黄芪对腹膜透析效能及腹膜间皮细胞与腹腔免疫功能的阻碍江苏申报.docx
- 文档编号:24526977
- 上传时间:2023-05-28
- 格式:DOCX
- 页数:12
- 大小:21.81KB
黄芪对腹膜透析效能及腹膜间皮细胞与腹腔免疫功能的阻碍江苏申报.docx
《黄芪对腹膜透析效能及腹膜间皮细胞与腹腔免疫功能的阻碍江苏申报.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《黄芪对腹膜透析效能及腹膜间皮细胞与腹腔免疫功能的阻碍江苏申报.docx(12页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
黄芪对腹膜透析效能及腹膜间皮细胞与腹腔免疫功能的阻碍江苏申报
记录序号:
打算类别:
分类代码:
项目编号:
科技项目打算设计任务书
项目名称:
黄芪对腹膜透析效能及腹膜间皮细胞与腹腔免
疫功能的阻碍
承担单位:
单位地址:
:
项目负责人:
:
职务职称:
主管部门:
南京市卫生局
填报日期:
2002年04月26日
江苏省科学技术厅
二OO一年制
一、立项依据:
一、国内外研究现状、进展趋势及理论实践依据:
随着腹膜透析(PeritonealDialysis,PD)技术的不断提高和透析理论的日趋完善,尤其是1976年Popovich提出的持续非卧床腹膜透析(ContinuousAmbulatoryPeritonealDialysis,CAPD)医治方式带来了腹膜透析的空前繁荣。
最近几年来的流行病学资料说明同意腹膜透析医治的终末期肾功能不全(End-StageRenalDisease,ESRD)患者正以每一年%的比例迅速增加,目前全世界已有超过120000的患者在同意腹膜透析医治。
腹膜透析因其相关于血液透析更高的生活质量、显著的残余肾功能爱惜、优于或等于血液透析的生存率和较少的资金花费,故有作者提出,腹膜透析应该是肾脏替代疗法的首选[1,2]。
但是,随着腹膜透析患者寿命的延长,腹膜透析的远期并发症腹膜功能衰竭已成为ESRD患者透析技术性失败的最重要的缘故[3],并成为制约腹膜透析进展的“瓶颈”。
资料显示约1/3的腹膜透析患者6年后因腹膜功能衰竭而退出透析医治。
腹膜功能衰竭与长期腹膜透析后腹膜结构和功能破坏进而致使腹膜超滤失败和溶质转运功能障碍紧密相关[4]。
腹膜透析液的生物不相容性是致使腹膜功能衰竭的首要缘故,腹膜间皮细胞作为腹膜组成部份在这一进程中扮演着重要角色。
最近几年来随着人腹膜间皮细胞标准培育方式和腹膜透析动物模型的确立,腹膜功能衰竭的机理得以初步说明。
腹膜间皮细胞在长期非生理性透析液刺激下,转移生长因子β(TGF-β)mRNA过度表达,TGF-β作为细胞增殖与细胞外基质合成的重要调剂因子,致使细胞外基质合成增加和腹膜纤维化[5],最终致使腹膜超滤失败和溶质转运功能障碍。
同时TGF-β也是调剂细胞凋亡的重要细胞因子,组织病理学证明腹膜功能衰竭的重要特点表现为腹膜间皮细胞的丧失,过量的TGF-β表达将增加间皮细胞的凋亡,致使间皮细胞的完整性受到破坏,研究说明完整的间皮细胞层能够显著延缓腹膜纤维化的进程。
第二,腹膜透析的要紧并发症腹膜感染也是致使腹膜功能衰竭的重要缘故,反复的炎症刺激使腹膜局部高水平TGF-β持续存在致使腹膜发生纤维化和硬化[6]。
目前公认长期腹膜透析时腹腔细胞免疫功能抑制是致使腹膜反复感染的要紧缘故,尤其是被以为是腹腔细胞免疫功能最重要组成部份和腹膜抗击细菌感染第一道屏障的巨噬细胞功能的明显抑制。
研究说明,腹膜在长期非生理性透析液的刺激下,巨噬细胞功能受到抑制,当腹膜发生感染时透析患者腹腔巨噬细胞功能指标包括吞噬指数、白细胞介素1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平显著降低,若是改用更符合生理条件的透析液那么能够使腹腔巨噬细胞功能取得明显增强,从而增强腹膜对感染的抗击能力,减少腹膜炎的发生[7]。
最近,腹膜血管在腹膜功能衰竭中的作用也取得重视,充沛的血流除能有效增强腹膜的抗击力减少腹膜炎的发生外[8],也是维持长期腹膜透析患者腹膜转运功能的重要因素。
腹膜血管血流量减少时腹膜溶质转运和腹膜超滤率均显著下降[9],研究显示长期腹膜透析患者腹膜血管内皮细胞依托的血管舒张因子显著减少,从而阻碍腹膜透析的效能,而如在腹膜透析液中添加扩血管物质硝普纳那么能有效提高腹膜透析患者的透析成效。
