生物化学实验教案.docx
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生物化学实验教案.docx
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生物化学实验教案
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第3周第1讲
重点与难点
1.如何鉴别还原糖和非还原糖;
2.如何将非还原糖转化为还原糖。
主要内容与课堂安排
实验一糖的化学性质
一、主要内容
(一)原理
淀粉和蔗糖缺乏自由醛基(苷羟基)无还原性。
但在酸的作用下,淀粉和蔗糖很容易水解成为糊精及少量麦芽糖、葡萄糖,使之具有还原性。
淀粉溶液遇碘呈蓝色。
(二)糖的还原性(与Benedict试剂反应)
取4支试管,各加1mlBenedict试剂,混合均匀后,分别加4滴2%葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及1%淀粉溶液,摇动均匀,将各试管同时放入沸水浴中加热2~3分钟,然后取出放在试管架上冷却,注意观察试管中溶液颜色变化,是否有红色沉淀生成。
(三)蔗糖水解
取2支试管,编号后,分别加1ml2%蔗糖和1~2ml蒸馏水,向甲管中加3~5滴2%硫酸溶液,乙管中加3~5滴蒸馏水,混合均匀,然后将两支试管同时放入沸水浴中加热10~15分钟,取出两支试管放在试管架上冷却,甲管用10%NaOH溶液中和至中性。
再向甲乙管中各加1mlBenedict试剂,摇动均匀,将两支试管同时放入沸水浴中加热2~3分钟,观察甲、乙两管中颜色的变化,说明什么问题。
(四)淀粉与碘的作用
取一支试管加10滴1%淀粉溶液和1滴0.1%碘液,溶液立即出现蓝色,将试管放入沸水浴中加热5~10分钟,观察有何现象发生,然后取出试管,放置冷却,又有何变化。
(五)淀粉的水解
取1个小烧杯加10ml1%淀粉溶液和8滴浓盐酸,沸水浴中加热,每隔2~5分钟取出1小滴淀粉水解液在白瓷板上,滴1滴0.1%碘液,注意观察其颜色的变化,直到无蓝色出现为止。
冷却后,向小烧杯中逐滴加入20%NaOH溶液至弱碱性为止,此时,取出1ml淀粉水解液于1支试管中,1支试管加1ml1%淀粉溶液,在此2支试管中分别加入Benedict试剂,摇动均匀后,将2支试管同时放入水浴中加热2~5分钟,观察颜色变化,说明什么?
二、课堂安排
一人一组分工协作进行实验;注意仔细观察实验现象,准确记录实验数据;试管、移液管、吸管等不可交叉使用,以免糖液混淆,影响实验结果;要求实验前预习,并缴交预习报告和实验报告。
思考题与习题
淀粉遇碘实验为什么要在冷却后进行?
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第4周第2讲
重点与难点
1.原料应充分切碎;
2.重复过滤至澄清,用95%酒精提取。
主要内容与课堂安排
实验二果胶(设计性实验)
一、主要内容
从果皮中提取果胶。
(一)原理
果胶可分为原果胶,果胶质和果胶酸三种,是高分子多糖衍生物,其基本结构是D-吡喃半乳糖醛酸,以α-1,4苷键结合,通常以部分甲酯化状态存在。
果胶是一种优良的亲水胶体,果胶、糖、水的羟基之间极其丰富的氢键对果胶的结构起重要的作用,使果胶具有一定的刚度,食品工业利用果胶的这种性质来制造果酱、果冻、凝胶粉等。
各种果实、蔬菜、果胶含量丰富,尤其是柑桔类果皮中果胶含量高达1.5%~5.5%。
以稀酸水解果胶,使其羧基甲酯化程度降低而溶于水中,再用酒精沉淀提取。
(二)操作步骤
原料为香蕉皮或柑橘皮。
1.去除杂质;2.稀酸水解;3.过滤清洗;4.调整pH;5.提取称重、记录。
自拟方案提取果胶。
提示1、去除杂质和稀酸水解要过程注意温度、时间;2、过滤清洗过程和提取称重过程要采用四层纱布;3、调整pH要注意温度。
二、课堂安排
一人一组进行实验;注意仔细观察实验现象,准确记录实验数据;要求实验前预习,并缴交预习报告和实验报告。
思考题与习题
果胶的工业用途?
