BJS12食用油脂中脂肪酸的综合检测法.docx
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BJS12食用油脂中脂肪酸的综合检测法
附件3
食用油脂中脂肪酸的综合检测法
BJS201712
1范围
本方法适用于食用植物油(花生油、大豆油、玉米油、植物调和油、橄榄油、葵花籽油、芥花油、菜籽油、香油、棕榈油等)是否存在异常的检测及识别。
2方法原理
将样品甲酯化,采用气相色谱-串联质谱内标法定量测定13种脂肪酸甲酯含量,再根据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常,对异常样品进一步排查确认。
3试剂和材料
除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
3.1试剂
3.1.1正己烷(CH):
色谱纯。
1463.1.2甲醇(CHOH):
色谱纯。
33.1.3无水硫酸钠(NaSO):
分析纯。
423.1.4氢氧化钠(NaOH):
分析纯。
3.1.5三氟化硼甲醇溶液:
50%。
3.2溶液配制
3.2.1含2%氢氧化钠的甲醇溶液:
准确称取2g氢氧化钠(3.1.4)于烧杯中,加入甲醇(3.1.2),超声至氢氧化钠完全溶解,移入100mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度。
3.2.215%的三氟化硼甲醇溶液:
取50%三氟化硼甲醇溶液(3.1.5)30mL,缓慢加入到装有70mL甲醇(3.1.2)的烧杯中,用玻璃棒搅拌均匀。
3.3标准物质
3.3.1十一碳酸甘油三酯(CHOCAS:
13552-80-2)标准品,纯度>98%。
63668,3.3.2十一碳酸甲酯(CHOCAS:
1731-86-8)标准品,纯度>99%。
21224,3.3.337种脂肪酸甲酯混合标准溶液标准品,各组分浓度参考附录A。
3.4标准溶液配制
3.4.1十一碳酸甘油三酯内标溶液(1000mg/L)
称取0.10g(精确至0.0001g)十一碳酸甘油三酯,加入50mL甲醇溶解,移入100mL容量瓶中,以甲醇定容,制成储备液。
储备液于-20℃可冷藏保存三个月。
使用时以甲醇稀释成50mg/L的中间液,现用现配。
3.4.2十一碳酸甲酯内标溶液(1000mg/L)
称取0.10g(精确至0.0001g)十一碳酸甲酯,加入50mL正己烷溶解,移入100mL容量瓶中,以正己烷定容,制成储备液。
储备液于-20℃可冷藏保存三个月。
使用时以正己烷稀释成50mg/L的中间液,现用现配。
3.4.337种脂肪酸甲酯标准溶液
将脂肪酸甲酯混合标准溶液从安瓿瓶中完全转移至10mL容量瓶中,用正己烷定容,于-20℃冷藏可保存一周。
根据需要稀释成适当浓度的含5.00mg/L十一碳酸甲酯内标的标准工作溶液,现用现配。
4仪器与设备
4.1气相色谱-质谱联用仪(GC/MS)。
4.2恒温水浴:
(40℃~100℃)±1℃。
4.3分析天平:
感量0.1mg。
4.4涡旋振荡器。
4.5烘箱。
5分析步骤
5.1样品前处理
称取样品0.1g(精确至0.1mg)于250mL烧瓶中,加入50mg/L十一碳酸甘油三酯内标1mL(相当于50μg),加入含2%氢氧化钠的甲醇溶液(3.2.1)8mL,混合摇匀,连接回流冷凝器并在80℃水浴上回流,直至油滴消失;从回流冷凝器上端加入15%三氟化硼甲醇溶液(3.2.2)7mL,继续回流2min;用去离子水冲洗回流冷凝器,继续加热1min;从水浴上取下烧瓶,迅速冷却至室温,准确加入10mL正己烷,振摇2min,吸取上层正己烷相,使其通过无水硫酸钠吸水后,过0.22μm的有机相滤膜,待GC/MS检测。
5.2仪器条件
a.色谱柱:
毛细管色谱柱(DB-23,60m×0.25mm×0.25μm),或性能相当者。
b.载气:
高纯氦气。
c.载气流量:
1.0mL/min。
d.进样口温度:
270℃。
e.程序升温:
初始温度60℃持续3.0min;
60℃~160℃,升温速率15℃/min;保持0min;
160℃~210℃,升温速率8℃/min;保持0min;
210℃~230℃,升温速率3.15℃/min;保持10min。
f.进样方式:
分流进样,分流比5∶1。