基于上述研究结果,最近几年来临床医师一直致力于两方面的研究。
一是研究更符合生理条件和不阻碍腹膜免疫功能的全新的腹膜透析液。
尽管已有诸如含多聚糖、含氨基酸、含碳酸氢根等多种透析液的体外实验的报导,但事实上所有这些透析液并非能完全替代葡萄糖作为渗透性物质的作用,其临床应用前景尚不明确。
另一方面,肾脏病医师通过在现有的透析液中添加一些物质来达到爱惜和改善腹膜功能的目的。
有研究说明在透析液中加入双嘧莫达能显著降低小鼠腹透液中TGF-β的含量,而加入透明质酸能够在爱惜腹膜间皮细胞方面起到必然的成效。
中药黄芪是一种含有多糖、甙、黄酮和微量元素等多种成份的物质,其具有多重药理作用[10]。
黄芪能显著抑制炎症因子TGF-β的表达,从而延缓肝脏、肾脏等多种脏器疾病时发生纤维化的进程;能明显减缓人胚二倍体细胞自然衰老进程延长细胞寿命约1/3左右[11];能有效地调剂细胞免疫功能,通过向小鼠腹腔注射黄芪能够发觉腹腔巨噬细胞吞噬功能取得增强,从而增强腹膜抗菌能力;黄芪还具有扩血管的作用,研究显示其能显著抑制血管收缩物质内皮素的释放,从而可能起到扩张血管增加血流量的作用[12]。
依照黄芪的上述作用,能够推测,在腹膜透析液中加入黄芪能够起到延长腹膜间皮细胞的寿命、抑制间皮细胞TGF-β的分泌、提高腹腔巨噬细胞功能、改善局部微循环,从而阻止/延缓腹膜纤维化和避免腹膜感染的发生,达到阻止/延缓腹膜功能衰竭的目的。
但是关于黄芪在腹膜透析中的应用尚无相关报导。
要紧参考文献:
1.ThodisE,PassadakisP,VargemezisV,Oreopoulosdialysis:
betterthan,equalto,orworsethanhemodialysis?
Dataworthknowingbeforechoosingadialysismodality.PeritDialInt,2001;21:
25-35.
2.VanBiesenW,VanholderR,LameireRoleofPeritonealDialysisastheFirst-LineRenalReplacementDialInt,2000;20:
375-383
3.AnS.DeVriese,SiskaMortier,NorbertH,ethappenstotheperitonealmembraneinlong-termperitonealdialysis?
PeritDialInt,2001;Vol.21;:
S9-28
4.DevuystO,TopleyN,Williamsandfunctionalchangesinthedialysedperitonealcavity:
impactofmorebiocompatibleDialTransplant,2002;17(3):
12-5
GC,SchiemannWP,LodishroleoftransforeinggrowthfactorbetainhumanENGLJMed,2000;342:
1350-8
6.LinCY,ChenWP,YangLY,ettransforminggrowthfactor-betal1expressionmayptedictperitonealfibrosisinCAPDpatientswithfrequentperitonitisJNephrol,1998;18:
513-9
S,HolmesCJ,MackenzieRK,dialysiswithbicarbonate/lactate-bufferedperitonealdialysisfluidsinalong-termimprovementinexvivoperitonealmacrophageASocNephrol,2002;13:
S97-103
8.Parkincreasingsevernityofperitonitisinlong-termperitonealdialysisRenReplaceTher,1998;5:
185-93
C,BrendolanA,CrepaldiC,etandclearencestudiesinhumanisolatedpertonealvascularPurif,1994;12:
233-42
10.耿长山。
黄芪的免疫药理研究进展。
中西医结合杂志,1986;6:
62-64
11.孟庆云。
