天然药物化学试验指导试验室注意事项.docx
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天然药物化学试验指导试验室注意事项
天然药物化学实验指导
实验室注意事项…………………………………………………………………
(1)
实验一芦丁的提取分离与鉴定………………………………………………
(2)
实验二艾叶及丁香中挥发油的提取鉴定……………………………………(5)
实验三从红辣椒中分离红色素………………………………………………(7)
实验四咖啡因的提取与分离………………………………………………(8)
自选实验薯蓣皂苷元的提取与分离…………………………………………(10)
自选实验甘草皂苷元的提取与分离…………………………………………(10)
自主设计实验……………………………………………………………………(15)
实验室注意事项
天然药物化学实验课具有实验周期长、使用有机溶剂品种多,用量较大等特点,所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、实验操作经常在加温,减压下进行,需要使用各种热源和电器,再加上实验室较为拥挤,若操作不慎,易引起着火、触电、中毒、爆炸等事故,为确保实验安全顺利进行,特作如下要求。
一、实验前必须预习实验内容,了解实验原理和操作程序,检查仪器是否完整,装置是否正确,检查合格后方可开始实验。
二、实验室内要保持严肃、安静,不得大声说话打闹;室内严禁吸烟,实验进行时不得擅自离开,必要时委托专人看管。
三、未经教师允许不得擅自使用明火,需使用明火时,实验台周围不得放置易燃有机溶剂,如发生火情,应保持镇静,立即报告指导教师,同时切断火源,移走易燃品!
用湿布闷盖或用灭火器进行灭火,切勿轻易用水,以免扩大火势。
四、实验时要做到整齐、清洁、用过的仪器要及时清洗并收人仪器柜内,保持水槽、仪器、桌面、地面四洁。
五、回流、蒸馏有机溶剂时,注意检查冷凝水是否通畅,装置不得密闭,接收有机溶剂时不得使用广口仪器,溶剂瓶不得敞口存放。
在进行减压操作时,必须使用安全瓶,弄清操作程序,以免造成回水等事故。
六、使用挥发性试剂或喷显色剂时,应在窗口或通风橱内操作,不慎溅在桌面上的化学药品必须立即清除。
身体直接接触化学物品后应及时用肥皂及大量水冲洗,如碱性试剂可用l%HAc溶液冲洗,酸性试剂可用3%NaHCO3溶液冲洗。
不要用酒精、丙酮等洗涤皮肤上的有机物,以免增加皮肤对有毒物质的吸收,眼睛里溅入化学试剂后,应立即用大量水冲洗,及时到校医室就诊。
七、使用电器设备(如水浴锅、紫外灯、旋转蒸发仪、循环水泵等)一定要按操作规程进行,不得在烘箱内干燥带有易燃性有机溶剂的仪器或物品,仪器发生故障时及时报告指导教师,不得擅自拆卸。
八、每次实验结果后的产品,应妥善包装好,贴好标签,写明级别、产率等,放入干燥器内保存,不得随意丢失。
九、实验结束后,值日生应做好实验室清洁卫生工作,整理好公共仪器、药品,检查水、电、门窗,经教师检查后方可离去。
实验一芦丁的提取分离与鉴定
一、实验目的
1、掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理和操作。
2、掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层析检查等手段在苷类结构鉴定中的应用。
二、黄酮类化合物的结构与性质
芦丁(Rutin)广泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁植物至少在70种以上,如烟叶,槐花米、荞麦和蒲公英中均含有,其中尤以槐花米(为植物Sophorujaponica的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。
提取芦丁的方法很多,目前我国多采用碱提取-酸沉淀法,其提取原理是依据芦丁结构中含有酚羟基,能与碱反应,生成盐而溶于水中,向此盐溶液中加入酸.则芦丁游离析出,此外,还可采用水和醇提取法。
芦丁具有Vp样作用,有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性。
