微量成分分析方法.docx

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微量成分分析方法

微量成分分析方法

一、钙铁锌钠钾镁铜和锰的测定…………………………第330页

二、食品中砷、汞、硒的检测………………………………第332页

（一）食品中砷的检测………………………………………第332页

（二）食品中汞的检测………………………………………第335页

（三）食品中硒的检测………………………………………第337页

三、维生素的检测……………………………………………第340页

（一）婴儿配方食品和乳粉维生素B1的检测……………第340页

（二）婴儿配方食品和乳粉维生素B2的检测……………第342页

（三）婴儿配方食品和乳粉维生素B6的检测……………第344页

（四）婴儿配方食品和乳粉烟酸、烟酰胺的检测…………第347页

（五）食品中维生素A、维生素E的检测…………………第349页

四、苯甲酸和山梨酸的检测…………………………………第354页

五、食品中糖精钠的检测……………………………………第360页

六、食品中苏丹红的检测……………………………………第362页

七、巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定……………第365页

八、食品中铅含量的测定……………………………………第375页

九、食品中甜蜜素的测定……………………………………第377页

十、牛奶中土霉素残留的测定………………………………第378页

十一、牛奶中农药残留DDT和狄氏剂的测定………………第379页

一、婴幼儿配方食品和乳粉钙铁锌钠钾镁铜和锰的测定（依据国标GB/T5413.21-1997）

1试剂

1.1浓盐酸。

1.22%盐酸和1：

4盐酸。

1.31：

1硝酸。

1.4镧溶液50克/升：

称取29.32克氧化镧，用25毫升去离子水湿润后，慢慢仔细地添加125毫升浓盐酸使氧化镧溶解后用去离子水稀释至500毫升。

1.5钙铁锌钠钾镁铜和锰标准储备溶液：

浓度均为1000微克/毫升。

各离子的标准中间液100微克/毫升：

分别吸取标准储备液25毫升于250毫升容量瓶中用2%盐酸定容。

2操作步骤

2.1标准曲线

2.1.1标准混合溶液的配制

按表一给出得体积配制三个混合标准工作液。

即分别吸取铜锰标准中间液10毫升于100毫升容量瓶中定容，即两离子的浓度为10微克/毫升，再按表1吸取该液，测定铁、锌含量时按表一分别吸取标准中间液于100毫升容量瓶中；用2%盐酸定容即为5个铜锰铁锌混合标准溶液；测定钙镁含量时按表一吸取标准中间液于100毫升容量瓶中，加2毫升镧溶液用2%盐酸定容即为钙镁标准混合溶液；测定钾钠含量时按钙镁步骤操作即为钾钠标准混合溶液，各元素浓度如表2。

表1配制混合标准溶液所取各元素标准中间液的体积

序号

钾

钙

钠

镁

锌

铁

铜

锰

1

1

2.5

1

0.5

0.5

2.0

1

1

2

2

5

2

1.0

1.0

4.0

2

2

3

3

10

3

1.5

1.5

6.0

4

4

4

4

15

4

2.0

2.0

8.0

6

6

5

5

20

5

2.5

2.5

10.0

8

8

表2混合标准溶液各元素的浓度

序号

钾

钙

钠

镁

锌

铁

铜

锰

1

1

2.5

1

0.5

0.5

2.0

0.1

0.1

2

2

5

2

1.0

1.0

4.0

0.2

0.2

3

3

10

3

1.5

1.5

6.0

0.4

0.4

4

4

15

4

2.0

2.0

8.0

0.6

0.6

5

5

20

5

2.5

2.5

10.0

0.8

0.8

2.1.2准曲线的绘制

按照仪器说明书将仪器工作条件调整到测定各元素最佳状态，选用灵敏吸收线钾766.5纳米，钙422.7纳米，钠588.9纳米，镁285.2纳米，铁248.3纳米，铜324.7纳米，锰279.5纳米，锌213.9纳米将仪器调好预热后，用毛细管吸喷2%盐酸溶液，测定钾钠钙镁时用含镧1克/升的体积分数为2%的盐酸调零。