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第5周第3讲
重点与难点
1.固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出,与蛋白质沉淀混合;
2.透析袋的制作;
3.透析过程中搅拌蒸馏水能加快透析速度。
主要内容与课堂安排
实验三蛋白质的盐析和透析
一、主要内容
(一)了解蛋白质的沉淀作用。
1.原理:
向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度,蛋白质即沉淀析出,这种作用称为盐析。
2.操作:
(1)取10%鸡蛋白溶液5ml,加入等量饱和硫酸铵溶液,微微摇动试管,使溶液混合后静置数分钟,蛋白即析出。
如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液;
(2)取少许沉淀混合物,加水稀释,观察沉淀是否会再溶解,另取剩余的混合物,加入过量的硫酸铵粉末,使其成为硫酸铵的饱和液,观察沉淀产生。
(二)蛋白质的透析
1.原理:
蛋白质用盐析法沉淀分离后,需脱盐才能获得纯品,脱盐常用的方法为透析法
蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大,不能透过半透膜,而无机盐及其他低分子物质可以透过,故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯,即把蛋白质溶液装入透析袋内,透析袋可用玻璃纸、火棉胶、动物膜、羊皮纸等制成,将袋口用线扎紧,然后把它放进蒸馏水或缓冲液中进行透析,这时盐离子通过透析袋扩散到水或缓冲液中,蛋白质分子量大,不能透过透析袋而被保留在袋内,通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液,直至袋内盐分透析完为止。
2.操作:
(1)透析器的制备:
取5%火棉胶溶液5ml,放入洁净而干燥的小三角瓶中,徐徐转动,使其干化,用指甲或小刀刮开瓶口的薄膜,轻轻拉开,再用自来水将薄膜与瓶塞渐渐冲开即可作为本实验所用的透析袋,将其保存在水中,用时取出;
(2)注入含鸡蛋清氯化钠蛋白溶液5ml于上述自制透析袋中,将袋的开口端用线扎紧,然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中,使其上开口端位于水面之上。
经过20分钟后,自烧杯中取出水样1ml于试管中,加1%硝酸银溶液一滴,如有白色氯化银沉淀生成,即证明蒸馏水中已有Cl–存在,再自烧杯中取出水1ml于另一试管中进行双缩脲反应,加入10%氢氧化钠溶液2ml,摇匀,再加入1%硫酸铜溶液两滴,随加随摇。
观察是否有紫玫瑰色出现。
说明什么?
(3)每隔20分钟更换蒸馏水一次,经过数小时则可观察到火棉胶袋内出现轻微混浊,此即为蛋白沉淀。
二、课堂安排
一人一组独立进行实验;注意仔细观察实验现象,准确记录实验数据,实验报告记录透析完毕所需要时间;要求实验前预习,并缴交预习报告和实验报告。
思考题与习题
1.本实验中的双缩脲反应起什么作用?
2.为什么透析宜在低温下进行?
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第6周第4讲
重点与难点
1.点样的大小,展层剂的配制。
主要内容与课堂安排
实验四氨基酸的薄层层析
一、主要内容
掌握氨基酸的薄层层析操作过程,学习应用薄层层析来分离和鉴定某些物质。
(一)原理:
薄层层析法是一种微量而快速的层析方法。
一般薄层层析法是把吸附剂如氧化铝或硅藻土涂步于薄板上(玻璃或金属)成一薄板,把要分析的样品溶液滴加到薄层的一端,用适当的溶剂进行展开而达到分离、鉴定和定量物质的目的。
因为层析是在薄层上进行的,所以称它为薄层层析法。
本实验用硅胶作为固相支持物,并用羧甲基纤维素钠(CMCNa)作为粘合剂,以正丁醇、冰醋酸、水的混合液为展开剂,测定精氨酸、甘氨酸和丙氨酸的Rf值。
(二)操作:
1.点样:
点样前先画出原点线。
在距板一端2cm处以间距1cm的宽度,用毛细管吸取精氨酸、甘氨酸、丙氨酸以及三者混合的异丙醇溶液少许在硅胶板上点样,每个点直径为2mm左右,点样后用电吹风机热风轻轻吹干。
2.展开:
在层析缸内放入已配制好的展开剂,把点好样品的薄板斜放入层析缸内进行展开,将盖子盖好。
(放置薄板时尽量不要振动液面)
3.显色:
当溶剂前沿达到薄板3/4高度时,将薄板取出,用铅笔在溶剂前沿作上记号,用吹风机吹干薄板。
用喷雾器向薄板喷茚三酮溶液,再放入烘箱内在105℃条件下加热10min,或用电吹风机吹干,显色。
4.计算各种氨基酸的Rf值。
二、课堂安排
两人共用一个层析缸,每人一个薄板进行层实验;注意仔细观察实验现象,准确记录实验数据,实验报告记录层析完毕所需要时间。
要求实验前预习,并缴交预习报告和实验报告。
思考题与习题
1.影响薄层层析效果的关键步骤是哪一步?