主要用作防治高血压病的辅助治疗剂,多作口服,也可作注射用。
芦丁为淡黄色针晶,含三分子结晶水物的熔点174~178℃。
无水物熔点188~190℃,微溶于乙酸乙酯、丙酮,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等溶剂。
溶解度情况见下表:
结构式如下:
芦丁槲皮素
槲皮素为芦丁的苷元,含两分子结晶水物为黄色针晶(稀乙醇),于95~97℃失水,313~314℃分解,槲皮素可溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶,不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。
三、芦丁的提取分离和纯化
1、于500ml烧杯中加入水300ml,硼砂1g[1]加热至沸,投人槐花米粗粉20g,继续直火煮沸2~3分钟,在搅拌下小心加入石灰乳(1gCaO+10ml蒸馏水),调PH至8.5-9[2],保持微沸30分钟,趁热滤。
2、将滤液放冷至室温,在60~70℃下用浓盐酸调PH至4[3],静置6小时以上,析出沉淀,抽滤,用蒸馏水洗沉淀1~2次至中性。
所得沉淀为芦丁粗品。
3、重结晶,将沉淀悬浮于蒸馏水中,加热煮沸15分钟,趁热抽滤。
滤液充分静置至不再析出沉淀,过滤,所得沉淀于60~70℃干燥,得芦丁精制品。
注:
[1]加硼砂目的是因其能与芦丁结合,起保护邻二羟基不被氧化破坏的作用,实验证明提取时加入硼砂,产品质量要好些。
[2]加入石灰乳既可达到碱溶解提取芦丁的目的,又可除去槐花米中大量的多糖类粘液质,但pH不能过高,否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出,煮沸时间不可过长,因其可导致芦丁的降解。
[3]pH过低会使芦丁形成烊盐而降低收率。
[4]利用芦丁冷热水中溶解度差异来达到结晶目的。
得到的沉淀要粗称一下,按照芦丁在热水中1∶200的溶解度加蒸馏水进行重结晶。
四、芦丁的鉴定
1、芦丁的定性反应:
取芦丁3~4mg,加乙醇5~6ml使溶,分成3份,做下述试验:
(1)取上述溶液1~2rn|,加少许镁粉,再加2滴浓盐酸,注意观察颜色变化。
(2)取上述溶液1~2ml,滴加2%的ZrOCl2的乙醇溶液,注意观察颜色变化情况,再加2%柠檬酸乙醇溶液,详细记录颜色变化情况[5]。
(3)α一萘酚反应(Molish'sReaction):
取上述溶液1~2ml,然后加等体积的10%α一茶酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁滴加硫酸,注意观察两液界面产生的颜色变化。
注:
[5]在样品溶液中加入2%ZrOCl2的乙醇溶液后,如溶液呈黄色示可能有C3-OH或C5-OH,如再加入2%柠檬酸乙醇溶液,黄色不褪示有C3-OH,如黄色褪去,加水稀释后转为无色,示无C3-OH,但有C5-OH。
(上述两种条件下生成的络合物对酸的稳定性不同,其中C3-OH、4一酮基络合物稳定性大于C5-OH、4一酮基络合物的稳定性)。
2、芦丁水解后苷元与糖的鉴定
(1)芦丁水解:
称取精制芦丁约1g,研细,加2%H2SO4100ml装人250ml锥形瓶中,加入沸石,直火沸腾后保持2小时,放冷后抽滤,滤液保留作糖的鉴定。
水洗沉淀后,粗品用95%乙醇约10rnl煮溶回流,趁热过滤,放置加水至50%左右浓度,得黄色针晶。
(2)苷元的鉴定
1>苷元的碱降解
+
槲皮素间苯三酚原儿茶酸
取苷元50mg,加水和95%乙醇各5ml,加氢氧化钾4g在石棉网上直火加热回流5小时,反应后挥去乙醇,用稀盐酸调成酸性(pH约为2),用乙醚振摇萃取,取醚层回收醚,残液进行缓冲纸层析,然后用Sulphanilicacid[6]试剂显色,并与间本三酚和原儿茶酸标准品对照层析结果[7]。
注:
[6]Sulphanilicacid试剂组成:
A液:
10%Na2CO3水溶液;
B液:
0.5%sulphanilicacid;C液:
0.5%NaNO2水溶液。
[7]苷元降解产物的层析结果如下图:
先喷A液,然后再喷B和C的等量混合液(B与C用时临时混合)。
.
