Agilent1260型高效液相色谱仪再验证报告汇总.docx

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Agilent1260型高效液相色谱仪再验证报告汇总

Agilent1260型高效液相色谱仪验证报告

文件编号

VR-SB-3020

版本

00

起草人/修订人

日期

年月日

审核人

日期

年月日

审核人

日期

年月日

批准人

日期

年月日

执行日期

年月日

印刷份数

份

发出份数

份

分发部门：

质量管理部：

[]供应部：

[]

生产技术部：

[]行政部：

[]

仓库：

[]

备注：

请在需要使用本文件的部门后[]里打“√”，不需使用的打“—”。

1.概述

2.验证目的

3.验证时间计划

4.验证培训

5.验证人员及职责

6.验证所需文件

7.验证内容

8.偏差处理

9.方案修改记录

10.风险的接受与评价

11.验证结果及评价

12.验证周期

13.最终批准

14.附件

1.概述

1260型高效液相色谱仪安捷伦公司生产，用于本公司成品，原料，中间品定性或定分析检测。

由输液泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，色谱工作站组成由高压输液泵将规定的流动相泵入色谱柱，自动进样器注入供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由色谱工作站软件记录和处理色谱信号。

1.1设备原理

二元泵基于双通道、双活塞杆串联设计，包括了溶剂传输系统必输实现的所有基本功能。

才通过两个可产生最高为600bar压力泵组件，可对溶剂进行计量并将溶剂传输至高压位置。

每个通道由一套泵组件组成，包括泵驱动器、泵头、带有可更换滤芯的主动输入阀和出口球阀，两个通道在一个低容积混合腔中连接，混合腔通过限毛细管连接到缓冲单元和混合器上。

