基于氢化可的松动物模型的针刺效应影响因素的定性定量化初步研究.docx
- 文档编号:24399880
- 上传时间:2023-05-27
- 格式:DOCX
- 页数:13
- 大小:50.38KB
基于氢化可的松动物模型的针刺效应影响因素的定性定量化初步研究.docx
《基于氢化可的松动物模型的针刺效应影响因素的定性定量化初步研究.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《基于氢化可的松动物模型的针刺效应影响因素的定性定量化初步研究.docx(13页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
基于氢化可的松动物模型的针刺效应影响因素的定性定量化初步研究
基于氢化可的松动物模型的针刺效应影响因素的
定性定量化初步研究
闵友江1严振国2杨华元2#
(1江西中医学院附属医院针灸康复科,南昌330006;
2上海中医药大学;上海201203
[摘要]目的:
以氢化可的松造成肾阳虚实验动物模型为研究对象,采用正交设计研究影响针刺效应的多个因素,探索影响针刺效应的主次因素和针刺参数的
(27最佳组合,以期为提高针刺疗效、指导针灸临床提供理论依据。
方法:
采用L
8
正交表对4因素(穴位的相对特异性、针刺捻转角度和频率、每次针刺时间、针刺间隔时间2水平安排试验,运用自行研制的计算机控制针刺手法仪治疗肾阳虚大鼠,通过观察睾酮、雌二醇的水平来比较上述4因素的主次。
结果:
上述4因素对针刺效应的影响大小依次是捻针角度和频率、穴位选择、针刺时间或针刺间隔时间,其中捻针角度和频率是影响针刺效应的主要因素或重要因素(P<0.01或P<0.05;腧穴的选择也是影响针刺效应的重要因素(P均<0.05;而针刺时间和针刺间隔时间相对来说是次要因素(P均>0.05。
结论:
1.针刺治疗肾阳虚大鼠的最佳针刺参数为选用肾俞穴、采用小角度慢频率的捻转、每天治疗一次、每次1分钟;2.本实验研究中,不同因素对针刺治疗肾阳虚大鼠的疗效不同,其中捻针的角度和频率对疗效的影响最大,其次为穴位的选用,再次每次针刺时间,和针刺间隔时间。
[关键词]针刺效应;正交设计;氢化可的松动物模型;睾酮;雌二醇
1引言
针灸是中医学的重要组成部分,它是通过调和阴阳、疏通经络、扶正祛邪作用治疗疾病的。
因其疗效显著、适应症广、操作简便、经济安全等优点为人类健康做出了重大贡献。
针灸具有扶正祛邪的作用,也就是针灸能够产生补虚泻实的作用。
大多数学者认为针灸产生补虚泻实的效应是与机体的机能状态、穴位的相对特异性、补泻手法、刺激量的大小等因素有关的[1-4]。
而刺激量的大小又与针刺强度(比如与针具的粗细、提插的幅度、捻转的角度、提插捻转的频率、作用
上海中医药大学名师传承研究项目;上海市重点学科建设项目:
T03027
#通信作者:
杨华元(1952-,男,上海中医药大学教授、博士研究生导师。
研究方向:
中医诊疗技术客观化,E-mail:
yhyabcd@
力的大小、针刺深度有关和作用时间(施术时间、留针时间、针刺间隔时间、针刺次数或疗程有关[3]。
但对于针刺补泻手法的不同操作是否存在着效应上的差异?
具体的针刺补泻是否存在?
补泻手法与补泻效应有何联系?
穴位有无相对特异性以及与补泻效应的关系如何?
补泻手法与刺激量有无关系?
补泻效应与刺激量的关系如何?
针刺刺激量如何做到客观化科学化?
影响针刺效应的主次因素如何?
能否获取最佳针刺效应多因素的最佳组合?