1、间苯三酚
2、降解液
3、原儿茶酸
123
2>槲皮素五乙酰化物的制备:
称取精制槲皮素0.2g,置25ml干燥的锥形瓶中,加6ml醋酐和1滴浓硫酸,振摇使完全溶解,接上空气冷凝管,于水浴上加热30分钟,放冷,搅拌下倾入100ml冰水中,搅至油滴消失,得灰白色粉末状沉淀,放置,抽滤,洗涤,用95%乙醇将沉淀重结晶,无色针晶,为五乙酰化槲皮素,熔点192~194℃。
(3)芦丁和桷皮素的薄层层析鉴定
吸附剂:
青岛硅胶G(10~40u)以0.3%CMC-Na水溶液为粘合剂制板,105℃活化半小时。
展开剂:
(任选一种)
A、氯仿一甲醇一甲酸(15:
5:
1)
B、氯仿一丁酮一甲酸(5:
3:
1)
显色剂:
1%三氯化铁和1%铁氰化钾水溶液,临用时等体积混合
(4)糖的鉴定
1>纸层析鉴定:
取水解溶液10ml,于水浴上加热,在搅拌下加BaCO3或Ba(OH)2细粉中和至中性,滤除生成的BaCO3沉淀,滤液小心浓缩至1~2rnl(水浴浓缩,注意防止炭化),得样品液以葡萄糖、鼠糖标准品作对照进行纸层析。
展开剂:
正丁醇一冰醋酸一水(4:
1:
5上层)径向展开。
显色剂:
邻苯二甲酸一苯胺试剂,喷于滤纸上,于105℃加热数分钟至斑点出现,观察结果并记录。
2>脎的制备及鉴定
余下的水解液小心用40%NaOH液中和,滤除棕红色沉淀,水浴上加热浓缩至约30ml,滤后加1g盐酸苯肼,2gNaAC,沸水浴上加热30~40分钟,析出黄色混合糖脎,停止加热,冷却后取结晶少许,于显微镜下观察,鼠李糖脎为簇状针晶,葡萄糖膝为扫帚状聚针晶。
滤取糖脎结晶,水洗,干燥后,溶于丙酮,滤除不溶物,滤液加水使成30%丙酮液即析出葡萄糖脎,抽滤后以少量丙酮重结晶一次,熔点209℃,母液加水稀释,析出鼠李糖脎,稀乙醇重结晶,熔点185℃。
五、芦丁、槲皮素的光谱鉴定
1.UV光谱法:
将适量分离得到的芦丁、槲皮素精制品溶解与适量甲醇中,在200~400nm测定紫外光谱;然后加入诊断试剂,再在200~600nm测定紫外光谱,分析数据,确定结构。
2.NMR法:
将芦丁、槲皮素精制品溶解与DMSO-d6中,测定其1H-NMR13C-NMR光谱,分析图谱,推断结构,指出峰归属。
附:
实验二艾叶及丁香中挥发油的提取鉴定
一、实验目的
1、掌握挥发油的提取方法、原理;
2、通过对比掌握两种挥发油提取器的构造和使用。
3、了解TLC法在鉴定挥发油成分中的应用。
二、实验材料
艾叶50克,丁香30克,5%香草醛浓硫酸液,小标本缸1个,环已烷:
乙酸乙酯(9:
1)5ml,石油醚:
乙酸乙酯(3:
1)5ml,3克硅胶G,9ml蒸馏水,载玻片10片。
三、实验内容
(一)艾叶中挥发油的提取、鉴定
艾叶为菊科植物艾(Artemisiaargyileve,etVant)的干燥叶,其同属植物野艾(ArtemisiaVulgarisL—)的干燥叶也可作艾叶用。
艾叶中挥发油的主要成分是水芹烯(Phellandrene),毕澄茄烯(Cadinene),侧柏醇(Thujylalcohol)等。
艾叶油呈兰绿色。
辛辣气味,比重小于1。
1、提取