分别测定混合标准溶液中各离子的透光率，对各元素含量绘制标准曲线或计算回归方程。

2.2样品处理

精确称取5.0000克样品于坩埚中在电炉上微火炭化至不放烟，再移入高温炉中升温至490℃使样品灰化成白色灰烬。

如果有黑色碳粒，冷却后滴加少许1：

1的硝酸湿润。

在电炉上小火蒸干后，再移入490℃高温炉中继续灰化成白色灰烬，取出冷却至室温，加1：

4的盐酸5毫升，在电炉上加热使灰烬充分溶解，冷却到室温后，移入50毫升容量瓶中，用去离子水定容，同时处理一个空白样品。

2.3样品的测定：

调整好仪器最佳状态，用相应的盐酸溶液调零后，按下面的方式测定样品的透光率及试剂空白。

2.3.1钠的测定：

从50毫升样液中吸取1毫升于100毫升容量瓶中，加2毫升镧溶液，用2%盐酸定容，上机测定。

2.3.2钾的测定：

从测定钠的100毫升容量瓶中吸取10毫升于50毫升容量瓶中，加1毫升镧溶液，用2%盐酸定容，上机测定。

2.3.3钙镁的测定：

从50毫升样液中吸取1毫升于50毫升容量瓶中，加1毫升镧溶液，用2%盐酸定容，上机测定。

2.3.4铁锰锌铜的测定：

从50毫升样液中吸取5毫升于25毫升容量瓶中，用2%盐酸定容，上机测定锌，铁锰铜用50毫升样液直接上机测定。

3计算：

（c1-c2）×V×A

样品中元素含量（毫克/100克）=----------------×100

m×1000

式中：

c1——测定样液中元素的浓度，微克/毫升；

c2——测定空白液中元素的浓度，微克/毫升；

V——样液体积，毫升；

A——样液稀释倍数；

m——样品的质量，克。

允许差：

同一样品的两次测定之差不得超过两次测定平均值的5%。

二、食品中砷、汞、硒的检测：

（一）食品中砷的检测：

（依据国标GB/T5009.11-2003）

氢化物原子荧光光度法

1主题内容与适用范围

本标准规定了各类食品中总砷的测定方法。

本标准适用于各类食品中总砷的测定。

其最低检出浓度：

氢化物原子荧光光度法:

0.01mg/kg。

2原理

样品经湿消解或干灰化后，加入硫脲使五价砷还原为三价砷,再加入硼氢化钾或硼氢化钠使还原生成砷化氢,由氩气载入石英原子化器中分解为原子态砷,在特制砷空心阴极灯的发射光激发下产生原子荧光,其荧光强度在固定条件下与被测液中的砷含量成正比。

与标准系列比较定量。

3试剂

3.1硫脲溶液（50g/L）。

3.2氢氧化钠溶液（2g/L）和氢氧化钠溶液（100g/L）。

3.3硼氢化钠溶液（10g/L）:

10.0g硼氢化钠溶于2g/L氢氧化钠溶液1000ml中。

3.4硫酸（1＋9）。

3.5砷标准储备液：

含砷0.1mg/mL,精确称取经100℃干燥2h以上的三氧化二砷（As2O3）0.1320g于100mL烧杯中，加入10mL氢氧化钠溶液（100g/L）溶解，用适量水转入1000mL容量瓶中,加硫酸（1＋9）25mL，用水定容至刻度。

3.6砷使用标准液：

含砷1μg/mL,吸取1.00mL砷标准储备液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。

此溶液应当日配制使用.

3.7湿消解试剂:

硝酸,硫酸,高氯酸

3.8干灰化试剂:

硝酸镁溶液（150g/L）,氧化镁,盐酸（1+1）

4仪器

原子荧光光度计。

5分析步骤

5.1样品处理

5.1.1湿消解：

固体样品1-2.5g,液体样品5-10g（mL）（精确至小数点后两位）,置于50-100mL锥形瓶中，同时做两份空白.加硝酸20-40mL,硫酸1.25mL，加粒玻璃珠，摇匀过夜，置电热板上加热消解.若消解液处理至10mL左右时仍有未分解物质或色泽变深,取下放冷,补加硝酸5-10mL,再消解至10mL左右观察,如此反复两三次,注意避免炭化.仍不能消解完全,则加入高氯酸1-2mL,继续消化至消解完全后,再持续蒸发至高氯酸的白烟散尽，硫酸白烟开始冒出.冷却，加水25mL,再蒸发至冒硫酸白烟.冷却,用水分数次将消解液转入25mL容量瓶或比色管中,加入硫脲2.5mL,定容,混匀,备测。