压力传感器会检测泵压力，集成有PTFE过滤芯的冲洗阀装在泵的出口处，便于向泵头灌注流体。

1.2设备组成

本仪器主要由二元泵（G1312B）、变波长紫外检测器（G1314F）、自动进样器（G1329B）、柱温箱（G1316A）等模块组成，可进行高效液相色谱的分析。

1.3技术参数

设备名称

高效液相色谱仪

设备型号

Agilent1260型

进样瓶数

100个

进样量

0.1ul～50ul

输液系统

连个活塞串联泵

可设置的流速范围

0.001ml/min～5ml/min

流量准确度

±1%

操作压力范围

0bar～600bar

梯度形成

高压二元混合

电压

220V

2.验证目的

为确认高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书，报验证委员会批准。

2.1通过对设备技术指标适用性的审查，确认Agilent1260型高效液相色谱仪的设计选型符合检验要求及GMP管理要求。

2.2检查并确认Agilent1260型高效液相色谱仪安装符合设计要求，技术文件符合GMP管理规范。

2.3检查并确认Agilent1260型高效液相色谱仪的运行符合设计技术参数要求。

2.4检查并确认Agilent1260型高效液相色谱仪在正常运行下，性能条件能够持续符合设计和检验要求。

3．验证时间计划

验证时间安排：

年月日至年月日

4．验证培训（培训人员签到表见附件1）

培训内容

Agilent1260型高效液相色谱仪验证

培训对象

参与验证的检验人员

培训时间

2015年10月09日

培训讲师

李敏吴华

评估方式

讨论并回答问题

培训效果评价：

评价人：

日期：

5.验证人员及职责

姓名

职务

职责

签名

周事农

质量管理负责人兼质量受权人

负责验证方案和报告的最终批准

李敏

质量管理部部长

负责验证方案和报告的审核及评价

朱长富

QC主管

负责验证方案和报告的审核及评价

陈亚玲

QA主管

负责全面协调各项验证试验

吴华

QC

负责验证方案的具体操作、检验和记录

宁遵红

QC

负责验证方案的具体操作、检验和记录

6.验证所需文件

文件名称

文件编号

生效日期

存放处

高效液相色谱法标准操作规程

SOP-QCTY-005

2015年9月1日

档案室

Agilent1260型高效液相色谱仪使用、维护、保养标准操作规程

SOP-SB/SY-363

2015年9月1日

档案室

质量风险管理规程

SMP-Z7-002

2015年9月1日

档案室

偏差处理管理规程

SMP-QA-011

2015年9月1日

档案室

确认与验证管理规程

SMP-YZ-001

2015年9月1日

档案室

7.验证内容

7.1设计确认

7.1.1设计确认的目的

确认质量管理部新购AGILENT1260型高效液相色谱仪是否按照我公司URS进行设计，并符合GMP、安全、环保等方面标准。

7.1.2设计确认的范围

本设计确认的范围包含质量管理部AGILENT1260型高效液相色谱仪及其附属设备，并包括相配套的公用工程。

7.1.3设计确认的内容

7.1.3.1URS符合性评估

将该设备的文件及图纸与公司提出的URS进行比较，确认该设备已符合用户需求规范，检查及确认结果记入（附表2URS符合性评估表）。

7.1.3.2GMP符合性评估

将该设备的文件及图纸对照GMP有关设备功能和设计的规定，作出符合性判定，检查及确认结果记入（附表3GMP符合性评估表）。

7.1.3.3职业健康、安全与环保符合性评估

将设备的文件及图纸与公司提出的URS进行比较，确认该设备已符合用户需求规范中有关职业健康、安全与环保内容，检查及确认结果记入（附表4职业健康、安全与环保符合性评估表）。

7.1.4设计确认的结论

评价人：

日期：

年月日

7.2安装确认

7.2.1安装确认的目的

检查并确认Agilent1260型高效液相色谱仪的随机文件以及附件应符合使用和管理要求；同时，检查并确认Agilent1260型高效液相色谱仪的安装符合设计要求。