g.进样体积:
1.0μL。
h.离子源:
EI,70eV。
i.离子源温度:
230℃。
j.四极杆温度:
150℃。
k.接口温度:
270℃。
l.定量分析为选择离子扫描(SIM),14种脂肪酸甲酯的保留时间、定性及定量离子见表1。
表114种脂肪酸甲酯的保留时间、定性离子和定量离子
序号
脂肪酸甲酯
定量离子(m/z)
定性离子(m/z)
保留时间(min)
1
C6:
0
74
87、99、59
8.34
2
C8:
0
74
127、5987、
10.44
3
C10:
0
74
87、143
12.23
4
C11:
0(内标)
74
14387、200、
13.08
5
C12:
0
74
87、143、183
13.94
6
C13:
0
74
87、143、185
14.79
7
C14:
0
74
87、143、199
15.66
8
C14:
1n5
74
166、20887、
16.06
9
C15:
0
74
21387、143、
16.53
10
C16:
1n7
74
87、194、236
17.81
11
C17:
0
74
87、143、284
18.42
12
C18:
2n6t
67
9581、、294
20.03
13
C20:
3n6
79
、6795
20.79
14
C20:
4n6
79
10591、67、
23.62
5.3结果计算1按下式()计算样品中脂肪酸的含量(以脂肪酸甲酯计):
c?
V?
X……………………………………
(1)
m式中:
X—样品中脂肪酸的含量(以脂肪酸甲酯计),单位为毫克每千克(mg/kg)
c—样品溶液中脂肪酸甲酯的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL)
V—样品溶液定容体积,单位为毫升(mL)
m—样品称取的质量,单位为克(g)
计算结果保留三位有效数字。
6结果判定
依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常,判定异常时提示油脂中可能存在反复高温2。
处理并经高度精炼获得的异常油脂。
判定依据见表
2依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否异常表
化合物
C6:
0
x>30,油脂可能存在异常,若确认不是棕榈油
C8:
0
x>120油脂样品
C10:
0
x>100为异常油脂样品
C12:
0
400>x>130
(1),可判定为异常油脂样品油x>400
C13:
0
x>10,可判定为异常油脂样品
C14:
0
x>1200
C14:
1n5
x>10
C15:
0
600>x>240可判定为异常油脂样品x>600
C16:
1n7
x>2000定为异常油脂样品
C17:
0
x>1800
C18:
2n6t
x>800
C20:
3n6
450>x>220x>450
C20:
4n6
120>x>36x>120
mg/k判定依据(1,可判定为异常油脂样(4(1可判定为异且确认不是葵花籽油脂可能存在异常若排除棕榈油干(2(1可判油脂可能存在异常若排除棕榈油干且确认不是芥花油和菜籽(2,且确认不是芥花油和,油脂可能存在异常,若排除棕榈油和菜籽油干(2,可判定为异常油脂样,油脂可能存在异常,若排除棕榈油干(2,可判定为异常油脂样,油脂可能存在异常,若排除棕榈油干,可判定为异常油脂样(2(1,油脂可能存在异常,若排除棕榈油干,且确认不是芥花油和菜籽(2,可判定为异常油脂样,油脂可能存在异常,若排除棕榈油干(2,可油脂可能存在异常,若排除芥花油、菜籽油、橄榄油和棕榈油干(1,可判定为异常油脂样,油脂可能存在异常若排除橄榄油干,可判定为异常油脂样(2,可判定为异常油脂样,油脂可能存在异常,若排除菜籽油干,可判定为异常油脂样(2,可判定为异常油脂样,油脂可能存在异常,若排除菜籽油干,可判定为异常油脂样品注:
(1)确认不是干扰油的方法:
采用气相色谱法测定样品中37种脂肪酸含量,根据37种脂肪酸含量分布结合附录C进行确认,检测方法参考GB5009.168-2016。
(2)排除棕榈油、菜籽油干扰的方法:
参考表3。
表3排除干扰油的方法
化合物mg/kg)方法说明(
C8:
0