5.1.2干灰化：

一般用于固体试样,称取1～2.5g样品（精确至小数点后两位）,于50-100mL坩埚中，同时做两份空白.加入硝酸镁溶液（150g/L）10mL混匀,低热蒸干,将氧化镁1g仔细覆盖在干渣上,与电炉上炭化至无黑烟,550℃高温炉中灰化4小时.取出放冷,小心加入盐酸（1+1）10mL以中和氧化镁并溶解灰分,转入25mL容量瓶或比色管中,加入硫脲2.5mL,用硫酸（1+9）分次刷洗坩埚,合并定容,混匀,备测。

5.2标准系列的制备

于6只25mL容量瓶或比色管，依次加入砷使用标准液0，0.05，0.2，0.5，2.0，5.0mL（相当于砷0，2.0，8.0，20.0，80.0，200.0ng/ml），各加硫酸（1+9）12.5mL，硫脲2.5mL,补水定容,混匀,备测。

5.3样品及标准的测定

5.3.1仪器参考条件:

光电倍增管电压:

400V;砷空心阴极灯电流:

35mA;原子化器:

温度820-850℃;高度7mm;氩气流速:

600ml/min;测量方式:

荧光强度或浓度直读,读数方式:

峰面积;读数延迟时间:

1s;读数时间:

15s;标液或样液加入体积:

2ml.

5.3.2测定方式：

设定好仪器最佳条件，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10-20分钟。

先连续用标准系列的零管进样，待数值稳定再进标样。

转入试样测量，先用标准系列的零管进样，使数值基本回零，再分别测定空白和试样消化液，每测不同的试样前都应清洗进样器。

5.4结果计算:

C1-C025

X=-----------×------

m1000

式中：

X——样品中砷的含量，mg/kg或mg/L；

m——样品质量或体积，g或mL。

C1------试样被测液的浓度,ng/ml

C0------试剂空白液的浓度,ng/ml

计算结果保留两位有效数字。

（二）食品中汞的检测：

（依据国标GB/T5009.17-2003）

原子荧光光谱分析法

1主题内容与适用范围

本标准规定了各类食品中总砷的测定方法。

本标准适用于各类食品中总砷的测定。

其最低检出浓度：

0.15μg/kg,标准曲线最佳线性范围0-60μg/L.

2原理

样品经酸加热消解后，再酸性介质中,试样中汞被硼氢化钾或硼氢化钠使还原生成原子态汞,由载气（氩气）带入原子化器,在特制汞空心阴极灯照射下,基态汞原子被激发至高能态,在去活化回到基态时,发射出特征波长的荧光,其荧光强度与汞含量成正比,与标准系列比较定量。

3试剂

3.1硫酸+硝酸+水混合酸（1+1+8）。

3.2硝酸溶液（1+9）。

3.3混合酸:

硝酸+高氯酸（4+1）混合酸。

3.4盐酸（6mol/L）。

3.5氢氧化钾溶液（5g/L）。

3.6硼氢化钾溶液（5g/L）:

5.0g硼氢化钾溶于5g/L氢氧化钾溶液中，并稀释至1000ml，现用现配。

3.7汞标准储备液：

含汞1mg/mL,精确称取0.1354g干燥过的二氯化汞于50mL烧杯中，加硫酸+硝酸+水混合酸（1+1+8）溶解后转入100mL容量瓶中,并稀释至刻度，混匀。

3.8汞使用标准液：

含汞100ng/mL,吸取1.00mL汞标准储备液于100mL容量瓶中，用硝酸（1+9）稀释至刻度，此溶液为10μg/mL；在吸10μg/mL汞标准溶液1.00mL于100mL容量瓶中，用硝酸（1+9）稀释至刻度，即为100ng/mL的标准汞溶液。

