体外诊断试剂注册申报资料模板主要原材料的研究资料.docx
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体外诊断试剂注册申报资料模板主要原材料的研究资料
体外诊断试剂注册申报资料
XXXXX检测试剂盒(XXX法)
主要原材料的研究资料
XXXXX有限公司
一、主要原材料的选择
根据试剂盒组分,对市面常见竞争品牌进行比较测试,参考试剂性能,并比较相关试剂应用于反应体系中的表现以及采购难易、成本、口碑等多方面因素,择优选择适用于本试剂盒的主要原材料。
(一)、连接酶的选择
1.检测对象
A公司生产的XX酶和B公司生产的XX酶。
2.主要仪器
PCR仪、荧光PCR仪、QubitDNA荧光定量仪、漩涡混合器、迷你离心机、磁力架等。
3.研究方法和考核指标
3.1建库测试
使用待选择的两种XX酶分别对4例临床真实样本按照附件建库方法进行建库。
取1μL建库产物进行文库定量,并进行电泳检测。
要求:
建库产物文库浓度应≥PM和文库片段电泳条带分布应在-bp范围内。
3.2酶活测试(定性检测酶活性)
使用待选择的两种连接酶及非连接酶配制反应体系以?
?
为模板进行连接反应,并设置了空白对照,连接产物进行电泳检测。
表1连接酶酶活实验反应体系
要求:
2个供应商的连接产物电泳条带分布应单一,无连接酶和空白对照组的反应体系产物应无连接产物产生,呈现多条条带。
4.实验结果
4.1建库测试结果:
文库产量如表1,两个供应商文库产量浓度结果对比图见图1。
B公司的连接酶建库产量虽整体较高,但不稳定,样本(填入样本编号)的文库产量低于pM(3.1规定的指标)。
电泳结果如图2,两个供应商的连接酶产生的文库片段电泳条带分布应在-bp范围内。
(3.1规定的指标)
表1:
连接酶的选择:
文库产量及电泳结果(单位:
pM)
样本编号
A公司
B公司
*(如有不符合要求的请用高亮标出)
图1连接酶的选择:
文库产量对比图
图2:
连接酶的选择:
文库片段电泳条带分布
4.2酶活测试结果:
酶活测试结果见表2。
A公司和B公司的连接酶均能成功连接,酶活符合要求。
表2连接酶的选择:
酶活测试结果
泳道号
对应酶
结果
1
A公司连接酶
单一条带
2
B公司连接酶
单一条带
3
非连接酶
无连接产物,多个条带
4
空白
无连接产物,多个条带
图3连接酶的选择:
酶活测试结果电泳条带分布
5.实验结论
有以上实验结果可知,B公司生产的连接酶未能使样本(样本编号)的建库产物文库浓度未能达到pM。
而A公司酶连接效果较为稳定,各方面均能符合要求,因此将A公司生产的连接酶作为该试剂盒的主要原材料。
(二)、XXX酶的选择
1.检测对象
2.主要仪器
3.研究方法和考核指标
3.1建库测试
3.2荧光PCR测试
4.实验结果
5.实验结论
(三)、引物a(如标签引物)的选择
1.检测对象
A公司合成的引物a和B公司合成的引物a。
2.主要仪器
紫外分光光度计、QubitDNA荧光定量仪、漩涡混合器、迷你离心机。
3.引物的设计
说明引物的设计原理
4.研究方法和考核指标
分别从两家供应商的引物中选取3条引物进行以下四个性能指标的检查。
4.1外观及性状:
目测,应为半透明或不透明片状粉状物质,无异味,易溶于水和TE缓冲液。
4.2相对分子质量:
对合成的引物A,进行HPLC检测,根据每个碱基的分子质量(见附录2),计算理论的分子质量值与HPLC检测的分子质量值进行比较,HPLC检测的分子质量值与计算的理论分子质量值的差值应在±1%范围内。
4.3总量:
将引物溶解,使用Qubit3.0荧光定量仪测试引物浓度,与理论值进行比较;测定OD值换算的浓度与合成报告单的浓度相差±200%。
4.4碱基准确性:
检查质量报告单,合成的序列应与设计的序列一致性。
5.实验结果
5.1外观及性状:
两个供应商的引物均是呈薄膜粉状物质,加入TE溶液后全部溶解。
5.2相对分子质量结果见表8
表8引物A的选择:
相对分子质量
A公司
B公司
理论值
测定值
理论值差值
测定值
理论值差值
引物编号1
引物编号2
引物编号3
5.3总量测定见表9
表9引物A的选择:
总量测定(单位:
μM)
实测值
理论值
A公司
B公司
第一次
第二次
平均值
标准偏差
理论值差值
第一次
第二次
平均值
标准偏差
理论值差值
引物编号1
引物编号2
引物编号3