等等。
对于这些问题,虽有些学者[5-7]做过一些理论上的探讨或实验研究,但都(或缺乏系统性、全面性、科学性,特别是对于影响针刺补泻效应多因素的交互作用少有人涉及,对于针刺手法刺激量的客观化科学化研究也难尽人意。
本研究在肾阳虚大鼠模型的基
(27正交表进行4因素(穴位的相对特异性、针刺捻转角度和频率、础上采用L
8
每次针刺时间、针刺间隔时间2水平安排试验,通过采用自行研制的计算机控制针刺手法仪对实验性肾阳虚大鼠进行针刺效应影响因素定性定量学初步研究,现将研究内容阐述如下。
2实验材料与方法
2.1实验动物
56只SD雄性大鼠,体重200±20g,由上海中医药大学动物实验中心提供,合格证号:
SCXK(沪2003-0002,清洁级,标准配方杆状饲料喂养,自由进水。
所有大鼠进行适应性饲养3天后开始进行实验;在此期间根据《实验针灸学》[8]进行定穴,剪去穴位处的毛发。
2.2实验器材
30号0.5寸华佗牌一次性针灸针,苏州医疗器械厂生产;37℃恒温温床、SHZ-Ⅲ型循环水真空泵,上海亚荣生化仪器厂生产;SN-682放射免疫γ计算器,中国科学院上海核研究所日环仪器厂生产;高速低温离心机:
Herus公司生产;计算机控制针刺手法仪(申请(专利号:
CN200510027586.1公开(公告号:
CN1709215,上海中医药大学研制。
2.3实验试剂
氢化可的松注射液,扬州制药有限公司生产,规格含量:
5ml/25mg,批准文号:
国药准字H23021660;血清睾酮(T、雌二醇(E2放射免疫测定试剂盒,北京北方生物技术研究所生产,批准文号:
国药准字S1*******。
2.4药物对照组大鼠用药及用药剂量:
(1右归丸配方(按到《景岳全书》记载的处方和比例:
熟地黄24g,山药、枸杞子、鹿角胶、杜仲、菟丝子各12g,山茱萸、当归各9g,肉桂、制附子各6g。
全部药材从上海中医药大学附属曙光医院东院中药房购进。
除鹿角胶外,其余药物经纯水漂洗后,用纯水800ml浸渍,煮沸后小火煎煮至400m1,除渣过滤出药液250ml;再加400ml纯水煎煮至300ml,除渣过滤出药液150m1;合并两次煎煮液;鹿角胶加热至烊化后兑入煎煮液中混匀,最后调至400ml。
(2用药剂量:
按70kg体重成年人每日1剂药,每剂400ml煎剂计算,200g大鼠的右归丸煎剂灌服用量换算公式[9]:
大鼠日服总量=人日服总量(400ml×大鼠与人体表面积(0.018=7.2ml。
分两次灌服。
2.5实验干预因素设计:
因素A—选穴:
A1前(手三里,A2肾俞。
因素B—针刺捻转频率:
B1大角度快频率,捻针角度为270°,频率为180次/分;B2小角度慢频率捻针角度为90°,频率为60次/分。
因素C—每次针刺时间:
C1针刺2分钟,C2针刺1分钟。
因素D-针刺间隔时间:
D1每天治疗一次,D2隔天治疗一次。
影响针刺补泻效应的因素有机体的机能状态、穴位的相对特异性、针刺捻转角度和频率、每次针刺时间、针刺间隔时间,本实验在肾阳虚大鼠模型的基础对其中4因素2水平采用正交表安排试验。
根据df
≥4×(2-1=4,查统计表,
表
(27正交设计表安排实验(见表3中的部分。
选择L
8
2.6实验造模、分组和治疗方法
(1分组和造模
56只SD雄性大鼠经适应性饲养3天后随机分成2组,一组为8只,作为正常对照组;另一组为48只,用于实验造模。
造模方法:
每只大鼠按照0.03mg/g·bw剂量肌注氢化可的松,每日1次,连续肌注10天。
48只造模成功的肾阳虚大鼠,随机分成10组,一组8只,作为模型对照组,另一组8只作为右归丸治疗对照组,其它的8组作为实验组,每组4只。
(2治疗方法:
具体的分组及干预措施如下:
表1具体分组及干预措施