4仪器

原子荧光光度计。

5分析步骤

5.1样品处理

固体样品1-2.5g,液体样品5-10g（mL）（精确至小数点后两位）,置于50-100mL锥形瓶中，同时做两份空白.加混合酸（3.3）10mL和几粒玻璃珠,摇匀过夜，置电热板上加热消解.并及时补加混合酸（3.3）。

当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2mL左右，切不可蒸干。

冷却，再加5mL盐酸（6mol/L），继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟时。

冷却，用硝酸（1+9）定容转移至25mL,混匀,备测。

5.2标准系列的制备

于6只25mL容量瓶或比色管，依次加入100ng/ml汞使用标准液0，0.25，0.50，1.00，2.00，2.50mL（相当于砷0，1.00，2.00，4.00，8.00，10.00ng/ml），用硝酸（1+9）定容,混匀,备测。

5.3样品及标准的测定

5.3.1仪器参考条件:

光电倍增管电压:

240V;汞空心阴极灯电流:

30mA;原子化器:

温度300℃;高度8.0mm;氩气流速:

500ml/min,屏蔽气1000ml/min;测量方式:

标准曲线法；读数方式:

峰面积;读数延迟时间:

1.0s;读数时间:

10.0s;硼氢化钠溶液加液时间：

8.0s；标液或样液加入体积:

2ml.

5.3.2测定方式：

设定好仪器最佳条件，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10-20分钟。

先连续用硝酸（1+9）进样，待数值稳定再进标样。

转入入试样测量，先用硝酸（1+9）进样，使数值基本回零，再分别测定空白和试样消化液，每测不同的试样前都应清洗进样器。

5.4结果计算:

（C-C0）×V×1000

X=-----------------

m×1000×1000

式中：

X——样品中汞的含量，mg/kg或mg/L;

m——样品质量或体积，g或mL;

C------试样被测液的浓度,ng/ml;

C0------试剂空白液的浓度,ng/ml;

V------消化测试液总体积，ml;

计算结果保留三位有效数字。

（三）食品中硒的检测：

（依据国标GB/T5009.93-2003）

氢化物原子荧光光度法

1主题内容与适用范围

本标准规定了各类食品中总砷的测定方法。

本标准适用于各类食品中总砷的测定。

其最低检出浓度：

3ng/ml,标准曲线最佳线性范围0.01-0.2μg/mL.

2原理

样品经酸加热消解后，在6mol/L盐酸介质中,试样中六价硒还原成四价硒，用硼氢化钾或硼氢化钠做还原剂，将四价硒在盐酸介质中还原成硒化氢（SeH2）,由载气（氩气）带入原子化器进行原子化,在特制硒空心阴极灯照射下,基态硒原子被激发至高能态,在去活化回到基态时,发射出特征波长的荧光,其荧光强度与硒含量成正比,与标准系列比较定量。

3试剂

3.1混合酸:

硝酸+高氯酸（4+1）混合酸。

3.2盐酸（6mol/L）。

3.3氢氧化钠溶液（5g/L）。

3.4硼氢化钠溶液（8g/L）:

8.0g硼氢化钠溶于5g/L氢氧化钠溶液中，并稀释至1000ml，现用现配。

3.5铁氢化钾（100g/L）：

10.0g铁氢化钾，溶于100mL水中，混匀。

3.6硒标准储备液：

含硒100μg/mL,精确称取100.0mg硒（光谱纯）溶于少量硝酸中，加2mL高氯酸，置沸水浴中加热3-4小时，冷却后再加8.4mL盐酸，再置沸水浴煮2分钟，准确定容1000mL，容量瓶中,并稀释至刻度，混匀。

3.7硒使用标准液：

含硒1μg/mL,吸取1.0mL硒标准储备液，定容至100mL，4仪器

原子荧光光度计。

5分析步骤

5.1样品处理

固体样品1-2.5g,液体样品5-10g（mL）（精确至小数点后两位）,置于50-100mL锥形瓶中，同时做两份空白.加混合酸10mL和几粒玻璃珠,摇匀过夜，置电热板上加热消解.并及时补加混合酸。