,可排除棕榈油干扰的含量×样品中肉豆蔻酸x>(0.04)C14:
0
C10:
0
,可排除棕榈油干扰的含量×样品中肉豆蔻酸C14:
00.072)x>(
C12:
0
,可排除棕榈油干扰样品中肉豆蔻酸的含量×x>(C14:
01.00),可排除菜籽油干扰样品中芥酸的含量×x>(C22:
1n90.08)
C15:
0
,可排除棕榈油干扰的含量×样品中肉豆蔻酸x>(0.12)C14:
0
C20:
3n6
,可排除菜籽油干扰的含量×样品中芥酸x>(C22:
1n90.15)
C20:
4n6
,可排除菜籽油干扰样品中芥酸的含量×x>(C22:
1n90.04)
比值C14:
0/C12:
0
,可排除棕榈油干扰x>20
质量控制7
方法空白7.1以十一碳酸甘油三酯为空白,进行脂肪酸过程空白对照。
质控样品7.2
以正常食用植物油(纯大豆油、菜籽油、花生油)做对照,每批样品处理过程均以这三7.2.1种作为阴性对照。
以已确定为“异常油脂”的样品作阳性对照,同时以不同稀释度进行对照。
7.2.2质谱仪的质量数校正7.3
进行质量数校正。
PFTBA采用仪器自动调谐
A
附录脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度
脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度表A
序号
组分中文名称
组分英文名称
CASNo.
简称
纯度
浓度/(mg/mL)
1
丁酸甲酯
Methylbutyrate
623-42-7
C4:
0
99.9
0.402
2
己酸甲酯
Methylhexanoate
106-70-7
C6:
0
99.7
0.399
3
辛酸甲酯
Methyloctanoate
111-11-5
C8:
0
99.9
0.399
4
癸酸甲酯
Methyldecanoate(caprate)
110-42-9
C10:
0
99.9
0.399
5
十一碳酸甲酯
Methylundecanoate
1731-86-8
C11:
0
99.5
0.199
6
十二碳酸甲酯
Methyllaurate
111-82-0
C12:
0
99.8
0.398
7
十三碳酸甲酯
Methyltridecanoate
1731-88-0
C13:
0
99.4
0.199
8
十四碳酸甲酯
Methylmyristate
124-10-7
C14:
0
99.7
0.400
9
顺十四碳一烯酸甲酯-9-
Myristoleicacidmethylester
56219-06-8
C14:
1n5
99.9
0.202
10
十五酸甲酯
Methylpentadecanoate
7132-64-1
C15:
0
99.6
0.200
11
顺-10-十五烯酸甲酯
Cis-10-pentadecenoicacidmethylester
90176-52-6
C15:
1n5
99.0
0.197
12
十六碳酸甲酯
Methylpalmitate
112-39-0
C16:
0
99.9
0.598
13
十六碳一烯酸甲酯顺-9-
Methylpalmitoleate
1120-25-8
C16:
1n7
99.7
0.199
14
十七碳酸甲酯
Methylheptadecanoate
1731-92-6
C17:
0
99.9
0.201
15
顺-10-十一烯酸甲酯
Cis-10-heptadecenoicacidmethylester
75190-82-8
C17:
1n7
99.9
0.200
16
十八碳酸甲酯
Methylstearate
112-61-8
C18:
0
99.9
0.399
17
十八碳一烯酸甲酯反-9-
Trans-9-elaidicmethylester
1937-62-8
C18:
1n9t
96.9
0.194
18
十八碳一烯酸甲酯顺-9-
Cis-9-oleicmethylester
112-62-9
C18:
1n9c
99.9
0.399
19
十八碳二烯酸甲酯反,反-9,12-
Linolelaidicacidmethylester
2566-97-4
C18:
2n6t
99.9
0.200
20
十八碳二烯酸甲酯顺,顺-9,12-
Methyllinoleate