组别数量分组干预措施
1
2
3
44只4只4只4只A1B1C1D1组A1B1C2D2组A1B2C1D2组A1B2C2D1组
针刺手三里、采用大角度快频率、针刺2分钟、每天治疗一次针刺手三里、采用大角度快频率、针刺1分钟、隔天治疗一次针刺手三里、采用小角度慢频率、针刺1分钟、每天治疗一次针刺手三里、采用小角度慢频率、针刺2分钟、隔天治疗一次5
6
7
8
4只4只4只4只A2B1C1D2组A2B1C2D1组A2B2C1D1组A2B2C2D2组针刺肾俞、采用大角度快频率、针刺1分钟、每天治疗一次针刺肾俞、采用大角度快频率、针刺2分钟、隔天治疗一次针刺肾俞、采用小角度慢频率、针刺2分钟、每天治疗一次针刺肾俞、采用小角度慢频率、针刺1分钟、隔天治疗一次9
10
118只8只8只正常对照组模型对照组药物对照组作为造模的对照进行氢化可的松造模按右归丸配方煎药灌胃,作为相关指标改善的参照对象
(330号0.5寸的毫针刺入穴位5~7mm,进针后稍作提插捻转,然后与针
图1针刺实验操作
刺手法仪连接进行针刺手法操作,留针10分钟,再对每穴进行手法操作1次,再留针10分钟,然后出针。
按照实验设计方案每日针刺或隔日针刺,共治疗14天。
然后处死动物提取相应的组织进行相关指标的检测。
2.7指标检测
血清睾酮和雌二醇用放射免疫方法测量其浓度,按照试剂盒说明书进行操作。
2.8统计方法
针刺治疗组的数据以均数(M表示,三个对照组的数据以均数±标准差(M±SD表示。
对照组组间比较采用配对t检验;各试验组间的多因素比较采用二水平正交表的极差分析和方差分析以确定因素各水平的优劣、分析因素的主次,预
测最佳试验方案。
所有统计采用SPSS10.0统计分析软件进行,以P≤0.05作为有显著性统计意义,以P≤0.01作为有高度显著性统计学意义。
3结果
3.1一般情况观察
注射氢化可的松造模的大鼠体重减轻,活动减少,反应迟钝,弓背,扎堆,毛发失去光泽,阴囊皱缩;经针刺和右归丸治疗后,大鼠食欲增加,体重加重,毛发渐渐有光泽,喜欢活动,而模型对照组的大鼠整体情况不佳。
3.2模型组分别与正常对照组和药物对照组比较
观察血清睾酮、雌二醇的水平,正常对照组与模型对照组之间比较,具有极显著性差异(P均<0.01;药物对照组与模型对照组之间比较,具有显著性差(P均<0.05,说明采用右归丸治疗氢化可的松造模形成的肾阳虚是有效的;通过大鼠一般情况的比较及以方测证的结果,说明采用氢化可的松造模方法是成功的。
统计结果见表2。
表2模型组分别与正常对照组和药物对照组比较(单位:
ng/ml
雌二醇(E21.8±1.06◆5.82±1.09△◆
1.91±0.2△#和◆表示模型组与药物治疗组比较,P均<0.01;*和△表示模型组与正常组比较,P均<0.05。
3.3各实验组组间比较
(1极方差分析:
即直观分析。
经直观分析,R值越大,针刺治疗效果越好,因此各影响因素从大到小排列顺序为:
捻针角度和频率、穴位选择、针刺时间或针刺间隔时间。
R值见表3。
21
2
3
4111111221122121212121221A1B1C1D1A1B1C2D2A1B2C1D2A1B2C2D17.3
58.5
616.2916.394.314.413.862.95
表34因素2水平的正交实验设计方案及相关指标极方差分析
(2方差分析
以睾酮和雌二醇为观察对象进行的上述4因素2水平间比较的方差分析显示:
针刺捻转的角度和频率是影响针刺效应的主要因素或重要因素,P<0.01或<0.05;腧穴的选择是影响针刺效应的重要因素,P均<0.05;而针刺时间和针刺间隔时间相对来说是次要因素,P均>0.05。
即从表中F值可以看出,F值越大,其因素对针刺效应的影响越大。