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第7周第5讲
重点与难点
1.薄膜的浸泡、吸干和点样
2.注意点样时两侧应留一定空隙
主要内容与课堂安排
实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
一、主要内容
学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,了解电泳技术的一般原理。
(一)原理
醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。
醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素组成,它具有均匀的泡沫样的结构,厚度仅120微米,有强渗透性,对分子移动无阻力,作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰、没有吸附现象等优点。
目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白和同功酶的分离以及免疫电泳中。
(二)操作:
1.浸泡:
用镊子取醋酸纤维薄膜1张(7cm×2cm识别出光泽面与无光泽面,并在角上用笔做上记号)放在缓冲液中浸泡20分钟。
2.点样:
把膜条从缓冲液中取出,夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体,然后平铺在玻璃板上(无光泽面朝上),将点样器先在放置在白瓷反应板上的血清中沾一下,再在膜条一端1cm处轻轻地水平水平划线(注意样品线两头与膜条两侧保留一定间隙),这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
3.电泳:
在电泳槽内加入缓冲液,使两个电极槽内的液面等高,将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上。
(先剪裁尺寸合适的滤纸条,取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上,使它的一端与支架的前沿对齐,而另一端浸入电极槽的缓冲液内。
用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡,使滤纸紧贴在支架上,即为滤纸桥,它是联系醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的“桥梁”)。
膜条上点样的一端靠近负极,注意点样面朝下,点样处不得接触滤纸桥。
盖严电泳室。
通电。
调节电压至160V(稳压操作),电流强度40mA,电泳时间约为25分钟。
4.染色:
电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡10分钟。
5.漂洗:
将膜条从染色液中取出后移至漂洗液中漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止,可得色带清晰的电泳图谱。
二、课堂安排
每人一个电泳样品进行实验(四个共用一个电泳仪和卧式电泳槽);注意仔细观察实验现象,准确记录实验数据,实验报告记录完成电泳所需时间,学习样品的染色和漂洗;要求实验前预习,并缴交预习报告和实验报告。
思考题与习题
1.电泳仪的电流强度40mA是不是表示流过样品的电流一定是40mA?
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第8周第6讲
重点与难点
1.正确掌握微量滴定方法
主要内容与课堂安排
实验六用甲醛滴定法测定氨基氮
一、主要内容
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。
(一)原理
氨基酸是两极电解质,在水溶液中有如下平衡:
R-CH(N+H3)-COOˉ↔R-CH(NH2)COOˉ+H+
-N+H3是弱酸,完全解离时PH为11-12或更高,若用碱滴定-N+H3释放的H+来测量氨基酸,一般指示剂变色域小于10,很难准确指示终点。
常温下,甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合,生成羟甲基化合物,使上述平衡右移,促使-N+H3释放H+,使溶液的酸度增加,滴定终点移至酚酞的变色域内(PH9.0左右)。
因此,可用酚酞作指示剂,用标准的氢氧化钠溶液滴定。
(二)操作:
1.取3个25ml的锥形瓶,编号。
向第1、2号瓶内各加入0.1当量/升的标准甘氨酸溶液2ml和水5ml,混匀。
向3号瓶内加入7ml水。
然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂,混匀后各加入2ml甲醛溶液再混匀,分别用0.1当量/升标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。
重复以上实验2次,记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的毫升数。
取平均值,计算甘氨酸氨基氮的回收率。
甘氨酸氨基氮的回收率为实际测得量与加入理论量的比值。
实际测得量为滴定第1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的当量浓度,再乘以14.008。
2ml乘以标准甘氨酸的当量浓度再乘14.008,即为加入理论量的毫克数。
2.取未知浓度的甘氨酸溶液2ml,依上述方法测定,平行做几份,取平均值。
计算每毫升甘氨酸溶液中含氨基氮的毫克数。
氨基氮(mg/ml)=(V末—V对)×NNaOH×14.008/2
公式中V末为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。
V对为滴定对照液(3号瓶)耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。
NNaOH为标准氢氧化钠溶液的真实当量浓度。
二、课堂安排
每人一组进行实验。
计算回收率及氨基氮的含量。
思考题与习题
1.回收率超过100%说明什么问题?