7.2.2开箱检查和资料附件的确认

7.2.2.1依据Agilent1260型高效液相色谱仪的装箱单，确认高效液相色谱仪的规格型号、随机附件及文件资料。

7.2.2.2根据产品使用说明书、确认高效液相色谱仪的使用范围是否符合设计要求。

7.2.2.3对文件资料进行清点、收集和保管。

7.2.3确认检查结果计入下表，并作出评价。

Agilent1260型高效液相色谱仪编号

序号

确认项目

确认内容及要求

是否符合标准

1

高效液相色谱仪型号

Agilent1260型

□是□否

2

高效液相色谱仪名称

高效液相色谱仪

□是□否

3

出厂编号

有

□是□否

4

适用范围

有

□是□否

5

数量

1台

□是□否

6

装箱单

有

□是□否

7

设备说明书

有

□是□否

8

设备合格证

有

□是□否

9

设备安装图

有

□是□否

10

仪器仪表合格证

有

□是□否

11

主配套件的说明书、质保书

有

□是□否

12

备品清单及数量

有

□是□否

检查人

日期

年月日

结果分析与评价：

评价人：

日期：

年月日

7.2.4安装确认的内容

7.2.4.1依据Agilent1260型高效液相色谱仪安装图的设计要求，检查高效液相色谱仪的安装位置和空间能否满足检验和方便维修的需求；

7.2.4.2依据Agilent1260型高效液相色谱仪安装图要求，检查外接管道是否符合要求；

7.2.4.3依据Agilent1260型高效液相色谱仪的技术要求，检查外接电源；

7.2.4.4依据Agilent1260型高效液相色谱仪的技术要求，检查主要精密组件的安装；

7.2.4.5依据Agilent1260型高效液相色谱仪机器外观，检查机器的完整性和其它问题；

7.2.4.6所有仪器仪表经过检定或校准，且全部在有效期内，检查及确认结果记入（附表5仪器仪表检定或校准检查记录）。

7.2.4.7安装确认检查结果记入下表，并作出评价。

Agilent1260型高效液相色谱仪编号

序号

项目名称

可接受标准

确认方法

是否符合标准

1

检验维修空间

有适当的检验维修空间

对照设计图纸检查

□是□否

2

仪器仪表

有计量合格证，并在有效期内

检查计量合格证

□是□否

3

安装地点

质量管理部

与图纸相符

□是□否

4

电压、频率

220V

检查

□是□否

5

外观

无划伤及凹凸现象、表面整洁

目测

□是□否

6

电脑

完好

目测

□是□否

7

检测器

完好

目测

□是□否

8

泵

完好

目测

□是□否

9

柱温箱

完好

目测

□是□否

10

进样阀

完好

目测

□是□否

11

在线混合器

完好

目测

□是□否

12

打印装置

完好

目测

□是□否

13

环境

通风

目测

□是□否

14

环境温度

10℃～30℃

测量

□是□否

15

环境相对湿度

小于65%

测量

□是□否

16

安装位置

仪器应平稳而牢固地安置在工作台上

目测

□是□否

17

接地

接地良好

目测

□是□否

18

电源线

与插孔吻合

目测

□是□否

19

其它条件

工作台不受阳光直射。

室内应无腐蚀性气体或其它影响测定的气体干扰。

周围应无影响测定的强电场、磁场和强烈震动。

目测

□是□否

检查人

日期

年月日

结果分析与评价：

评价人：

日期：

年月日

只有安装确认符合要求后，才能进行下一步的运行确认。

7.3运行确认

7.3.1运行确认的目的

检查和测试设备运行技术参数，确定Agilent1260型高效液相色谱仪符合药典检验参数要求和品种项目要求。

7.3.2运行前检查

运行前根据下表检查，并把检查结果记入下表，并作出评价。

Agilent1260型高效液相色谱仪编号

序号

运行前的检查项目

是否符合标准

1

检查电源电压是否正常，通电前检查电源开关位置

□是□否

2

检查安全接地线的外连接线是否正常，接触是否良好

□是□否

3

检查色谱柱是否连接好

□是□否

检查人

日期

年月日

结果分析与评价：

评价人：

日期：

年月日

7.3.3验证用测试仪器仪表的确认

所有用于验证测试仪器仪表均应有确认，并把确认结果记入下表，并作出评价。

序号

检测设备名称

规格型号

测量范围

校正单位

有效期至

1

2

3

4

检查人

日期

年月日

结果分析与评价：

评价人：

日期：

年月日

7.3.4运行项目确认

7.3.4.1设备安全性能确认

依据Agilent1260型高效液相色谱仪使用说明书，对设备安全性能检查结果记入下表，并作出评价。

Agilent1260型高效液相色谱仪编号

序号

控制程序确认项目

是否符合标准

1

有安全保护接地，电器安全可靠，无裸露电线

□是□否

检查人

日期

年月日

结果分析与评价：

评价人：

日期：

年月日

7.3.4.2泵的验证

⏹检测泵的流速

通过测量一定时间进入泵的体积检测泵的实际流速。

a试剂与设备

项目

备注

容量瓶（25mL）

收集出液管流出的水

天平

称量容量瓶和收集的水的重量

秒表

出口管接在泵出口

b检查过程

项目

1、设置流速为0.500mL/min,1.000mL/min，1.500mL/min

2、将出液管放在25mL预先称定的容量瓶内

3、开启泵，同时开启秒表。

4、收集了25min,15min,10min超纯水的时候，同时关闭泵，停止秒表。

5、利用公式SR=（Fmax-Fmin）/Fm×100%，计算得稳定性误差。

⏹泵流量设定值误差SS和流量稳定性误差SR的确认

测试标准及结果：

仪器名称：

型号：

流量设定值（ml/min）

0.5ml/min

1.0ml/min

1.5ml/min

测量次数

3

3

3

收集流动相时间t（min）

25

15

10

25ml容量瓶的重量W1（g）

容量瓶+流动相的重量W2（g）

流量实测值F（ml/min）

流量实测值平均值F（ml/min）

允许误差

SS

5%

3%

3%

SR

3%

2%

2%

实测误差

SS

SR

结果分析与评价：

评价人：

日期：

年月日

测试条件：

流动相：

经0.45μm微孔滤膜过滤的纯化水；

色谱柱：

4.6mm×250mm；

室温：

（水的相对密度为：

）。

测试方法：

启动仪器，以水作为流动相，待压力稳定后，在流动相出口处用称重过的25ml容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，按各流量规定的时间收集流出的流动相，精密称定，每个流量测定三次，记录测试温度，按下列计算流量设定值误差S1和稳定性误差S2