中国中医药进展50年。
P280
12.伍敦裕,林海玲。
黄芪注射液医治慢性肾功能不全患者血浆内皮素转变及其意义。
有效医学杂志,1998;14:
611
二、研究目的与意义:
研究目的:
通过体外人腹膜间皮细胞培育观看中药黄芪在抑制由高糖引发的TGF-β过度表达中的作用,通过动物实验从组织病理学角度观看黄芪对腹膜间皮细胞完整性的保护和腹膜纤维化的抑制和巨噬细胞功能调剂等方面的作用,通过临床观看了解黄芪对腹膜转运功能和免疫功能的阻碍,从不同层面了解黄芪在阻止/延缓腹膜功能衰竭中的作用及其机制,为临床上改善长期腹膜透析患者透析疗效提供一种新的医治方式。
研究意义:
随着临床腹膜透析的普遍应用和腹膜透析患者寿命的延长,临床上因长期腹膜透析致使腹膜功能衰竭进而透析失败的患者愈来愈多。
中药黄芪在我国散布普遍且有2000连年的应用历史。
目前临床上已有黄芪注射液制剂,而且由于黄芪能够直接注入腹腔,因此通过从不同层面了解黄芪在阻止/延缓腹膜功能衰竭中的作用及其机制的研究,在临床上推行利用黄芪来阻止/延缓腹膜功能衰竭从而延长ESRD患者腹膜透析时刻、提高透析质量、减少透析失败率,提高腹膜透析远期疗效具有普遍的应用前景。
3、技术查新:
参见附页。
二、研究内容:
研究内容:
本课题采纳体外细胞培育、动物实验、组织病理学与临床相结合的系统研究方式,从多个方面研究中药黄芪在避免/延缓腹膜功能衰竭中的作用,并从不同层面和角度说明其作用机理。
通过体外人腹膜间皮细胞培育了解黄芪在抑制间皮细胞TGF-β表达方面的作用;通过动物实验从组织病理学的角度直观了解黄芪在间皮细胞爱惜和在阻止/延缓腹膜纤维化中的作用;通过临床应用,了解黄芪对腹膜转运功能和免疫功能方面的阻碍。
关键技术和技术难点:
(1)体外人腹膜间皮细胞培育及干与方式的成立;
(2)动物腹膜透析模型及干与方式的成立;
(3)TGF-β、TNF-α免疫组化检测;
(4)巨噬细胞吞噬功能的诱导及检测;
(5)标准腹膜透析腹膜转运功能改变的研究。
课题的特色和创新的地方:
(1)腹膜功能衰竭是一多因素参与的病理进程,由于西药作用较为单一,因此在如何有效阻止/延缓腹膜功能衰竭的研究中显得较为局限,而中药黄芪具有多重药理作用,在阻止/延缓腹膜功能衰竭的研究中具有较大的优势。
(2)由于部份药物无法进行腹腔内应用,因此以往的研究大多停留在体外实验的水平,而黄芪能够平安地应用于腹腔内注射,本课题的研究功效能够直接应用于临床。
(3)通过从体外细胞培育、动物实验、组织病理学和临床全面地对黄芪在阻止/延缓腹膜功能衰竭中的作用及机制进行研究,至今尚未见类似的研究报导。
要紧技术指标:
(1)黄芪抑制间皮细胞TGF-β分泌的指标;
(2)反映巨噬细胞免疫功能的TNF-α分泌水平和吞噬功能的指标;
(3)黄芪对腹膜间皮细胞的保护和抑制纤维化的指标;
(3)黄芪对腹膜转运功能的阻碍。
三、研究方式及技术线路:
研究工作整体思路:
本研究第一通过人腹膜间皮细胞体外培育的方式在培育基中添加黄芪观看其抑制由高糖引发的间皮细胞TGF-β过度表达中的作用,了解黄芪与腹膜间皮细胞TGF-β表达之间的关系。
然后通过腹膜透析动物模型从组织病理学角度直观了解黄芪对腹膜间皮细胞损伤的爱惜和抑制腹膜纤维化方面的作用。
最后通过在临床上的应用了解黄芪对腹膜转运功能和腹膜免疫功能的阻碍,并探讨其作用机制。
从而为临床上阻止/延缓长期腹膜透析患者因腹膜纤维化、腹膜反复感染致使的腹膜功能衰竭提供新的医治方式。
技术线路:
(1)体外细胞培育部份:
从择期手术小网膜切除的标本取得人网膜组织,依照文献方式培育间皮细胞,通过调整原代(1-9代)人腹膜间皮细胞培育液中葡萄糖浓度,在%、%葡萄糖条件下观看添加与不添加黄芪对腹膜间皮细胞TGF-β表达的阻碍,TGF-β用免疫组化方式检测。
(2)动物模型部份:
依照标准腹膜透析小鼠动物模型成立方式成立小鼠腹膜透析模型,别离采纳添加和不添加黄芪的葡萄糖浓度为%、%的透析液进行腹膜透析,8周后取小鼠腹膜组织,10%甲醛溶液固定、脱水、石蜡包埋后HE、PAS、PASM染色,在光学显微镜下进行病理组织学检查。
(3)临床部分:
在临床上选择长期腹膜透析患者,采用自身对照的方法观察添加黄芪前后患者腹膜转运功能和患者透析液中TNF-α浓度和巨噬细胞吞噬功能的转变。
(4)总结资料,分析结果。
研究方式:
(1)组织细胞培育方式。
(2)动物实验学研究方法。
(3)组织病理学方法。