B和C因素交互作用即针刺角度和频率与针刺作用时间的交互作用对针刺效应的影响不是很大。
4分析和讨论
4.1模型与检测指标的选择
肾阳虚证模型是中医虚证实验研究中运用得最多且比较成功的动物模型之一。
肾阳虚证动物模型的造模方法很多,但氢化可的松是最早用于肾阳虚证造模的药物。
60年代初,邝安教授就首次建立了“氢化考的松”动物模型。
后来又有不少文献报道这一模型的成功运用[10,11]。
陈小野教授[12]曾提出,证候的临床诊断依据有五个方面:
症状(本证、病因(正证、治疗(反证、相关因素(佐证、客观指标(佐证。
证候动物模型的评价也应由上述五个方面组成。
陈英华等[13]曾对肾阳虚动物模型评价标准进行过研究与探讨,提出了从一般状态与试验检测、客观指标、药物反证几个方面进行动物模型评价的科学设想。
本实验正是基于上述的科学构思,选择了氢化可的松造模方法。
通过对大鼠进行一般情况观察、右归丸治疗反证、血清睾酮和雌二醇客观指标的检测来评判模型是成功的。
沈自尹院士[14]几十年来的研究证实肾阳虚证的物质基础在于下丘脑—垂体-靶腺(肾上腺、甲状腺、性腺轴的功能紊乱。
血清睾酮和雌二醇是反应肾阳虚大鼠下
5678222211222211121221211221A2B1C1D2A2B1C2D1A2B2C1D1A2B2C2D211.2411.9419.8819.193.303.762.752.52
TⅠ48.5939.0954.9854.7654.7754.17TⅡ62.2571.7555.8656.0856.0756.67TR3.4158.1650.220.330.3250.625TSS
23.32
133.3
0.097
0.218
0.211
0.781
E2Ⅰ15.5315.7813.9914.2214.4513.08E2Ⅱ12.3312.0813.8713.6413.4114.78E2R0.80.930.030.150.26-0.43E2SS1.281.7110.0020.0420.1350.361
丘脑—垂体-性腺轴功能紊乱的终末指标,是能够比较直接评价肾阳虚大鼠模型的客观指标之一。
表4以睾酮和雌二醇为观察指标的针刺多因素方差分析
变异来源
dfSSMSFP结论A123.3223.3271.33<0.05重要因素B
1133.3133.3407.75<0.01主要因素B×C10.0970.0970.30>0.05次要因素C10.2180.2180.67>0.05次要因素D10.2110.2110.65>0.05次要因素
睾酮
误差41.370.327A11.281.289.481<0.05重要因素B
11.7111.71112.674<0.05重要因素B×C10.00
20.0020.015>0.05次要因素C10.0420.0420.311>0.05次要因素D10.1350.1351>0.05次要因素
雌二醇
误差4
0.54
0.135
4.2实验设计
正交设计是进行多因素、多水平试验的效率最高的设计方法,自1970年华罗庚在我国推广以来,已广泛应用于各领域科研。
这种设计不仅能明确各因素的主次地位和各水平的优劣,而且能知道哪些因素存在什么性质的交互影响,还可找出诸因素各水平的最佳搭配,并且具有计算简单等优点。
针刺治疗疾病受多个因素以及各因素多个水平的影响,如针刺效应与机体的机能状态、穴位的相对特异性、补泻手法、刺激量的大小、针刺作用时间等有关,而每个因素又可分为多个水平因素。
正是基于上述复杂因素的考虑,针灸界有学者想用或已用这种先进的设计方法来进行针灸实验和临床研究[4]。