112-63-0
C18:
2n6c
99.9
0.200
21
二十碳酸甲酯
Methylarachidate
1120-28-1
C20:
0
99.9
0.401
22
十八碳三烯酸甲酯-6,9,12-顺,顺,顺
GAMMA-linolenicacidmethylester
16326-32-2
C18:
3n6
99.5
0.198
23
二十碳一烯酸甲酯-11-顺
Methyleicosenoate
2390-09-2
C20:
1n9
99.9
0.201
24
十八碳三烯酸甲酯-9,12,15-顺,顺,顺
Alpha-Methyllinolenate
301-00-8
C18:
3n3
99.6
0.200
25
二十一碳酸甲酯
Methylheneicosanoate
6064-90-0
C21:
0
99.5
0.201
26
-11,14-花生二烯酸甲酯顺,顺
Cis-11,14-eicosadienoicacidmethylester
2463-02-7
C20:
2n6
99.9
0.199
27
二十二碳酸甲酯
Methylbehenate
929-77-1
C22:
0
99.8
0.398
28
顺,顺,顺-8,11,14-花生三烯酸甲酯
Cis-8,11,14-eicosatrienoicacidmethylester
21061-10-9
C20:
3n6
99.1
0.197
29
二十二碳一烯酸甲酯顺-13-
Methylerucate(cis-13-docosenoicacidmethylester)
1120-34-9
C22:
1n9
99.7
0.199
30
花生三烯酸甲酯顺-11,14,17-
Cis-11,14,17-eicosatrienoicacidmethylester
55682-88-7
C20:
3n3
99.2
0.198
31
花生四烯酸甲酯顺-5,8,11,14-
Methylcis-5,8,11,14-eicosatet
2566-89-4
C20:
4n6
99.3
0.200
32
二十三碳酸甲酯
Methyltricosanoate
2433-97-8
C23:
0
99.9
0.201
33
顺-13,16-二十二碳二烯酸甲酯
Cis-13,16-docosadienoicacidmethylester
61012-47-3
C22:
2n6
99.9
0.200
34
二十四碳酸甲酯
Methyllignocerate
2442-49-1
C24:
0
99.8
0.399
35
花生五烯酸甲酯-5,8,11,14,17-顺
Methylcis-5,8,11,14,17-eicosatet
2734-47-6
C20:
5n3
99.9
0.199
36
二十四一烯酸甲酯顺-15-
Methylnervonate
2733-88-2
C24:
1n9
99.9
0.200
37
-4,7,10,13,16,19-顺二十二碳六烯酸甲酯
cis-4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoicacidmethylester
2566-90-7
C22:
6n3
99.7
0.198
B
附录各类典型食用植物油及“异常油脂”参考谱图
图SIM种脂肪酸甲酯标准物质图B.137
图典型菜籽油中脂肪酸甲酯SIM图B.2
图SIMB.3图典型大豆油中脂肪酸甲酯
图B.4典型花生油中脂肪酸甲酯SIM图
图B.5典型玉米油中脂肪酸甲酯SIM图
图B.6典型棕榈油中脂肪酸甲酯SIM图
典型植物调和油中脂肪酸甲酯SIM图图B.7
图B.8典型“异常油脂”中脂肪酸甲酯图SIM
C
附录37种脂肪酸含量分布棕榈油、菜籽油、芥花油、葵花籽油
个棕榈油样本结果6C.1图实验室普查
7个菜籽油样本结果实验室普查图C.2
12实验室普查个葵花籽油样本结果C.3图
个芥花油样本结果8C.4图实验室普查
本方法负责起草单位:
中国检验检疫科学研究院、浙江九安检测科技有限公司
本方法参与验证单位:
中国食品药品检定研究院
主要起草人:
仲维科、李礼、许秀丽、张峰、任荷玲、黄传峰
- 配套讲稿:
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