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第9周第7讲
重点与难点
1.新鲜猪肝糜加适量水煮沸时要煮透。
主要内容与课堂安排
实验七过氧化氢酶和过氧化物酶的定性反应
一、主要内容
掌握过氧化氢酶催化反就的特点,学习酶定性反应的操作。
(一)原理
过氧化氢酶和过氧化物酶能催化过氧化氢分解释放出新生态氧以氧化某些酚类物质和胺类物质,例如氧化溶于水中的焦性没食子酸生成不溶于水的焦性没食子橙(橙红色);氧化愈创木脂中的愈创木酸成为兰色的愈创木酸的臭氧化物。
(二)操作:
1.准备原料:
切碎猪肝(2g),制成新鲜猪肝糜。
取1g新鲜猪肝糜加适量水煮沸,将水倒去。
切碎新鲜白菜叶(2g),越细越好。
白菜梗提取液:
白菜梗约5g,切成细块至研钵中,加蒸馏水15ml,经白纱布过滤,滤液备用。
二、课堂安排
每人一组进行实验。
按讲义设计的表格进行操作。
注意观察现象。
表格见讲义。
思考题与习题
1.过氧化氢酶的其他用途?
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第10周第8讲
重点与难点
1.蔗糖酶纯度影响实验结果。
2.两种酶分别作用于淀粉和蔗糖水解操作中,注意试管、滴管、移液管等的分开使用,不能混淆。
3.沸水浴操作宜严格进行,否则酶失活不充分,影响现象观察;
4.冰浴条件下,酶活力降低,但酶活性不受破坏。
主要内容与课堂安排
实验八酶的特性
(1)
一、主要内容
(一)酶的专一性原理
酶作用的专一性是酶与一般催化剂的主要区别之一。
所谓酶作用的专一性仅对一种或一类相似的物质起一定的催化作用,而对甚物质则不能起催化作用。
本实验以蔗糖酶(来源于酵母)及枯草杆菌α-淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例来说明酶作用的专一性。
淀粉和蔗糖缺乏自由醛基(苷羟基)无还原性。
但在α-淀粉酶的作用下,淀粉很容易水解成为糊精及少量麦芽糖、葡萄糖,使之具有还原性。
在同样的条件下,α-淀粉酶不能催化蔗糖的水解,蔗糖酶能催化蔗糖水解生成具有还原性的葡萄糖,但不能催化淀粉水解。
本实验采用本尼迪克特(Benedict)试剂检测还原糖。
(二)温度对酶活性的影响原理
酶的催化作用受温度的影响很大。
温度对酶化的反应有双重效应,一方面,温度上升可以使反应加快;另一方面,温度升高又可使酶因变性而失活。
各种酶的反应有其最适的温度,此时,酶的反应速度最快。
与普通化学反应一样,在酶的最适温度以下,温度每升高10℃,其反应速度相应地增加1~2倍。
至于低温对酶促反应的影响,一般地说,在低温下(如0℃左右或更低)酶活力降低,但酶活性不受破坏。
一旦升高温度也就能恢复其原有的催化活力。
本实验以枯草杆菌α-淀粉酶和蔗糖酶为例,说明温度对酶活性的影响。
(二)操作
1.取2支试管,各加入本氏试剂2ml,再分别加入1%可溶性淀粉溶液和2%蔗糖溶液各4滴,混合均匀后,放在沸水浴中煮2~3分钟,观察有无红黄色沉淀产生,纯净的淀粉和蔗糖应无红黄色沉淀产生。
2.α-淀粉酶的专一性试验
取3支试管,分别加入1%可溶性淀粉3ml,2%蔗糖溶液3ml及蒸馏水3ml。
再向3支试管各添加α-淀粉酶稀释液1ml,混匀,放入37℃恒温水浴中保温,15分钟后取出,各加本氏试剂2ml,摇匀后,放在沸水中煮2~3分钟,观察有无红黄色沉淀产生。
3.蔗糖酶的专一性试验
取3支试管,分别加入1%可溶性淀粉溶液3ml、2%蔗糖溶液3ml及蒸馏水3ml,再向3支试管加蔗糖酶液1ml,混匀,放入37℃恒温水浴保温5分钟后取出,各本氏试剂2ml,摇匀,放在沸水浴中煮2~3分钟,观察有无红黄色沉淀产生。