取艾叶50克放入1000ml圆底烧瓶中,接挥发油提取器(比重小于1),回流3小时后,取出油作TLC鉴定。
2、鉴定
硅胶G硬板,105℃活化半小时,点样,用环己烷—乙酸乙酯(9:
1)展开,5%香草醛浓硫酸液显色,观察班点颜色、个数,计算Rf值。
(二)丁香挥发油的提取鉴定
丁香油为桃金娘科植物丁香(Syzygiumaromaticum[L.]Merv.etPerry)的干燥花蕾经蒸馏所得的挥发油。
为淡黄色或无色的澄明油状液体,有丁香的特殊芳香气。
露置空气中或贮存日久则渐浓厚而色变棕黄。
不溶于水,易溶于醇,醚或冰醋酸中,比重为1.038-1.060。
丁香油中主要成分是丁香油酚(Eugeud),乙酰丁香油酚,ß-石竹烯(ß-Caryophyllene)以及甲基正戊基酮,水杨酸甲酯,律草烯(Humulene),苯甲醛、苄醇、间甲氧基苯甲醛,乙酸苄酯,胡椒酚(Chavicot)等。
1、提取
丁香20克置500rnl圆底烧瓶中,上接挥发油提取器(比重大于1),回流3小时,取出油作TLC鉴定。
2、鉴定
2.1TLC法:
硅胶G硬板,105℃活化半小时,点样,用石油醚—乙酸乙酯(3:
1)展开,5%香草醛浓硫酸溶液显色,观察斑点颜色,个数,计算Rf值。
丁香酚
2.2气相色谱法:
用微量注射器吸取1μl挥发油,由进样器注入,样品被载气带入色谱柱,由于各组分在两相中的分配系数不等,各组分将按分配系数大小的顺序依次被载气带出色谱柱,经检测器检测,记录器记录色谱峰,记录下各峰的保留时间。
2.3GC/MS法:
用微量注射器吸取1μl挥发油,由进样器注入气相色谱—质谱仪,经分离后得到的各个组分依次进入分离器,浓缩后的各组分依次进入质谱仪。
质谱仪对每个组分进行检测和结构分析。
实验三红辣椒中红色素的分离
一、实验目的
1、掌握薄层色谱板、色谱柱的制作及用以分离天然化合物的技术;
2、了解红辣椒所含色素的性质及其分离法。
二、红辣椒中的红色素
红辣椒是辣椒Capsicumannum的成熟果实,含有几种色泽鲜艳的色素,主要为红色素。
在红辣椒色素的薄层色谱中,可观察到一个大的鲜红色的斑点。
红辣椒的深红色主要由此色素产生。
研究结果证实这种红色素由辣椒红的脂肪酸酯组成。
三、实验内容
1、材料:
红辣椒粉0.5~1g,二氯甲烷20ml,柱层析用硅胶10g,薄层层析用硅胶2g,2×20cm色谱柱1支,载玻片6块,层析槽1个,棉花少许,磁蒸皿1个。
2、操作:
2.1薄层色谱的制备:
取6块载玻片洗净,干燥,平铺于台面,称薄层用硅胶2g于小烧杯内,按硅胶蒸馏水(1:
3)的比例加水,用玻璃棒将硅胶与水充分混匀,均匀地倒在备好的玻片上,再抖动玻片,使硅胶铺平,晾干后于105℃活化30分钟,或80℃烘2小时,取出放冷后,放入干燥器备用。
2.2提取:
称取红辣粉0.5g放入25ml或50ml圆底烧瓶中,加2粒沸石,加10mlCH2Cl2,回流20分钟,放至室温,过滤,得滤液,备用。
2.3柱色谱分离红色素:
1〉装柱:
取色谱柱洗净,干燥,放一小块脱脂棉在基底部,然后慢慢加入层析硅胶10克,同时用一段木条轻轻敲柱,以利于硅胶均匀沉降,至硅胶顶面不再下降为止,装柱完毕。