(4)生化分析方法。
四、现有研究条件和工作基础:
一、现有工作基础:
--------临床上有大量的长期腹膜透析的随访病人。
研究者已成功把握了人腹膜间皮细胞培育方式和腹膜透析小鼠动物模型成立方式,具有了TGF-β、TNF-α的检测能力,和本研究所需的组织病理学检查条件。
同时在预实验中已经得出黄芪能有效抑制体外培育人腹膜间皮细胞TGF-β的表达。
因此,本研究具有很强的可行性和较高的成功率。
二、项目负责人最近几年来研究成绩简介
最近几年发表相关论文:
最近几年研究功效:
3、研究队伍:
4、支撑条件:
五、打算进度:
一、总进度和年度进度:
—课题预备,订购动物与试剂。
—细胞培育研究部份。
—动物实验部份。
—临床部份。
—总结资料,分析结果,科研鉴定。
二、项目完成形式:
(1)项目完成可通过论文形式考察,估量可在核心期刊发表论文4-6篇。
(2)细胞培育研究部份通过对TGF-β表达的检测能够了解高糖在腹膜间皮细胞TGF-β表达中作用,了解黄芪在拮抗TGF-β过度表达中的作用。
(3)动物实验部份通过腹膜组织病理学检查了解黄芪对腹膜间皮细胞损伤的爱惜和抑制腹膜纤维化方面的作用,可通过病理切片形式表达。
(4)临床研究部份可通过医治前后患者TGF-β、TNF-α水平和巨噬细胞吞噬功能了解腹膜功能的改变,用不同性来表示。
(5)通过功效考核。
(6)功效可达到国际先进水平。
六、项目研究预期功效及效益:
预期达到的要紧技术指标:
(1)黄芪有效抑制体外培育人腹膜间皮细胞的TGF-β的分泌。
(2)应用黄芪后在腹膜透析动物模型腹膜组织病理检查中发觉黄芪能保护腹膜间皮细胞的完整性和抑制腹膜纤维化的发生。
(3)黄芪能改善腹膜透析病人的腹膜转运功能和增强巨噬细胞的免疫功能。
(4)该研究功效预期达到国际领先水平,为临床上阻止/延缓腹膜功能衰竭提供新的医治方式。
经济效益和社会效益:
通过本课题的系列研究,预期能够明确黄芪有效阻止/延缓长期腹膜透析病人腹膜功能衰竭的进程,从而延长腹膜透析时刻、提高腹膜透析质量。
从经济效益来讲,腹膜透析是一种价钱低廉的肾脏替代疗法,长期的腹膜透析必将大大减轻社会及其个人的经济负担。
从社会效益来讲,腹膜透析具有较高的生活质量,能够使ESRD病人重返社会并参加力所能及的工作,产生踊跃的社会效应。
而且,通过此疗法的成功也能够提升中药医治在国际上的阻碍。
七、承担项目单位及分工
八、经费概算及来源:
经
费
预
算
总
额
及
分
类
科目
名称
单价
(万元)
数量
主要依据
金额
(万元)
业务费
文献检索
论文发表
科研鉴定
3.0
实验材料
胰蛋白水解酶
0.1092/100μl
200μl
细胞培养
0.22
小牛血清
0.03/100ml
1000ml
细胞培养
0.30
RMPI1640培养基
0.009/500ml
2000ml
细胞培养
0.04
HAM-12培养基
0.014/500ml
5000ml
细胞培养
0.14
抗细胞角蛋白抗体
0.242/100μl
200μl
细胞培养
0.50
抗波形蛋白抗体
0.242/100μl
200μl
细胞培养
0.50
抗Ⅷ因子抗原抗体
0.166/100μl
200μl
细胞培养
0.40
抗CD45抗体
0.35/100μl
200μl
细胞培养
0.70
TGF-β单克隆抗体
0.25/96次
╳2
生化检测
0.50
TNF-α单克隆抗体
0.185/96次
╳2
生化检测
0.40
细菌脂多糖
0.126/100μg
200μg
免疫诱导
0.25
黄芪注射液
1.50
腹膜透析液
3.00
其他试剂
1.00
病理检查
1.50
动物实验
小鼠
动物实验
1.00
其他
临床标本收集
2.00
总计:
17万元,
其中自筹:
万元,申请拨款17万元
九、研究人员:
姓名
单位
性别
出生年月
专业
专业技术职务
承担工作
签章
项
目
主
要
负
责
人
参
加
项
目
研
究
人
员
十、承担单位审查及许诺意见、盖章
第一承担单位第二承担单位
(法人签字)(法人签字)
盖章盖章
年月日年月日
十一、协作单位及审查许诺意见、盖章
(法人签字)
盖章
年月日
十二、项目主管部门审查许诺意见、盖章
盖章
年月日
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 黄芪 腹膜 透析 效能 细胞 腹腔 免疫 功能 阻碍 江苏 申报