当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2mL左右，切不可蒸干。

冷却，再加5mL盐酸（6mol/L），继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟时。

冷却，定容转移至50mL容量瓶中,混匀。

从中吸取10mL消化液于15mL比色管中，加浓盐酸2mL，铁氢化钾溶液1mL，混匀待测。

5.2标准系列的制备

于6只15mL比色管，依次加入1μg/mL硒使用标准液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mL混匀,备测。

5.3样品及标准的测定

5.3.1仪器参考条件:

负高压:

340V;灯电流:

100mA;原子化温度800℃;炉高8mm;氩气流速:

500ml/min,屏蔽气1000ml/min;测量方式:

标准曲线法；读数方式:

峰面积;读数延迟时间:

1s;读数时间:

15s;加液时间：

8s；标液或样液加入体积:

2ml.

5.3.2测定方式：

设定好仪器最佳条件，逐步将炉温升至所需温度后，稳定10-20分钟。

先连续用标准系列的零管进样，待数值稳定再进标样。

转入入试样测量，先用标准系列的零管进样，使数值基本回零，再分别测定空白和试样消化液，每测不同的试样前都应清洗进样器。

5.4结果计算:

（C-C0）×V×1000

X=-----------------

m×1000×1000

式中：

X——样品中硒的含量，mg/kg或mg/L;

m——样品质量或体积，g或mL;

C------试样被测液的浓度,ng/ml;

C0------试剂空白液的浓度,ng/ml;

V------消化测试液总体积，ml.

计算结果保留两位有效数字。

三、维生素的检测：

（一）婴儿配方食品和乳粉维生素B1的检测：

（依据国标GB/T5413.11-1997）

1方法提要：

样品在稀盐酸环境中高温水解、酶解，试样用碱性铁氰化钾衍生，正丁烷萃取后，经ODSC18反相色谱柱分离，在荧光检测器（Ex：

375nm，Em：

435nm）条件下检测，用外标法定量维生素B1含量。

2试剂：

2.1正丁醇

2.2铁氰化钾

2.3浓盐酸

2.4无水乙酸钠

2.5冰乙酸

2.6甲醇：

色谱纯

2.7硫胺素（维生素B1）：

标准品

2.8铁氰化钾溶液（10g/L）：

称取2g铁氰化钾，溶解并稀释至200ml。

2.9氢氧化钠溶液（100g/L）：

称取20g氢氧化钠，溶解并稀释至200ml。

2.10碱性铁氰化钾溶液（10g/L）：

铁氰化钾溶液（10g/L）5ml与氢氧化钠溶液（100g/L）200ml混合。

2.11盐酸溶液（0.1mol/L）：

吸取4.5ml浓盐酸，溶于500ml去离子水中。

2.12盐酸溶液（0.01mol/L）：

吸取盐酸（0.1mol/L）50ml，配成500ml。

2.13乙酸钠溶液（PH=4.5）（0.05mol/L）：

称取4.10g乙酸钠，配成1000ml。

并用冰乙酸调至PH=4.5。

2.14乙酸钠溶液（2.0mol/L）：

称取16.61g乙酸钠，配成100ml。

2.15混合酶溶液（30g/L）：

称取淀粉酶和木瓜酶各3.6g，溶溶于100ml乙酸钠溶液（2.0mol/L）。

2.16流动相配制：

用0.05mol/L乙酸钠溶液与甲醇按适当比例混合。

2.17标准溶液：

2.17.1维生素B1标准储备溶液（500μg/mL）：

精确称取0.0500g维生素B1（2.7），用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，放冰箱中保存。

2.17.2维生素B1标准工作液（0.5μg/mL）：

将标准储备溶液用重蒸水稀释1000倍，所得溶液经0.3μm滤膜过滤。

3操作步骤：

3.1样品处理：

3.1.1称样：

将样品捣碎混匀后，精确称取5.0~10.0g（内含维生素B15μg以上）于三角瓶中。

3.1.2水解：

加适量的盐酸溶液（2.11），控制样液中酸浓度在0.1mol/L左右，将三角瓶内的样液摇匀后，放入高压杀菌锅内，在121℃下保持30min，待冷却后取出，轻摇数次。

