核酸检测实验室的规范化管理_精品文档.ppt
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核酸检测实验室的规范化管理核酸检测实验室的规范化管理一、规范化设置及管理一、规范化设置及管理(一一一一)临床基因扩增检验实验室区域设置原则临床基因扩增检验实验室区域设置原则临床基因扩增检验实验室区域设置原则临床基因扩增检验实验室区域设置原则11临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域:
临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域:
试剂贮存和准备区;标本制备区;试剂贮存和准备区;标本制备区;扩增反应混合物配制和扩增区;扩增产物分析区。
扩增反应混合物配制和扩增区;扩增产物分析区。
(如使用全自动分析仪,区域可适当合并)(如使用全自动分析仪,区域可适当合并)22各各工工作作区区域域必必须须有有明明确确的的标标记记,避避免免不不同同工工作作区区域域内内的的设设备备、物品混用。
物品混用。
33进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,即:
进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,即:
试试剂剂贮贮存存和和准准备备区区标标本本制制备备区区扩扩增增反反应应混混合合物物配配制制和扩增区和扩增区扩增产物分析区。
扩增产物分析区。
44不不同同工工作作区区域域使使用用不不同同的的工工作作服服(例例如如不不同同的的颜颜色色)。
工工作作人人员离开各工作区域时,不得将工作服带出。
员离开各工作区域时,不得将工作服带出。
(二)工作区域仪器设备配置标准
(二)工作区域仪器设备配置标准
(二)工作区域仪器设备配置标准
(二)工作区域仪器设备配置标准11试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区2-82-8和和-15-15冰箱;混匀器;微量加样器冰箱;混匀器;微量加样器(覆盖覆盖1-10001-1000l)l);移动紫外灯移动紫外灯(近工作台面近工作台面);消耗品;消耗品:
一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯带滤芯);专用工作服和工作鞋;专用办公用品。
专用工作服和工作鞋;专用办公用品。
22标本制备区标本制备区1-81-8冰箱、冰箱、-20-20或或-80-80冰箱;高速台式冷冻离心机;冰箱;高速台式冷冻离心机;混匀器;水浴箱或加热模块;微量加样器混匀器;水浴箱或加热模块;微量加样器(覆盖覆盖1-10001-1000l)l);可移动紫外灯可移动紫外灯(近工作台面近工作台面);超净工作台;消耗品;超净工作台;消耗品;一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯带滤芯);专用工作服和工作鞋;专用办公用品;专用工作服和工作鞋;专用办公用品;如需处理大分子如需处理大分子DNADNA,应备有超声波水浴仪。
应备有超声波水浴仪。
3.3.3.3.扩增反应混合物配制和扩增区扩增反应混合物配制和扩增区扩增反应混合物配制和扩增区扩增反应混合物配制和扩增区核酸扩增仪;微量加样器(覆盖1-1000l);可移动紫外灯(近工作台面);消耗品(一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯);专用工作服和工作鞋;专用办公用品.4.4.4.4.扩增产物分析区扩增产物分析区扩增产物分析区扩增产物分析区基本仪器设备如下:
基本仪器设备如下:
微量加样器微量加样器(覆盖覆盖1-10001-1000l)l);可移动紫外灯;消耗品;可移动紫外灯;消耗品;专用工作服和工作鞋;专用办公用品专用工作服和工作鞋;专用办公用品。
(三)各区操作注意事项(三)各区操作注意事项下述操作在该区进行:
下述操作在该区进行:
下述操作在该区进行:
下述操作在该区进行:
储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
在本区的实验操作过程中,必须戴手套并经常更换。
在本区的实验操作过程中,必须戴手套并经常更换。
在本区的实验操作过程中,必须戴手套并经常更换。
在本区的实验操作过程中,必须戴手套并经常更换。
操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。
操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。
操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。
操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。
严禁用嘴吸取液体,加样器和吸头等必须经高压处理。
严禁用嘴吸取液体,加样器和吸头等必须经高压处理。
严禁用嘴吸取液体,加样器和吸头等必须经高压处理。
严禁用嘴吸取液体,加样器和吸头等必须经高压处理。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。
实验室及其设备的使用必须有日常记录。
实验室及其设备的使用必须有日常记录。
实验室及其设备的使用必须有日常记录。
实验室及其设备的使用必须有日常记录。
1.1.1.1.试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区试剂贮存和准备区2.2.标本制备区标本制备区标本制备区标本制备区下述操作在该区进行:
下述操作在该区进行:
下述操作在该区进行:
下述操作在该区进行:
标标标标本本本本保保保保存存存存、核核核核酸酸酸酸(RNARNARNARNA、DNADNADNADNA)提提提提取取取取、贮贮贮贮存存存存及及及及其其其其加加加加入入入入至至至至扩扩扩扩增反应管和测定增反应管和测定增反应管和测定增反应管和测定RNARNARNARNA时时时时cDNAcDNAcDNAcDNA的合成。
的合成。
的合成。
的合成。
为为为为避避避避免免免免样样样样本本本本间间间间的的的的交交交交叉叉叉叉污污污污染染染染,加加加加入入入入待待待待测测测测核核核核酸酸酸酸后后后后,必必必必须须须须盖盖盖盖好好好好含含含含反反反反应混合液的反应管。
应混合液的反应管。
应混合液的反应管。
应混合液的反应管。