这是干法装柱的一种方法。
此外还有湿法装柱。
2〉拌样:
取一洗净、干燥的磁蒸皿称重,然后在磁蒸皿中放入0.2克层析硅胶,将此装有硅胶的磁蒸皿置于水浴上,同时滴入辣椒色素提取液拌匀,挥干溶剂至磁蒸皿恒重。
3〉上样:
将样品轻轻放在柱顶(注意不能破坏柱顶面),敲打色谱柱至样品带厚薄均匀,表面平滑,然后再在样品带上轻轻铺一层白硅胶及一块脱脂棉,以保护样品带。
4〉色谱分离:
缓缓倒入CH2Cl2约10ml进行洗脱,洗脱剂展至柱底即停止层析。
可见硅胶柱上呈现两条明显的色带。
将两色带分别挖出,用CH2Cl2分别洗脱,即得红色素。
2.4红色素的鉴定:
1〉薄层色谱鉴定:
用毛细管将滤液点于色谱板上(注意斑点直径不得大于0.3crn),薄层板斜放于盛有少量展开剂(CH2Cl2)的层析槽内(注意点样斑点不要浸在展开剂中),盖上盖子后开展层析,待展开剂行至薄层板顶端时,取出、立即划出溶剂前沿线,记录各斑点颜色,计算Rf值,(辣椒红Rf值约为0.6)
2〉红外光谱鉴定:
取所得红色素少许,交光谱室,做成盐片扫描,将图谱与标准红外光谱比较。
2.5柱色谱的注意事项:
1〉装柱过程不能间断,装好的色谱柱不应有气泡、裂痕。
2〉吸附剂的置一般不超过色谱柱长度的3/4。
3〉装好的柱子其吸附剂的顶面一定要平
4〉上样时,样品厚度要一致,表面平滑。
实验四咖啡因的提取与分离
一、实验目的:
1、掌握生物碱的提取分离方法。
2、了解咖啡因的性质及鉴定方法。
二、来源与性质:
咖啡因(Caffeine)即咖啡碱,属黄嘌岭类生物碱,分子式C8H11O2N4,分子量195,熔点238℃,于178℃升华。
存在于茶叶,咖啡、可可及其制成品中。
为人们普遍服用。
药物咖啡因用作心脏、呼吸器官和神经兴奋剂,过度使用咖啡因会增加抗药性和产生轻度上瘾。
咖啡因
本实验以茶叶为原料即山茶科植物茶(Camelliasinensiso.Ktze)的芽叶。
(茶叶中含咖啡因一般在2%~4%,咖啡因的PKa1.22)。
用热水提取,加碳酸钙沉淀鞣质及黄酮类,重结晶即得咖啡因,并用混合熔点法、红外光谱等进行鉴定。
三、实验方法及注意事项:
1、咖啡因的提取与分离:
取茶叶30g,碳酸钙粉30g,加入500ml圆底烧瓶内,再加入250ml蒸馏水,水浴90℃加热回流25分钟,溶液趁热过滤,滤渣弃去,滤液用水浴冷却,然后将此滤液用三氯甲烷萃取三次,每次三氯甲烷25ml,萃取液倒入圆底烧瓶内,于水浴上加热蒸馏回收三氯甲烷。
粗咖啡因即残留在烧瓶内,称重并记录咖啡因的近似重置,计算干茶叶中粗咖啡因的含量。
2、粗咖啡因的纯化:
在上述烧瓶内加入约10ml丙酮,水浴上加热至沸,使咖啡因粗品完全溶解,将此溶液倒入的50ml烧杯中,放冷,滤出晶体,再用丙酮作溶剂进行重结晶,直至得到纯净的白色晶体。
(注:
由于咖啡因在丙酮中很容易溶解,所以每次用丙酮重结晶时,要保持沸腾到热溶液中开始有晶体形成。
)称重,计算收率。
3、咖啡因的升华
咖啡因在常压情况下加热能升华而不分解,所以由茶叶中提取咖啡因可以采用升华法。