3.1.3酶解：

冷却40℃以下，分别加入2.5mL混合酶液（2.15），摇匀后，置于37℃的培养箱中过夜。

3.1.4定容：

用0.1mol/L氢氧化钠溶液调至PH值6.0左右，再用二次重蒸水定容至100mL。

3.1.5过滤：

样液经定量滤纸过滤。

3.1.6衍生：

取滤液10.00mL（3.1.5）于25mL带塞量筒中，加入5mL碱性铁氰化钾溶液（2.10）氧化后，充分混匀后再加10.00mL正丁醇（2.1）萃取，经强烈摇动，静止分层后吸取正丁醇相（上层）进样。

3.2样品测定：

3.2.1色谱条件：

C18反相色谱柱：

dp5μm,25cm×4.6mm或具同等性能的色谱柱。

流动相：

0.05mol/L乙酸钠溶液（2.13）:

甲醇（2.6）=65:

35（体积比）。

流速：

1.00mL/min。

检测器波长：

375nm，发射波长435nm。

进样量：

20μL。

4分析结果的表述：

C×F×V×100

样品中维生素B1的含量（mg/100g）=----------------------

M×1000

式中：

C——进样样液的浓度，μg/mL;

F——稀释倍数;

V——定容容积，mL;

M——样品的质量，g.

（二）婴儿配方食品和乳粉维生素B2的检测：

（依据国标GB/T5413.12-1997）

1方法提要：

样品在稀盐酸环境中高温水解、酶解，经ODSC18反相色谱柱分离，在荧光检测器（Ex:

462nm，Em:

522nm）条件下检测，用外标法定量维生素B2含量。

2试剂：

2.1浓盐酸

2.2无水乙酸钠

2.3冰乙酸

2.4甲醇：

色谱纯

2.5核黄素（维生素B2）：

标准品

2.6盐酸溶液（0.1mol/L）：

吸取4.5ml浓盐酸，溶于500ml去离子水中。

2.7盐酸溶液（0.01mol/L）：

吸取盐酸（0.1mol/L）50ml，配成500ml。

2.8乙酸钠溶液（PH=4.5）（0.05mol/L）：

称取4.10g乙酸钠，配成1000ml。

并用冰乙酸调至PH=4.5。

2.9乙酸钠溶液（2.0mol/L）：

称取16.61g乙酸钠，配成100ml。

2.10混合酶溶液（30g/L）：

称取淀粉酶和木瓜酶各3.6g，溶溶于100ml乙酸钠溶液（2.0mol/L）。

2.11流动相配制：

用0.05mol/L乙酸钠溶液与甲醇按适当比例混合。

2.12标准溶液：

2.12.1维生素B2标准储备溶液（500μg/mL）：

精确称取0.0500g维生素B2（2.5），用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，放冰箱中保存。

2.12.2维生素B2标准工作液（0.5μg/mL）：

将标准储备溶液用重蒸水稀释1000倍，所得溶液经0.3μm滤膜过滤。

3操作步骤：

3.1样品处理：

3.1.1称样：

将样品捣碎混匀后，精确称取5.0~10.0g（内含维生素B25μg以上）于三角瓶中。

3.1.2水解：

加适量的盐酸溶液（2.6），控制样液中酸浓度在0.1mol/L左右，将三角瓶内的样液摇匀后，放入高压杀菌锅内，在121℃下保持30min，待冷却后取出，轻摇数次。

3.1.3酶解：

冷却40℃以下，分别加入2.5mL混合酶液（2.10），摇匀后，置于37℃的培养箱中过夜。

3.1.4定容：

用0.1mol/L氢氧化钠溶液调至PH值6.0左右，再用二次重蒸水定容至100mL。

3.1.5过滤：

样液经定量滤纸过滤。

3.2样品测定：

3.2.1色谱条件：

C18反相色谱柱：

dp5μm,25cm×4.6mm或具同等性能的色谱柱。

流动相：

0.05mol/L乙酸钠溶液（2.8）:

甲醇（2.4）=65:

35（体积比）。

流速：

1.00mL/min。

检测器波长：

462nm，发射波长