4.温度对α-淀粉酶活性的影响
取3支试管,编号,各加入0.5%可溶性淀粉溶液3ml分别置于冰水浴,37℃水浴及沸水浴中,保温5分钟后,各缓缓加入1mlα-淀粉酶稀释液(试管勿从水浴中取出)继续保温10分钟,取出37℃水浴及沸水浴中试管置于冰水浴中冷却后,各加入碘-碘化钾溶液约一滴比较各管颜色,并解释现象。
5.温度对蔗糖酶活性的影响
取3支试管,编号,各加2%蔗糖液3ml,分别置于冰水浴,37℃及沸水浴中,保温5分钟后,各加1ml蔗糖酶液,继续保温10分钟,取出各加入2ml本氏试剂置于沸水浴中煮2~3分钟,比较各管颜色,并解释现象。
二、课堂安排
一人一组分工协作进行实验;注意仔细观察实验现象,准确记录实验数据;要求实验前预习,并缴交预习报告和实验报告。
思考题与习题
1.为什么酵母的蔗糖酶粗提液专一性作用不明显?
2.酶的最适温度是否为酶的特征常数?
3.为什么酶的反应时间越长,要求最适温度低一些?
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第11周第9讲
重点与难点
1.准确配制缓冲溶液。
2.准确记录水浴保温时间,利于掌握唾液淀粉酶活性。
主要内容与课堂安排
实验九酶的特性
(2)
一、主要内容
(一)pH对酶活性影响原理
酶的活力受环境的pH的影响极为显著,通常在一定的pH范围内才表现它的活性。
一种酶活性表现最高时的pH值为该酶的最适pH,低于或高于最适pH时,酶的活性渐次降低。
不同酶的最适pH不同。
本实验以枯草杆菌α-淀粉酶来说明pH对酶活性的影响。
(二)酶的激活剂和抑制剂原理
酶的活性常受某些物质的影响,有些物质能使酶的活性增加称为酶的激活剂;有的物质能使酶的活性降低,称为酶的抑制剂。
激活剂和抑制剂影响酶作用的需要量很小,并常有特异性。
激活剂与辅酶或辅基(或某些金属作为辅基)不同,如果无激活剂存在时,酶仍能表现一定的活性,而辅酶或辅基不存在时,酶则完全不呈活性。
维生素C(抗坏血酸)在人体内主要作为酶的激活剂与物质还原剂而发挥作用。
它是多种自由基的清除剂,又能与体内的维生素E自由基起作用,使其还原为维生素E,继续发挥抗氧化剂的作用。
酪氨酸是皮肤黑色素生物合成的关键酶,而铜是酪氨酸酶的激活剂。
盐酸是胃蛋白酶的激活剂,氯离子是唾液淀粉酶的激活剂等。
本实验以唾液淀粉酶为例,说明氯离子(Cl-)对该酶的激活作用以及铜离子(Cu+2)对该酶的抑制作用。
(二)操作
1、取8支试管,编号,用吸管按讲义列表比例添加0.2M磷酸氢二钠溶液和0.1M柠檬酸溶液,制备PH为4.4~7.2的缓冲液。
2、取9支试管,编号,将上述8种缓冲液分别吸取3ml,分别加入相应号码的试管中(第1~8号)第9号试管加pH5.6的缓冲液3ml,然后再向各试管添加0.5%可溶性淀粉溶液2ml,将9支试管放入37℃恒温水浴中预热5~10分钟。
3、向第9号试管添加α-淀粉酶稀释液2ml,摇匀,仍在37℃恒温水浴中保温,1分钟后,每隔15秒钟自第9号试管中取出一滴混合液,置白瓷板空穴中,以碘-碘化钾溶液检验淀粉水解程度,待结果呈橙黄色时,取出试管记下酶作用的时间(自加入酶液时开始)注意:
掌握第9号试管的水解程度是本实验成败的关键。
4、以1分钟为间隔,依次向第1~8号试管加入α-淀粉酶稀释液2ml,摇匀,并仍在37℃恒温水浴中保温。
然后按第9号管酶作用的时间,依次将各管取出,并立即加入碘-碘化钾溶液2滴,充分摇匀,观察各管呈现的颜色,并说明之。
5.取3支试管,编号后各加入3ml0.5%可溶性淀粉溶液及1ml稀释唾液。
向第一号试管加1ml1%氯化钠溶液,第二号试管加入1ml0.5%硫酸铜溶液,第三号试管加入1ml蒸馏水。