5.4碱基准确性检查两个供应商的引物碱基准确性均与设计一致。
6.实验结论
综上,A公司合成的引物a和B公司合成的引物a,在外观及性状,相对分子质量,总量和碱基准确性上均能符合要求,综合成本等因素,选择A公司合成的引物作为本试剂盒的主要原材料。
(四)、XXXX的选择
其他原材料的选择同样选取2-3个供应商生产的原材料采用一定的考核指标评价确定供应商,(供应商指生产厂家,非经销商)。
如无法确定哪些原材料需要确定供应商,可参考相关产品的技术审评指导原则。
二、主要原材料的检定
(一)、连接酶
1.外观
无色透明液体。
2.性能要求
2.1将原料配制成建库试剂组分,进行建库测试,建库产物文库浓度应PM和文库片段电泳条带分布应在-bp范围内。
2.2对原料进行酶活测试,应具有连接酶活性。
3.贮存条件
-18℃以下保存。
(二)、XXX酶
1.外观
无色透明液体。
2.性能要求
2.1将原料配制成建库试剂组分,进行建库测试,建库产物文库浓度应PM和文库片段电泳条带分布应在-bp范围内。
2.2对原料进行荧光PCR测试,Ct值应<,扩增曲线呈‘S’型。
3.贮存条件
-18℃以下保存。
(三)、标签引物
1.外观
半透明或不透明片状粉状物质,无异味,易溶于水和TE缓冲液。
2.性能要求
2.1总量:
使用分光光度计测定OD260,换算的浓度与报告单的浓度相差±10%。
2.2相对分子质量
分子质量值与理论计算的值相差±10%。
2.3碱基准确性
合成公司提供的合成证明文件上的序列与设计序列一致。
3.贮存条件
-18℃以下保存。
(四)、XXXX
1.外观
2.性能要求
3.贮存条件
-18℃以下保存。
三、试剂盒质控品的建立
试剂盒质控品是放置于试剂盒中,与试剂盒一起销售,用于质控样本检测过程的标准物质。
1.试剂盒质控品的组成
本试剂盒包括阳性质控品和阴性质控品各一,作为评价检测数据有效性的依据;在实际检测中,阳性质控品和阴性质控品与样本同步进行前处理上机。
2.试剂盒质控品的来源
说明质控品的来源,是真实临床样本还是实验室模拟样本,是否有经过提取等处理加工。
3.试剂盒质控品的制作
详细介绍质控品的制作方法,如何配置,如何定量等。
4.试剂盒质控品的定值方法
详细介绍质控品的定值方法。
5.试剂盒质控品的质量标准
举例:
5.1DNA和RNA总量
DNA和RNA的浓度都应大于或等于ng/μL。
5.2突变位点的确定
各个突变位点的分析结果应与供应商提供的突变位点一致。
5.3.贮存条件
-18℃以下保存。
6.试剂盒质控品的检验方法
举例:
6.1使用QubitDNA或RNA测试试剂盒,分别检测其DNA和RNA含量,结果应符合5.1的要求。
6.2使用建库试剂盒进行建库并测序分析质控品,结果应符合5.2的要求。
四、企业参考品的建立
为评价不同批次的试剂盒的产品性能、合理控制生产工艺过程、保证每批试剂的有效性和稳定性,建立企业参考品盘,分别考察试剂盒的阳性符合率、阴性符合率、检测限、精密度,评估试剂盒的成品性能。
企业参考品盘用于对每批试剂盒的质量检测。
1.企业参考品的来源
说明质控品的来源,是真实临床样本还是实验室模拟样本,是否有经过提取等处理加工。
2.企业参考品的组成
描述企业参考品盘由哪些参考品组成。
举例:
(1)阳性参考品:
阳性参考品应当包括对所申报产品的适用范围,并尽量设置中高低浓度。
如有特殊情况,特别考虑。
(2)阴性参考品:
不包含申报范围内位点的参考品,但尽量设置与申报范围位点相似的位点,考察试剂盒的特异性。
(3)检测限参考品:
建议包含所有的申报位点。
(4)精密度参考品:
精密度参考品设置要求可参考阳性/阴性参考品。
3.企业参考品的制作
详细介绍质控品的制作方法,如何配置,如何定量等。
4.企业参考品的定值方法
一般跟试剂盒质控品的定制方法一致
5.企业参考品的质量标准
一般包含以下几个指标,具体指标的要求针对产品性能设置。
5.1外观
5.2阳性参考品符合率
5.3阴性参考品符合率
5.4最低检测限参考品
5.5重复性
6.企业参考品盘的检验方法
用合格批次的试剂盒检测企业参考品盘,检测结果应符合5.1-5.5的要求。
7.企业参考品盘的保存条件和有效期
企业参考品盘?
?
℃保存?
年;?
?
℃保存?
年。
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