1200液相色谱仪.docx
- 文档编号:24392220
- 上传时间:2023-05-27
- 格式:DOCX
- 页数:12
- 大小:19.92KB
1200液相色谱仪.docx
《1200液相色谱仪.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《1200液相色谱仪.docx(12页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
1200液相色谱仪
Agilent1200LC
(中文版B01.01)
现场培训教材
安捷伦科技有限公司
生命科学与化学分析仪器部
一、培训目的:
● 基本了解1200LC硬件操作。
● 掌握化学工作站的开机,关机,参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。
二、培训准备:
1、仪器设备:
Agilent1200LC
● G1310A:
(单元泵);G1312A(二元泵);G1311A(四元泵)。
● G1313A(标准型自动进样器)。
● G1316A(柱温箱)。
● G1314A(VWD检测器)。
● G1362A(示差检测器)。
●色谱柱:
EclipseXDB-C18150x4.6mm,5umcolumnP/N993967-902
2、溶剂准备:
● 色谱级纯或优级纯乙腈或甲醇。
● 二次蒸馏水
基本操作步骤:
(一)、开机:
1、打开计算机,进入中文WindowsXP画面,并运行CAGBootpServer程序。
2、打开1200LC各模块电源。
3、待各模块自检完成后,双击“Instrument1Online”图标,化学工作站自动与1200LC
通讯,进入的工作站画面如下所示。
4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,点击“视图”菜单中的“显示顶部工具栏”,“显示状态工具栏”,“系统视图”,“样品视图”,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开冲洗阀。
7、点击“泵”图标,点击“设置泵…”选项,进入泵编辑画面。
8、设流速:
5ml/min,点击“确定”。
9、点击“泵”图标,点击“控制…”选项,选中“启动”,点击“确定”,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止。
10、点击“泵”图标,点击“控制…”选项,选中“关闭”,点击“确定”关泵,关闭冲洗阀。
11、点击“泵”图标,点击“设置泵…选项”,设流速:
1.0ml/min。
12、点击泵下面的瓶图标,如下图所示(以单元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积,点击“确定”。
(二)数据采集方法编辑:
1、开始编辑完整方法:
● 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法…”项,如下图所示选中除“数据分析”外的三项,点击“确定”,进入下一画面。
2、方法信息:
● 在“方法注释”中加入方法的信息(如:
测试方法)。
● 点击“确定”,进入下一画面。
3、泵参数设定:
(以四元泵为例)
● 在“流速”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂B”处输入80.0,(A=100-B-C-D),也可“插入”一行“时间表”,编辑梯度。
在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
●点击“确定”,进入下一画面。
4、自动进样器参数设定:
(以标准G1313为例)
● 选择合适的进样方式,如图所示,进样体积5.0ul,洗瓶位置为6号。
“标准进样”----只能输入进样体积,此方式无洗针功能。
“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置,此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。
“使用进样器程序”---可以点击“编辑”按钮进行进样程序编辑。
● 点击进“确定”,进入下一画面。
5、柱温箱参数设定:
● 在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如:
40度。
并选中它,点击“更多>>”键,如图所示,选中“与左侧相同”,使柱温箱的温度左右一致。
● 点击“确定”,进入下一画面。
6、VWD检测器参数设定:
● 在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间,如>0.1min (2s)。
● 在“时间表”中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min ,波长=300nm。
点击“确定”,进入下一画面。
7、RID检测器参数设定:
● 色谱条件:
进样体积:
20ul。
光学单元温度:
“关闭”。
极性:
“正极性”。
峰宽(响应时间):
4s 。
● 如图所示:
“光学部件温度”---若环境温度控制在±2℃,设定为“关闭”, 若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。
“峰宽(响应时间)”---大多数分析设为“4s”,只有在高速分析下设为更短。
“分析后自动循环”---在不进行分析时可以让流动相循环,节省流动相,检测器连续运行,可随时投入使用。
● *****点击RID图标,选择RID Control:
Heater设为On,若要循环流动相,必须将“RecyclingValve”设为ON。
手动purge参比池,将其设为On,并输入Purge时间。
8、在“运行时选项表”中选中“数据采集”,点击“确定”。