6.将上述3支试管,放入37℃恒温水浴中保温10~15分钟后取出(保温时间因唾液淀粉酶活力而异,可重做一次,以求明显之结果)冷却后分别加入4~5滴碘~碘化钾溶液,观察比较三支试管颜色的深浅,并解释之。
二、课堂安排
两人一组分工协作进行实验;注意仔细观察实验现象,准确记录实验数据;要求实验前预习,并缴交预习报告和实验报告。
思考题与习题
举例说明一些酶的激活剂在人体中的作用。
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第12周第10讲
重点与难点
1.酵母要充分研磨均匀。
主要内容与课堂安排
实验十酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、主要内容
了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法。
(一)原理
酵母核酸中RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到RNA的粗制品。
RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。
(二)操作:
将15g酵母悬浮于90ml0.04mol/L氢氧化钠溶液中,并在乳钵中研磨均匀。
将悬浮液转移至150ml锥形瓶中。
在沸水浴上加热30分钟后,冷却。
离心(3000r/min)15分钟将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。
注意要一边搅拌一边缓缓倾入。
待RNA沉淀完全后,离心(3000r/min)3分钟。
弃去清夜。
用95%乙醇洗涤沉淀2次,乙醚洗涤沉淀一次后,再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。
沉淀可在空气中干燥。
取200mg提取的核酸,加入3当量/升硫酸10ml,在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。
1.嘌呤碱:
取水解液1ml加入过量浓氨水,然后加入约1ml0.1mol/L硝酸银溶液,观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
2.核糖:
取一支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。
放沸水浴中10分钟。
注意溶液是否变成绿色,说明核糖的存在。
3.磷酸:
取一支试管,加水解液1ml和定磷试剂1ml。
在水浴中加热,观察溶液是否变成兰色,说明磷酸是否存在。
二、课堂安排
每人一组进行实验。
RNA提取可合作进行。
注意观察现象。
思考题与习题
1.了解RNA提取的其他方法。
《生物化学实验》教案
教师:
杨东升学时:
34(1学分)专业:
理工学院03生工第13周第11讲
重点与难点
1.SbCl3有潮解性及强腐蚀性,凡接触过SbCl3的玻璃仪器需先用10%盐酸溶液洗涤后,再用水冲洗。
2.维生素A实验所用仪器和试剂须干燥无水,加醋酐的目的在于脱水。
主要内容与课堂安排
实验十一维生素
一、主要内容
维生素A的定性测定,维生素B1的定性测定,维生素B2的定性测定
(一)原理
维生素A与SbCl3作用生成兰色,此兰色反应虽非维生素A的特异反应(如胡萝卜素亦有类似反应,不过呈色程度很弱),但一般可用作维生素A的定性测定。
维生素B1,在碱性条件下与赤血盐作用,在紫外线照射下,发生兰色荧光。
注意:
SbCl3遇水生成碱式盐[Sb
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