挥发性盐基氮检测作业指导书.docx

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挥发性盐基氮检测作业指导书

挥发性盐基氮检测作业指导书

挥发性盐基氮检测作业指导书

【微量扩散法】

1.目的

为规范肉类新鲜度检测岗位操作和确保检测结果的准确性和一致性。

2.适用范围

本手册适用于化验员对肉类TVB-N的测定。

3.职责

检验人员负责对肉类TVB-N的检测，并根据检验结果进行判定。

4.工作程序

4.1.原理

肉类TVB—N原理：

挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。

挥发性含氮物质可在37℃碱性溶液（饱和碳酸钾溶液）中释出，挥发后吸收于吸收液（2%硼酸）中，用标准酸滴定，计算含量。

4.2.使用试剂

4.2.1.饱和碳酸钾溶液

称取50g碳酸钾，加50mL水，搅拌助溶、过滤，使用上清液。

4.2.2.水溶性胶

称取10g阿拉伯胶，加10mL水，再加5mL甘油及5g无水碳酸钠（或无水碳酸钾），研匀。

4.2.3.硼酸吸收液

硼酸（20g/L）溶液。

用精确到0.01g的电子天平准确称取1.00g的硼酸,用50mL的移液管准确移取50mL的蒸馏水,配制成20g/L的硼酸溶液.

4.2.4.盐酸[c（HCL）=0.001mol/L]的标准滴定溶液。

参照GB/T601-2002

操作步骤：

4.2.5.肉类品取样，暂存

用洁净的刀取肉类表层2cm处，去皮和肉筋，用小胶袋包装好暂存在0～5℃冰箱内暂存。

4.2.6.样品处理，搅碎

将肉取出，用刀或剪刀除去脂肪、骨、肌腱，绞碎搅匀,

用绞肉机碎肉时注意安全。

4.2.7.称取10g样品放入250ml三角瓶：

用镊子将绞

好的肉准确镊取10g，放入三角瓶。

4.2.8.将100ml蒸馏水放入三角瓶内摇匀：

用量筒准确量取100ml蒸馏水，先倒入约15ml蒸馏水入三角瓶，震荡，用玻璃棒搅拌，再放入剩余的蒸馏水后用锡箔纸封存好。

4.2.9.将三角瓶放入震荡器振荡：

震荡30min。

4.2.10.将均质液过滤：

用滤纸将均质液过滤。

待用。

4.2.11.

水溶性胶配制

4.2.11.1.称取阿拉伯树胶和无水碳酸钠：

按一个样品需用三个扩散皿，每皿需用1克树胶、

0.5克碳酸钠的量来称取阿拉伯树胶和无水碳酸钠.并记录药品使用记录表.

4.2.11.2.加蒸馏水水和甘油研磨搅匀:

按一个样品需用三个扩散皿,每皿需用0.5ml甘油和

1ml蒸馏水的量来用移液管移取蒸馏水和甘油,并和阿拉伯树胶、无水碳酸钠一起研磨搅匀.

称量好的阿拉伯树胶、无水碳酸钠无水碳酸钠与蒸馏水混合

加入阿拉伯树胶混合加入甘油

4.2.11.3.在微量扩散皿外缘涂抹胶:

用玻璃棒或药匙在微量扩散皿外边缘涂抹，注意手不能

碰到微量扩散皿的内壁。

4.2.12.样品处理

4.2.12.1.用1ml吸管吸取1ml饱合K2CO3，放入扩散皿的外圈内.

4.2.12.2.用1ml吸管吸取1ml样品滤液，放入扩散皿的外圈内，与饱合K2CO3相反的另一边。

注意两液不能混合。

4.2.12.3.

用1ml吸管吸取1ml2%硼酸溶液。

加入扩散皿的内圈中。

4.2.12.4.

4.2.12.5.用1ml吸管吸取1ml2%甲基红乙醇溶液，放入一个小广口瓶内。

4.2.12.6.用1ml吸管吸取1ml1%次甲基蓝溶液，与甲基红液同一小广口瓶内。

4.2.12.7.

摇匀混合：

将（13）和（14）两指示剂混合。

4.2.12.8.用滴管移取2至3滴，放入扩散皿的内圈中。

4.2.12.9.加盖，摇匀。

将上述药品混合后即加盖摇匀。

注意力度不要太大，以免溶液溢出。

同时需作平行试验和空白试验。

（每个样品需做3个平行实验,两个空白试验）空白试验只是皿外室一侧加样品浸抽液1ml，改为加入无氨蒸馏水，其余操作不变。

4.2.13.培养

在36℃±1℃培养箱内存放2小时。

4.2.14.

滴定

培养箱里存放2h后取出,开启盖子（滴定时才能开盖）,用0.001mol/L的盐酸小心滴定皿内室的吸收液至终点呈蓝紫色。

4.2.15.计算

挥发性盐基氮（TVB-N,mg/100g）=（V1-V2）/（W*1/100）*14*100

式中V1–样品所耗0.001mol/L盐酸标准溶液的量（mL）

V2–空白所耗0.001mol/L盐酸标准溶液的量（mL）

W–样品的重量

14–氮分子量

100–换成100克肉的挥发性盐基氮系数

4.2.16.报告

4.2.16.1.计算出的结果挥发性盐基氮,以毫克每百克（mg/100g）报告；

4.2.16.2.肉类挥发性盐基氮≤15mg/100g。

5.相关文件

5.1.GB/T601-2002《化学试剂标准滴定溶液的制备》

5.2.GB5009.44-2003《肉与肉制品卫生标准的分析方法》

6.记录表格

6.1.《药品使用记录表》

6.2.《TVB-N检测原始记录表》