SS=（F-Fs）/Fs×100%

SR=（Fmax-Fmin）/Fm×100%

式中：

SS为泵流量设定值误差（%）；

SR为流量稳定性误差（%）；

F=（W2-W1）/（ρ•t）,为流量实测值（ml/min）；

式中：

W2—容量瓶+流动相的重量（g）；

W1—容量瓶的重量（g）；

ρ—实验温度时水的密度（g/cm3）；

t—收集流动相的时间（min）；

Fs—流量设定值

Fm—同一组测量值的算术平均值（ml/min）；

Fmax—同一组测量中流量最大值（ml/min）；

Fmin—同一组测量中流量最小值（ml/min）。

7.3.4.3柱温箱的验证

检查柱温箱的准确度及精密度。

检查过程

项目

1、设定柱温箱温度为25℃，等待温度平稳。

2、将校正过的温度计放入柱温箱，等待10分钟。

开始计时

3、每隔30min读取温度计显示温度及柱温箱显示温度一次。

共读取6次。

4、依次设置柱温为30℃，40℃重复2-3的过程

5、最大偏差不超过3.0℃，最大波动不超过1.0℃

验证结果见（附件6柱温箱验证表）

7.3.4.4紫外检测器

基线漂移和基线噪声的测定：

检查漂移和噪声不超过规定忽略的水平。

a检查之前的准备

项目

使用检测器与计算机工作站相连。

以1.0mL/min的流速输送甲醇。

b检测过程

项目

打开各模块的电源开关,仪器应能通过初始化。

当状态指示灯为关（而电源指示灯亮时），模块处于预运行状态，做好开始分析的准备。

开启工作站，设定波长为254nm。

流速1.0mL/min

使其走基线2小时。

在走基线的第二个小时期间测量基线的最大波动，以此值作为基线漂移值。

使其走基线10分钟。

使用此结果数据测量最大噪声值，并且以此值作为噪声值。

在测量噪声时，不考虑所有基线漂移数据。

7.3.4.5自动进样器进样精密度控制检查

a检查之前的准备

项目

使用自动进样器与计算机工作站相连。

以1.0mL/min的流速输送甲醇。

准备好萘+甲醇溶液

b参数设定

设备

参数

泵单元

流速：

1.0mL/min、最大压强:

20.0MPa

柱温箱

柱箱温度：

40℃

时间程序

5.00min停止

UV检测器

波长：

273nm、灵敏度：

2（1V/AU）

流动相

甲醇

计算机工作站

设定停止时间为5.00min、进样为6次

验证结果见（附件7高效液相色谱仪运行确认记录）只有运行确认符合要求后，才能进行下一步的性能确认

7.4性能确认

7.4.1性能确认的目的

确认Agilent1260型高效液相色谱仪是否符合检验和GMP管理的要求。

7.4.2所需设备

项目

备注

流动相

乙腈：

水=4:

1（体积比）

乙腈溶剂为HPLC级

色谱柱

4.6mm×长150mm的色谱柱

样品

准备：

称量10mg吡啶，置于100mL容量瓶中，加入乙腈溶液至刻度。

取上述溶液1mL至10mL容量瓶中，用乙腈溶液定容。

水

HPLC级

异丙醇

HPLC级

7.4.3验证过程

7.4.3.1系统准备

项目

检查LC系统的所有连接。

检查LC系统的管路。

清洗系统管路。

方法如下：

在管路清洗之前，务必从系统中卸下色谱柱，并且在原色谱柱的位置安装一个1.6C螺丝-螺丝单元。

首先使用异丙醇清洗管路，然后使用水清洗。

每种溶剂以2mL/min的流速清洗10min。

清洗完成后，向储液瓶中加入流动相（乙腈：

水=4:

1（v/v））,重新将色谱柱安装在系统中。

7.4.3.2验证过程中设备的参数

设备

参数

泵单元

流速：

1mL/min、最大压力:

20.0MPa

柱温箱

柱箱温度：

40℃

时间程序

7.00min停止

UV检测器

波长：

254nm、灵敏度：

2（1V/AU）

计算机工作站

停止时间：

7min、进样次数：

5次

7.4.3.3验证方法

项目

打开泵开关及检测器开关，通过自检。

打开计算机工作站，设定参数值。

在泵单元模块上设定流速为1.00mL/min。

在柱箱单元模块上设定柱箱温度为40℃。

按泵单元模块上的开始键，柱温箱单元模块上的开始键，泵单元模块上的开始键运行，柱箱温度开始上升。

此时观察检测器池出口管是否有液体流出，并且检查所有管路连接处是否有漏液。

设定检测器参数。

监测基线。

当基线平稳后，在进样器单元模块上设置20ul的进样体积，然后启动进样程序，进入流动相，观察是否有色谱峰出现。

进试验样品，进行分析。

至少重复该操作5次。

根据5次成功分析结果，计算保留时间，峰面积和峰高的变异系数（C.V.’s）

7.4.3.4可接受标准

保留时间

峰面积

峰高

标准

≤0.5%

≤1.0%

≤1.0%

7.4.3.5计算公式

RSD（C.V.）=（SD/X）×100

X=（X1+X2+……Xn-1+Xn）/n

式中：

n：

分析次数；

X1…Xn：

各个峰的保留时间（面积/峰高）；

：

平均值；

SD：

标准偏差；

C.V.：

变异系数。

验证结果见（附件8高效液相色谱仪性能确认记录）：

高效液相色谱仪性能确认记录。

8.偏差处理：

偏差处理情况

是否有偏差：

□有（记录见附表9）□无

备注：

在相应的“□”内“”

9.方案修改记录：

方案修改记录

是否有修改：

□有（记录见附表10）□无

备注：

在相应的“□”内“”

10.风险的接受与评价

　验证小组按验证方案中风险评定的内容进行验证，对存在的质量风险按提出的措施进行预防和纠正。

经验证小组确认，对判断为高级别的风险采取的控制措施经检查确认符合要求，则其相应的风险可降至为可接受风险。

序号

风险

因素

风险

可能影响效应

现有控制措施

S

P

D

RPN

风险级别

是否符合标准

1

泵

流速准确度和精密度不符合要求

1.保留时间漂移

2.峰面积不准确

导致检测结果不准确

定期校验流速（1.0ml/min）

2

3

3

18

低

□是□否

2

梯度不准确

检测结果不准确，保留时间漂移

定期校验梯度准确度和线性

3

2

3

18

低

□是□否

3

柱温箱

温度不准确

检测结果不准确

定期校验柱温箱温度

2

3

2

12

低

□是□否

4

进样器

进样体积不准确

检测结果不准确

1定期检定进样器准确度

2.每月清洁一次仪器管路

3

3

2

18

低

□是□否

5

基线噪音和基线漂移

基线噪音大，基线漂移

1.平衡时间延长

2.检测限降低导致小的杂质不能被检出，检测结果不准确

3.错把基线波动当杂质，或杂质当基线波动

1.每月清洗一次仪器

2.安装流动相在线过滤器

3.流动相离线脱气

3

3

1

9

低

□是□否

6

进样精密度

进样精密度不够

检测结果不准确

定期进行进样精密度测试

3

2

2

12

低

□是□否

11.验证结果及评价

评价人：

日期：

年月日

12.验证周期

12.1设备重大维修后，必须验证；

12.2设备性能达不到检验要求时，必须验证；

12.3正常情况每两年验证一次。

13.最终批准

批准人：

日期：

年月日

14.附件

14.1附件1：

人员培训签到表

14.2附件2：

URS符合性评估表

14.3附件3：

GMP符合性评估表

14.4附件4：

职业健康、安全与环保符合性评估表

14.5附件5：

仪器仪表检定或校准检查记录

14.6附件6：

柱温箱验证表

14.7附件7：

高效液相色谱仪运行确认记录

14.8附件8：

高效液相色谱仪性能确认记录

14.9附件9：

偏差调查处理报告

14.10附件10：

方案修改记录

附件1

人员培训签到表

培训内容

培训对象

培训时间

培训地点

授课人

职位

参训人员签名

序号

签名

备注

序号

签名

备注

1

21

2

22

3

23

4

24

5

25

6

26

7

27

8

28

9

29

10

30

11

31

12

32

13

33

14

34

15

35

16

36

17

37

18

38

19

39

20

40

附表2

URS符合性评估表

URS编号

URS名称

结果（参考文件或图纸）

URS01

设备工艺或性能要求

URS03

安装区域及位置要求

URS04

安装环境