9、点击“方法”菜单,选中“方法另存为…”,输入一方法名,如“测试”,点击“确定”。
10、
从菜单“视图”中选中“在线信号”,选中“信号窗口1”,然后点击“改变…”钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定”。
(如同时检测二个信号,则重复10,选中“信号窗口2”。
11、从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项,如下图所示,输入操作者名称,如“安装工程师”;在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。
区别:
手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。
Pr—在前缀/计数器----“前缀”框中输入前缀,在“计数器”框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd数据0001,vwd数据0002……。
12、点击“确定”,从“仪器”菜单选择“系统开启”。
13、等仪器准备好,基线平稳,从“运行控制”菜单中选择“运行方法”,进样。
(若无自动进样器,则基线平稳后,进样并搬动手动进样阀,启动运行。
)
(DAD,VWD色谱图如下所示:
)
(三)、数据分析方法编辑:
1、从“视图”菜单中,点击“数据分析”进入数据分析画面。
2、从“文件”菜单选择“调用信号”,选中您的数据文件名,如下图所示。
点击“确定”,则数据被调出。
3、做谱图优化:
从“图形”菜单中选择“信号选项”,如下图所示。
从“范围” 中选择“满量程”或“自动量程”及合适的时间范围或选择“自定义量程”调整。
反复进行,直到图的比例合适为止。
点击“确定”。
4、积分:
● 从“积分”菜单中选择“积分事件”选项,如下图所示。
选择合适的“斜率灵敏度”
,“峰宽”,“最小峰面积”,“最小峰高”。
● 从“积分”菜单中选择“积分”选项,则数据被积分。
● 如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。
● 点击左边“√”图标,将积分参数存入方法。
5、打印报告:
●从“报告”菜单中选择“设定报告”选项,进入如下图所示画面。
●点击“定量结果”框中“计算”右侧的黑三角,选中“面积百分比”,其它选项不变。
●点击“确定”。
● 从“报告”菜单中选择“打印报告”,则报告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则点击“报告”底部的“打印”钮。
(四)、关机:
● 关机前,先关灯,用相应的溶剂充分冲洗系统。
● 退出化学工作站,依提示关泵,及其它窗口,关闭计算机。
● 关闭Agilent1200各模块电源开关。
(五)、Agilent1200LC维护保养:
1、色谱柱长时间不用,存放时,柱内应充满溶剂,两端封死(如乙腈/甲醇适于反相色谱柱,正相色谱柱用相应的有机相)。
2、手动进样器,当使用缓冲溶液时,要用水冲洗进样口。
3、流动相使用前必须过滤,不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)。
4、带seal-wash的1200,要配制90%水+10%异丙醇,开启seal-wash清洗泵,溶剂不能干涸。
5、注意事项见说明书,或由现场工程师介绍。
****注意:
1、本教材仅适用于现场工程师培训讲解参考之用,内容为工作站现场培训的一般要求,请根据用户的仪器配置及现场用户的需求进行相应的培训内容增删。
2、安捷伦公司对本教材可能存在的错误及其后果不承担任何法律责任,我们适时推出新版本的培训教材,恕不另行通知。
维护知识问答
1、为什么溶剂和样品要过滤?
溶剂和样品过滤非常重要,它会对色谱柱、仪器起到保护作用,消除由于污染对分析结果的影响。
色谱柱:
由于填料颗粒很细,色谱柱内腔很小,溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。
仪器:
溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损,同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
2、为什么HPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项?
HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。
在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。
缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项.
清洗液配制:
90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力,不能干涸。
3、为什么Agilent1200LC的流动相管路非常细?
在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响,由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级,液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。
因此,样品进入色谱柱后,在柱子以外的任何死体积(进样器、柱接头、连接管、检测器)中,样品分子的扩散和滞留,都会引起色谱峰的展宽,而使柱效降低。
为使柱外效应减之最小,获得理想的分析结果,Agilent1200LC使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 1200 色谱仪