本实验采用L8(27正交表对4因素(穴位的相对特异性、针刺捻转角度和频率、每次针刺时间、针刺间隔时间2水平安排试验,加上模型的选择,我们对2因素(机能状态即肾阳虚和穴位的相对特异性进行了定性化研究,对3因素(针刺捻转角度和频率、每次针刺时间、针刺间隔时间进行了定量化研究,并且对2因素(针刺捻转角度和频率与每次针刺时间进行了交互作用的研究。
4.3结果分析
(1针刺捻转的角度和频率是影响针刺效应的主要因素或重要因素。
原因可能是:
200克大鼠的体重和体表面积分别是70千克人的1/350和1/56,30号的针灸针作用于大鼠,如果按照上面的比例折算,则相当于一枚钢钉作用于人体;再加上捻转,可想而知对大鼠的刺激有多大。
因此,不难理解针刺捻转角度和频率是影响本实验针刺疗效的主要因素或重要因素。
(2腧穴的选择也是影响针刺效应的重要因素。
对于肾阳虚证来说,选择肾俞穴的治疗效果要好于前三里。
肾俞穴,属膀胱经,是肾的背俞穴;而膀胱与肾相表里。
穴名释义曰:
肾俞,应肾,是肾气转输,输注之穴,是治肾重要腧穴,故名“肾俞”。
《医宗金鉴》曰:
“肾俞,主治下元诸虚,精冷无子,……”。
现代医学研究表明,肾俞穴区的组织受第1~3腰神经节段支配,第1~3腰神经前支参与腰丛的组成,从腰丛发出髂腹股沟神经和生殖股神经支配生殖器;肾俞穴所在的腰部有4对腰神经节,位于腰椎体前外侧与腰大肌内侧缘之间,腰神经节连成腰交感干;腰交感干通过交通支与5对腰神经相连,并随腰神经分布;腰交感干还有一腰内脏神经,通过这一神经与腹盆部的脏器如肾、肾上腺、内生殖器官等联系;这可能就是经穴-脏腑相关学说和背俞穴治疗相应脏腑疾病的物质基础之一。
杨氏等[15]研究发现温针灸肾俞穴具有明显调节性激素的作用,可以使老年雌性大鼠明显低下的雌二醇与孕酮水平升高。
而手三里是手阳明大肠经的腧穴,与肾没有直接的关系;从现代医学分析,手三里与肾阳虚证的靶腺(肾上腺、甲状腺、性腺也没有直接的联系。
因此,通过上述的分析与本实验研究的结果,腧穴主治作用还是有相对特异性的。
4.3.3针刺时间和针刺间隔时间相对来说是次要因素;B和C因素交互作用即针刺角度和频率与针刺作用时间的交互作用对针刺效应的影响不是很大。
原因可能是:
针刺捻针的角度和频率对大鼠的刺激太大了,可能早已超出了取得疗效的最大刺激量,具体原因有待进一步探讨。
5展望
本实验研究只取得了初步的成果,为进一步剖析和阐明针刺效应影响因素的作用规律和作用机理,故做如下设想及展望:
1.谈针刺补泻则离不开补泻手法,本实验使用的计算机控制针刺手法仪只能够对针刺的捻转和提插进行定量控制,但还不能模拟针刺补泻手法,我们将对该仪器进一步改进,使之能够基本模拟针
刺补泻手法,做到针刺补泻的定量化;2.在今后的研究中我们将选择更客观、更能评价疾病疗效的指标,选择更能反应肾阳虚证物质基础(下丘脑—垂体—靶腺(肾上腺、甲状腺、性腺轴变化的指标,如血清类固醇、促肾上腺皮质激素(ACTH、促肾上腺皮质激素释放激素释放因子(CRF等再进一步深入进行反复验证实验;3.增加其它虚证模型甚至引入实证模型进行研究;4.采用混合水平的正交设计表设计实验,增加影响因素水平研究,比如补泻手法安排补法、平补平泻法和泻法3水平研究;刺激量的大小安排大、中、小3水平研究;甚至对刺激量大小的影响因素进行单独的正交表设计实验;5.将成熟的技术应用到临床中去,进行大样本、多中心、随机对照研究。
可以想象通过本课题的深入研究,有可能对纷繁复杂的针刺补泻手法在一定程度上做出比较科学的评价,对能够真正影响针刺补泻效应的因素,精选出针刺手法参数的最佳组合,建议广泛运用到临床中去,有利于提高临床疗效;对于不能产生真正补泻效应的有混淆视听、故弄玄虚之疑的花哨手法,就应该从针灸学教材中删除出去,以纯化教材、去伪存真,还针灸学乃至中医学的本来面目。
参考文献
[1]吴强.从手法歧义看补泻手法的实质.中国针灸,2002,22(2:
129.