将茶叶烘干,磨成粉末,且平底锅内,均匀摊成约2寸厚的落层,锅上加帽形的木制锅盖,盖上有一小孔,于锅下用直炎均匀地加热,起初茶叶中的含有的挥发性成分和有机物因破坏而生成的焦油蒸出,随后咖啡因缓缓升华,至升华完毕后(可用一纸条放人木盖的孔中,借以观察生成的焦油,至油稀少时,咖啡因升华也已完毕),停止加热,冷后,去盖,冷凝在茶叶末表面约1厘米厚的白色针状结晶体,即为精制咖啡因。
取出晶体,再经脱色和重结晶可得纯品。
表面一层茶叶末可能仍含有少量咖啡因,可供第二次再升华用。
4、咖啡因的鉴定:
(1)测定熔点:
在b型管内用甲基硅油为加热介质,测定所得产品熔点,如有咖啡因标准品和产品做混合熔点测定。
(2)红外光谱鉴别:
作25%饱和咖啡因的三氯甲烷溶液,测定其红外光谱,并与标准图谱或标准品图谱对照。
四、实验指导
(—)实验安排:
需8学时,一次实验在一天内完成。
(二)实验讲解要点:
(1)咖啡因提取分离中的溶剂萃取法及重结晶法。
(2)咖啡因升华方法介绍。
(三)预习思考题
(A)咖啡因的碱性如何?
为什么?
(2)咖啡因采用什么提取分离方法?
什么鉴定方法。
(四)仪器与药品(一组计)
仪器:
圆底烧瓶500ml1个
冷凝器1个
分液漏斗250mll个
烧杯50ml1个
b型管1个
自选实验薯蓣皂苷元的提取与分离
一、实验目的
1、掌握甾体皂苷元(亲脂性中性成分)的提取方法。
2、了解薯蓣皂苷元的性质及鉴定方法。
二、薯蓣皂苷元的结构和性质
薯蓣皂苷元(Diosgenin)是一种甾体皂苷元分子式C27H42O3分子量414.6,为白色结晶,mp204~207℃〔α〕25D129.3°(CHC13),溶于一般有机溶剂和醋酸。
不溶于水。
薯蓣皂苷元是目前多种甾体药物如口服避孕药(I号,Ⅱ号避孕药片)和甾体激素(如可的松)等的重要原料。
在植物界分布在薯蓣科薯蓣属(Dioscorea)植物中,我国的薯蓣属植物有80余种。
已用于生产的主要有盾叶薯蓣(D.ZinglberensisC,H,w。
ringht),穿龙薯蓣(D.nipponicaMakino),黄山药(D。
PanthaicaprainetBurkill),紫黄姜(D.nippomcaMakinoVarrosthaniprainetBurlt)等。
在植物体内薯蓣皂苷元是与葡萄糖、鼠李糖结合成薯蓣皂苷(Dioscin)而存在。
提取分离时,一般是先用稀酸将薯蓣皂苷水解成薯蓣皂苷元与单糖(葡萄糖、鼠李糖),因薯蓣皂苷元不溶于水,混存于植物残渣中,故可用有机溶剂(如石油醚)直接从植物残渣中提取出薯蓣皂苷元。
[注1]检查薯蓣皂苷元是否提尽,可用醋酐一浓硫酸(LiebermannBurchard)反应(操作见后)。
[注2]所得薯蓣皂苷元粗品用石油醚抽洗后,即可测定熔点,若熔点不合格,再行重结晶。
四、薯蓣皂苷元的鉴定
1、熔点测定:
204~207℃
2、薄层色谱鉴定:
应只呈现一个与标准晶Rf值一致的色斑。
标准品:
薯蓣皂苷元无水乙醇液。
样品:
白色晶体的无水乙醇液。
吸附剂:
硅胶G-CMC硬板。
展开剂:
石油醚一乙酸乙酯(7:
3)
显色剂:
10%磷钼酸乙醇溶液,喷雾后加热10~20分钟。
3、高效液相色谱鉴别:
比较样品与标准品保留时间。
标准品:
薯蓣皂苷元无水乙醇液。
样品:
白色晶体的无水乙醇液。
色谱柱:
ODS柱
流动相:
MeOH—H2O
4、化学反应:
(1)醋酐—浓硫酸(Liebermann-Burchard)反应:
取样品少许,加醋酐约0.5ml溶解,倾取部分于比色皿内,沿边缘小心滴加浓H2SO4
1滴,呈红、紫色,最后渐变为污绿色为正反应。
(2)氯仿浓硫酸反应(Salkowski):
样品少许溶于1ml氯仿,沿试管壁滴加浓硫酸1ml后,在氯仿层呈现红色,浓硫酸层有绿色荧光。
5、制备衍生物:
乙酰化物的制备:
取样品100mg溶于约8ml吡啶中,加入20ml乙酸酐,煮沸30分钟至1小时后,将反应物倾入冰水中(冬季操作使用冷水即可),待析出白色晶体后抽滤,析出物用丙酮重结晶即得,熔点196~198℃。
自选实验甘草皂苷元的提取与分离
一、实验目的:
1、掌握三萜皂苷的提取、分离方法及薄层色谱技术;
2、掌握甘草皂苷及其苷元的性质,结构和鉴定方法。
二、甘草皂苷及其苷元的结构和性质
甘草为豆科植物甘草GlycyrrhizauralersisFisch的干燥根及根茎。
甘草具有广泛的药理作用,包括抗溃疡、抗炎、镇咳、镇静等,我国资源丰富,使用极为广泛。
甘草中主要有效成分是一种溶血指数较低的,并具有甜味的五环三萜皂苷甘草酸(glycyrrhizicacid)或称甘草皂苷(glycyrrhizin),由于味甜,故又称甘草甜素。
由冰醋酸中结晶出来的甘草酸为无色柱状结晶,mp225℃,[α]20D57.2°(50%C2H5OH),易溶于热水,可溶于热稀乙醇,几乎不溶于无水乙醇或乙醚。
甘草酸经酸水解,生成二分子D—葡萄糖醛酸和甘草次酸(苷元)。
甘草次酸为18ß-H型(D/E环顺式),呈针状结晶,mp289℃,〔α〕20D63°(CHC13)。
甘草酸和甘草次酸都有促肾上皮质激素(ACTH)样的生理活性,临床用抗炎药,并用于胃溃疡病的治疗。
近年通过药理实验还发现甘草酸除有抗变态反应外,并有非特异性的免疫加强作用(类似于黄芪多糖、人参多糖对动物免疫功能的影响),同时能对抗CCl4对肝脏的急性中毒作用。
三、甘草次酸的提取和分离
1、总皂苷的提取:
生药粗粉30g,加入500rnl圆底烧瓶内,用10%EtOH300ml回流1小时,过滤除去药渣。
将提取液浓缩后加入浓盐酸调至PH2,收集沉淀,用少且水洗至中性,得甘草总皂苷。
2、皂苷的水解:
取总皂苷加1%HCL-MeOH溶液100ml,水浴上水解30分钟,除去部分溶剂后得到白色固体,MeOH得结晶,得粗皂苷元。
(含甘草次酸)。
3、分离:
采用反复硅胶吸附柱色谱进行分离。
常采用的洗脱剂系统:
石油醚—氯仿;氯仿一乙酸乙醋;氯仿一甲醇等。
四、甘草次酸的鉴定:
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1、化学反应:
(1)醋酐一浓硫酸反应(Liebermann-Burchard):
将样品溶于醋酐中,加浓
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