对对对对具具具具有有有有潜潜潜潜在在在在传传传传染染染染危危危危险险险险性性性性的的的的材材材材料料料料,必必必必须须须须有有有有明明明明确确确确的的的的样样样样本本本本处处处处理理理理和和和和灭灭灭灭活程序。
活程序。
活程序。
活程序。
样样样样本本本本处处处处理理理理对对对对核核核核酸酸酸酸扩扩扩扩增增增增有有有有很很很很大大大大影影影影响响响响,必必必必须须须须使使使使用用用用有有有有效效效效的的的的核核核核酸酸酸酸提提提提取取取取方法。
方法。
方法。
方法。
3.3.扩增扩增扩增扩增区区区区下述操作在该区进行:
下述操作在该区进行:
下述操作在该区进行:
下述操作在该区进行:
DNADNADNADNA或或或或RNARNARNARNA扩增。
扩增。
扩增。
扩增。
在巢式在巢式在巢式在巢式PCRPCRPCRPCR测定中,通常第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式测定中,通常第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式测定中,通常第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式测定中,通常第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增由较高的危险性,第二次加样必须在本区内进行。
扩增由较高的危险性,第二次加样必须在本区内进行。
扩增由较高的危险性,第二次加样必须在本区内进行。
扩增由较高的危险性,第二次加样必须在本区内进行。
不能从本区再进入任何不能从本区再进入任何不能从本区再进入任何不能从本区再进入任何“上游上游上游上游”区域,可降低本区的气压以避免区域,可降低本区的气压以避免区域,可降低本区的气压以避免区域,可降低本区的气压以避免气溶胶从本区漏出。
气溶胶从本区漏出。
气溶胶从本区漏出。
气溶胶从本区漏出。
为避免气溶胶所致的污染,尽量减少在本区的走动。
为避免气溶胶所致的污染,尽量减少在本区的走动。
为避免气溶胶所致的污染,尽量减少在本区的走动。
为避免气溶胶所致的污染,尽量减少在本区的走动。
4.4.4.4.扩增产物分析区扩增产物分析区扩增产物分析区扩增产物分析区下述操作在本区内进行:
扩增片段的测定。
下述操作在本区内进行:
扩增片段的测定。
下述操作在本区内进行:
扩增片段的测定。
下述操作在本区内进行:
扩增片段的测定。
本区是最主要的扩增产物污染来源,因此必须注意避免通过本本区是最主要的扩增产物污染来源,因此必须注意避免通过本本区是最主要的扩增产物污染来源,因此必须注意避免通过本本区是最主要的扩增产物污染来源,因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。
区的物品及工作服将扩增产物带出。
区的物品及工作服将扩增产物带出。
区的物品及工作服将扩增产物带出。
本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙稀酰胺、甲醛或同位素等,应注意实验人员的安全防护。
丙稀酰胺、甲醛或同位素等,应注意实验人员的安全防护。
丙稀酰胺、甲醛或同位素等,应注意实验人员的安全防护。
丙稀酰胺、甲醛或同位素等,应注意实验人员的安全防护。
本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性面区域的可能性面区域的可能性面区域的可能性二、质量保证二、质量保证临临临临床床床床基基基基因因因因扩扩扩扩增增增增检检检检验验验验实实实实验验验验室室室室质质质质量量量量保保保保证证证证涉涉涉涉及及及及到到到到整整整整个个个个基基基基因因因因扩扩扩扩增增增增检检检检验验验验所所所所有有有有阶阶阶阶段段段段,即即即即测测测测定定定定分分分分析析析析前前前前的的的的标标标标本本本本采采采采集集集集处处处处理理理理、测测测测定定定定中中中中的核酸提取,扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。
的核酸提取,扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。
的核酸提取,扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。
的核酸提取,扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。
(一)标本的采集
(一)标本的采集
(一)标本的采集
(一)标本的采集
(二)标本的稳定化处理
(二)标本的稳定化处理
(二)标本的稳定化处理
(二)标本的稳定化处理(三)标本的运送(三)标本的运送(三)标本的运送(三)标本的运送(四)标本的贮存(四)标本的贮存(四)标本的贮存(四)标本的贮存(五)标本的处理(五)标本的处理(五)标本的处理(五)标本的处理(核酸提取核酸提取核酸提取核酸提取)(六)靶核酸的逆转录(六)靶核酸的逆转录(六)靶核酸的逆转录(六)靶核酸的逆转录CFIT)CFIT)CFIT)CFIT)和扩增和扩增和扩增和扩增(七)污染(七)污染(七)污染(七)污染(八)扩增产物的分析(八)扩增产物的分析(八)扩增产物的分析(八)扩增产物的分析(九)质量控制(九)质量控制(九)质量控制(九)质量控制
(一)标本的采集
(一)标本的采集nn常常常常用用用用于于于于基基基基因因因因扩扩扩扩增增增增检检检检测测测测的的的的临临临临床床床床标标标标本本本本包包包包括括括括EDTAEDTAEDTAEDTA或或或或构构构构橼橼橼橼酸酸酸酸钠钠钠钠抗抗抗抗凝凝凝凝全全全全血血血血或或或或骨骨骨骨髓髓髓髓、血血血血清清清清或或或或血血血血浆浆浆浆、痰痰痰痰、脑脑脑脑脊脊脊脊液液液液、尿尿尿尿及及及及分分分分泌泌泌泌物物物物等等等等。
采采采采血血血血液液液液等等等等样样样样本本本本时时时时,应应应应使使使使用用用用一一一一次次次次性性性性密密密密闭闭闭闭容容容容器器器器,如如如如真真真真空空空空采采采采血血血血管管管管。
当当当当使使使使用用用用非非非非密密密密闭闭闭闭采采采采样样样样系系系系统统统统时时时时,如如如如尿尿尿尿、分分分分泌泌泌泌物物物物和和和和骨骨骨骨髓髓髓髓的的的的采采采采样样样样,必必必必须须须须注注注注意意意意防防防防止止止止来来来来自自自自采采采采样样样样者者者者的皮屑或分泌物的污染。
采样时必须戴一次性手套。
的皮屑或分泌物的污染。
采样时必须戴一次性手套。
的皮屑或
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