[2]高希言.论针刺补泻的相对特异性.中国针灸,2002,22(9:
607.
[3]杨华元,刘堂义.针刺手法的定量学研究.中医研究,1999,12(2:
44.
[4]范刚启,钱广洪,张南征,等.针刺手法研究现状分析.医学与哲学,1996,17(4:
181.
[5]卞金玲,张春红.石学敏院士针刺手法量学的概念及核心.中国针灸,2003,23(5:
287.
[6]雎明河,周宇妹,马文珠,等.大小刺激量捻转补泻法对血虚证大鼠红细胞计数的影响.中
国针灸,2004,24(3:
213.
[7]解越,武连仲,李军.武连仲教授治疗恢复期及后遗症期脑卒中经验.中国针灸,2004,
24(1:
65.
[8]林文注,王佩主编.实验针灸学.上海:
上海科学技术出版社,第1版,1999,(9:
288-289.
[9]洪缨,张恩户主编.药理实验教程.北京:
中国中医药出版社,第1版,2005,(1:
24-25.
[10]王普京,严智强.氢化可的松动物模型的病理组织学观察及其中药的反证与治疗.中国
中医基础医学杂志,1999,5(10:
41.
[11]秦路平,张家庆,石汉平,等.蛇床子香豆素对肾阳虚模型大鼠腺垂体-肾上腺皮质轴功
能的影响.中国中西医结合杂志,1997,17(4:
227.
[12]陈小野.证候动物模型诊断依据的设想与评价.中国医药学报,1987,2(1:
50.
[13]陈英华,欧阳轶强,孙琪,等.肾阳虚证动物模型规范化研究诊断指标选择的初步探讨.
中国中医基础医学杂志,2003,9(l0:
26.
[14]沈自尹.肾阳虚证的定位研究.中国中西医结合杂志,1997,17(1:
50.
[15]杨廉,刘媛媛,路玫,等.温针灸肾俞穴对老年雌性大鼠性激素的影响.中国针灸,2001,
21(3:
172.
针刺手法参数数据管理平台的设计与实现
唐文超杨华元刘堂义高明
(上海中医药大学针灸推拿学院中医工程研究室,上海201203
[摘要]根据对ATP-I型针刺手法参数测定仪配套软件中参数数据存储文件的分析,采用C#语言结合Access数据库编写适用于针刺手法研究的针刺手法参数数据管理平台,实现对针刺手法参数测定仪测试人员从基本信息到手法参数各个项目的自由设定、仪器数据自动分析、录入表格自动生成、数据检索、统计表格按需导出等功能。
以完善针刺手法参数测定仪的数据存储、浏览和检索模式,从而进一步提高针刺手法科研效率。
[关键词]针刺手法;参数;数据管理
ATP-I型针刺手法参数测定仪(以下简称ATP-I因其对针刺手法操作过程的客观化,对手法参数的量化分析,已被广泛地应用于科研与教学工作当中1。
该设备配套的操作软件对经由A/D转换器进行模—数转换形成的数字化信号进行分析,得出操作者手法的频率、最大峰值、最小峰值、位移及离散度参数2,并将测得的数据结果以文本文件格式保存于计算机硬盘中以供研究者日后调用浏览。
同时纵观当今医学科研现状,规范化数据库方案已越来越多的应用于各个二级学科,其不仅提高了科研效率、最大程度的保证了信息的完整性,也为统计分析提供了详实的资料3。
因此在现有ATP-I数据存储模式基础上研发一款配套的数据管理平台已是当务之急。
1设计思路
基于笔者2009年设计的“医学科研数据管理系统及其方法”(发明专利申请号:
2009010047107.0,已进入公开阶段开发针刺手法参数数据管理平台,该专利主要包括数据表管理方法、数据表录入方法、统计表格文件设置及导出方法等。
目前已应用于医学文献、临床病例资料管理等领域。
2针刺手法数据文件分析
2.1参数还原
ATP-I生成的针刺手法数据文件包含有操作者每次测试过程中的电压信号,
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 基于 氢化 可的松 动物 模型 针刺 效应 影响 因素 定性 量化 初步 研究