液缓慢冲洗;
5.加盖玻片镜检。
【实验结果】
1、现象观察:
在显微镜下可以观察到呈黄色或橙黄色的口腔上皮细胞。
2、图片
见图4.1、图4.2
【实验总结】
通过本次实验学会了刮取口腔黏膜上皮细胞并制作临时装片的方法,学会了使用丫啶橙染色的方法。
实验五植物细胞骨架的光学显微镜观察
【实验目的】
掌握植物细胞骨架的制备方法,并用光镜观察洋葱内皮细胞的骨架网络结构。
【实验原理】
细胞骨架(cytoskeleton),是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构,根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。
细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。
本实验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时,可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉,但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来,后者用考马斯亮蓝R250 染色,在光学显微镜下可见一种网状结构。
【实验用品】
1.器材:
显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯;
2.实验材料:
洋葱鳞茎;
3.试剂:
1)pH6.8的磷酸缓冲液;
索伦森(Sorensen)磷酸缓冲液
溶液A:
Na2HPO4·2H2O11.876g加蒸馏水至1L
溶液B:
KH2PO49.08g加蒸馏水至1L
对照下表取一定体积的溶液A,再加入足够的溶液B至总体积达100ml,即得到所需pH的缓冲液。
溶液A
pH
溶液A
pH
溶液A
pH
0.6
4.9
49.2
6.8
81.8
7.4
2.3
5.3
61.2
7.0
85.2
7.5
4.9
5.6
67.0
7.1
88.5
7.6
12.1
6.0
72.6
7.2
93.6
7.8
26.4
6.4
77.7
7.3
96.9
8.0
2)M-缓冲液:
50mmol/L(pH 6.7)咪唑、50mmol/LKCl 、 0.5mmol/LMgC12 、1mmol/L EGTA 、0.1mmol/LEDTA 、 1mmol/L巯基乙醇、4mmol/L甘油 、1mol/L HCl 调pH 至7.2。
3)1%TritonX-100:
用M-缓冲液配制。
4)3%戊二醛:
用pH6.8的磷酸缓冲液配制。
5)0.2%考马斯亮蓝R250 染液:
0.8g考马斯亮蓝R250、46.5ml甲醇、7ml冰醋酸 、46.5ml蒸馏水。
6)50%,70%,95%乙醇
7)叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶
【实验步骤】
1.取材:
撕取洋葱鳞茎内表皮0.5~1cm2,浸入装有磷酸缓冲液(PH6.8)的小烧杯中,处理5~10分钟。
2.去垢处理:
弃去PBS缓冲液,用吸水纸吸净剩余的PBS,加适量1%TritonX-100,使液体充分浸泡材料,并立即放入37℃恒温箱或水浴锅中处理30分钟。
3.冲洗:
吸去1%TritonX-100,立即加入M缓冲液轻轻冲洗3次,每次3~5分钟。
4.固定:
用吸管将M缓冲液吸尽,加入3%戊二醛,固定10~20分钟。
5.冲洗:
吸去3%戊二醛固定液,用磷酸缓冲液(pH6.8)冲洗3次,每次3~5分钟。
6.染色:
吸去PBS缓冲液,加入适量0.2%考马斯亮蓝R250染料,染色10~20分钟。
7.制片:
吸去染料,用水冲洗(注意不要将材料丢失)。
将洋葱表皮伸展铺平于载玻片上,加盖盖玻片。
8.镜检:
将制好的片子置于低倍镜下,可见到规则排列的长方形洋葱表皮细胞轮廓,细胞质内可见到被染成蓝色的粗细不等的分枝状结构,这便是细胞骨架。
转高倍镜继续观察,调节细螺旋可见到细胞骨架的立体结构。
在有样品的50ml烧杯中,顺序通过如下药物:
50%、70%、95%乙醇,95%乙醇+叔丁醇(1:
1),叔丁醇(每级5~10min);或正丁醇、正丁醇、二甲苯、二甲苯(每级5~10分钟),然后捞取样品,平展于载玻片上,经镜检,效果好的可加一滴中性树胶,盖上盖玻片。
【实验结果】
1、现象观察:
在普通光学显微镜下可以观察到亮蓝色细胞骨架结构。
2、图片
见图5.1
【作业与思考】
1、绘出洋葱细胞的骨架网络分布。
答:
见图5.1
2、根据M-缓冲液的成分,分析其作用。
答:
咪唑:
稳定PH值,缓冲作用。
KCL:
提供离子,对骨架起聚合作用。
MgCL2:
提供离子,对骨架起聚合作用。
EGTA:
螯合Ca2+,Ca2+对聚合不利。
巯基乙醇:
起还原作用,稳定骨架结构。
【
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