实验室常见缓冲液配制.docx
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实验室常见缓冲液配制
实验室常用缓冲液配置方案
1)1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)
组份浓度:
1MTris-HCl
配制量:
1L
配制方法:
1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
PH值
浓HCl
7.4
约70ml
7.6
约60ml
8.0
约42ml
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)
组份浓度:
100mMTris-HCl,10mMEDTA
配制量:
1L
配制方法:
1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTris-HClBuffer(PH7.4,7.6,8.0)
100ml
500mMEDTA(PH8.0)
20ml
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀混合。
3.将溶液定容至1L后,高温高压灭菌。
4.室温保存。
3)1.5MTris-HCl(pH8.8)
组份浓度:
1.5MTris-HCl
配制量:
1L
配制方法:
1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调节pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3M醋酸钠(pH5.2)
组份浓度:
3M醋酸钠
配制量:
100ml
配制方法:
1.称量40.8gNaAc·3H2O(或者24.6g无水NaAc)置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后,室温保存。
5)PBSBuffer
组份浓度:
137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4
配制量:
1L
配制方法:
1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。
NaCl
8g
KCl
0.2g
Na2HPO4
1.42g
KH2PO4
0.27g
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
6)10M醋酸铵
组份浓度:
10M醋酸铵
配制量:
100ml
配制方法:
1.称量77.1g醋酸铵置于100~200ml烧杯中,加入约30ml的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100ml。
3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意:
醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
7)苯酚/氯仿/异戊醇(25:
24:
1)
配制方法:
1.说明:
从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:
24:
1)。
氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配制方法:
将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:
1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
8)10%(W/V)SDS
组份浓度:
10%(W/V)SDS
配制量:
100ml
配制方法:
1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68℃加入溶解
2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2
3.将溶液定容至100ml后,室温保存。
9)2NNaOH
组份浓度:
2NNaOH
配制量:
100ml
配制方法:
1.量取80ml去离子水置于100~200ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
3.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100ml。
4.将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。
10)2.5NHCl
组份浓度:
2.5NHCl
配制量:
100ml
配制方法:
1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸(11.6N),均匀混合。
2.室温保存。
11)5MNaCl
组份浓度:
5MNaCl
配制量:
1L
配制方法:
1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中,加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
11)20%(W/V)Glucose
组份浓度:
20%(W/V)Glucose
配制量:
100ml
配制方法:
1.称取20gGlucose置于100~200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水后,搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100ml。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
12)SolutionI(质粒提取用)
组份浓度:
25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose
配制量:
1L
配制方法:
1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTris-HCl(PH8.0)
25ml
0.5MEDTA(PH8.0)
20ml
20%Glucose(1.11M)
45ml
dH2O
910ml
2.高温高压灭菌后,4℃保存。
3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA(20mg/ml)。
13)SolutionII(质粒提取用)
组份浓度:
200mMNaOH,1%(W/V)SDS
配制量:
500ml
配制方法:
1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中
10%SDS50ml
2NNaOH50ml
2.加灭菌水定容至500ml,充分混匀
3.室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月
注意:
SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌
14)SolutionIII(质粒提取用)
组份浓度:
3MKOAc,5MCH3COOH
配制量:
500ml
配制方法:
1.称量下列试剂,置于500ml烧杯中。
KOAc
147g
CH3COOH
57.5ml
2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至500ml。
4.高温高压灭菌后,4℃保存。
15)0.5MEDTA(pH8.0)
组份浓度:
0.5MEDTA
配制量:
1L
配制方法:
称取186.1gNa2EDTA·2H2O,置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌。
3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)。
注意:
pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。
4.加去离子水将溶液定容至1L。
5.适量分成小份后,高温高压灭菌。
6.室温保存。
16)1MDTT
组份浓度:
1MDTT
配制量:
20ml
配制方法:
1.称取3.09gDTT,加入到50ml塑料离心管内。
2.加20ml的0.01MNaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22mm滤器过滤除菌。
3.适量分成小份后,-20℃保存。
17)10mMATP
组份浓度:
10mMATP
配制量:
20ml
配制方法:
1.称取121mgNa2ATP·3H2O,加入到50ml塑料离心管内。
2.加20ml的25mMTris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。
3.适量分成小份后,-20℃保存。
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺(Spermidine):
溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):
溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate):
将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):
加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,
须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):
在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):
溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):
溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):
溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/LEDTA:
配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/LHEPES:
将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/LHCl:
加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/mlIPTG:
溶解250mg的IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:
溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/LPMSF:
溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。
分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K(proteinaseK):
将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-freeRNase):
溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。
溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。
用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。
(配制过程中要戴手套)
5mol/L氯化钠(Na
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- 实验室 常见 缓冲液 配制