细胞生物学实验教案.docx
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细胞生物学实验教案.docx
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细胞生物学实验教案
e《细胞生物学实验》授课教案
课程
细胞生物学实验
班级
11级3、4、5班
学期
2012-2013-2
课时
2
教师
何飞
上课日期
课程类型
实验
课程名称
(章、节)
细胞生物学实验
实验一细胞大小测定和生物绘图法
教学目的、要求
1.掌握用测微尺测定细胞大小的原理和方法。
2.掌握生物绘图的基本方法。
教学重点
1.测微尺测定细胞大小的原理和方法。
2.生物绘图的基本方法。
教学难点
主要教具
设备材料
1.实验材料:
口腔黏膜上皮细胞,洋葱内表皮,西红柿,芹菜,韭菜,红辣椒
2.实验用品:
普通光学显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、消毒牙签、烧杯、吸管、0.9%生理盐水、0.1%亚甲基兰、蒸馏水、吸水纸,HB及2H或3H绘图铅笔、橡皮、直尺、绘图纸、铅笔刀、各种细胞标本玻片。
思考题
人口腔上皮细胞、洋葱表皮细胞差异
课后记
教学内容
备注
(一)测微尺的原理
测微尺分物镜测微尺(简称物微尺或台微尺)和目镜测微尺(简称目微尺),两尺配合使用,可以测量细胞大小。
目微尺是一个可以放在目镜内的特制玻璃圆片,圆片中央刻有一条直线,此线分为若干格。
物微尺为一载玻片中央封固的小尺,长1mm,被等分为100格,长为0.01mm(10um)。
当测量细胞大小时,不能用物微尺直接测量细胞,而只能使用目微尺。
因目微尺测量的细胞是经物镜放大后的像,而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变,在测量时需要先用物微尺来测定,求出某一放大率时目微尺每格所代表的实际长度,然后再用以测定细胞大小。
将物微尺放在显微镜的载物台上,小心转动目镜测微尺,移动物微尺使两尺平行,起点线重合,然后找出另一处两尺刻度重合处,记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数(格数),按下式计算,在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度:
物测微尺格数
目微尺每格所代表的实际长度=×10um
目测微尺格数
例如:
目微尺是100倍,其对应的物微尺使80格,则目微尺每格所代表的实际长度为80/100=8um。
测量某一细胞时,如果目微尺测得其横径为5倍,则此细胞横径为8×5=40um。
(二)生物绘图的基本要求
1.具有高度的科学性,不得有科学性错误。
形态结构要准确,比例要正确,要求真实感,立体感,精美而美观。
2.图面要力求整洁,铅笔要保持尖锐,尽量少用橡皮。
3.绘图大小要适宜,位置略偏左,右边留着注图。
4.绘图的线条要光滑、匀称,点点要大小一致。
5.绘图要完善,字体用正楷,大小要均匀,不能潦草。
注图线用直尺画出,间隔要均匀,且一般多向右边引出,图注部分接近时可用折线,但注图线之间不能交叉,图注要尽量排列整齐。
6.绘图完成后在绘图纸上方要写明实验名称、班级、姓名、时间,在图的下方注明图名及放大倍数。
《细胞生物学实验》授课教案
课程
细胞生物学实验
班级
11级3、4、5班
学期
2012-2013-2
课时
2
教师
何飞
上课日期
课程类型
实验
课程名称
(章、节)
细胞生物学实验
实验二细胞中过氧化物酶的显示
教学目的、要求
1.观察过氧化物酶的分布
2.掌握过氧化物酶显示方法的原理及操作步骤
教学重点
过氧化物酶显示方法
教学难点
主要教具
设备材料
1.材料:
洋葱根尖
2.药品:
0.1%钼酸胺,1%联苯胺,生理盐水(0.7%-0.9%)
0.1%钼酸胺:
取0.1g钼酸胺溶于100ml双蒸水中。
1%联苯胺:
取1g联苯胺溶于100ml双蒸水中。
联苯胺混合液:
联苯胺(研磨)0.2g溶于100ml蒸馏水,过滤,于滤液中滴加3%H2O22滴,储存于棕色瓶中。
3.仪器用品:
显微镜、载玻片、盖玻片、解剖刀片
思考题
课后记
教学内容
备注
1.取新鲜洋葱根尖于载玻片上压片。
2.加1滴0.1%钼酸胺,置5分钟。
3.加1%联苯胺溶液1滴,待其出现蓝色。
4.用生理盐水冲洗1次。
5.加盖玻片,观察。
《细胞生物学实验》授课教案
课程
细胞生物学实验
班级
11级3、4、5班
学期
2012-2013-2
课时
2
教师
何飞
上课日期
课程类型
实验
课程名称
(章、节)
细胞生物学实验
实验三细胞内糖类的显示
教学目的、要求
1.掌握多糖鉴定的PAS法的原理与技术,
2.观察细胞内多糖的分布。
教学重点
线粒体的超活染色技术
教学难点
主要教具
设备材料
1.器材
显微镜、剪刀、镊子、解剖针、染色缸、载玻片、盖玻片、吸水纸、恒温水浴箱、小烧杯(10ml)
2.材料
马铃薯块茎
3.试剂及其配制
Schiff试剂、0.5%过碘酸溶液、70%乙醇、pH4.2磷酸缓冲液、淀粉酶
思考题
简述PAS法的反应原理,绘图描述细胞内多糖的分布。
课后记
教学内容
备注
切取马铃薯块茎,放入过碘酸溶液中,10min后用70%乙醇漂洗一下。
将薄片放入Schiff试剂中20~25min。
取出薄片放入70%的乙醇中浸1min。
用70%乙醇中冲洗(将薄片放在载玻片上,用吸管吸乙醇滴片)。
加上盖玻片镜检。
对照薄片可于切下后,以pH4.2磷酸盐缓冲液配制的淀粉酶消化40min,再进入染液。
结果:
块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色淀粉颗粒,对照无色或色淡。
《细胞生物学实验》授课教案
课程
细胞生物学实验
班级
11级3、4、5班
学期
2012-2013-2
课时
2
教师
何飞
上课日期
课程类型
实验
课程名称
(章、节)
细胞生物学实验
实验四细胞Feulgen反应
教学目的、要求
1.了解孚尔根反应的原理。
2.学习DNA的孚尔根染色方法及其操作步骤。
3.观察染色结果。
了解细胞中DNA的分布。
1.
教学重点
DNA的孚尔根染色方法
教学难点
主要教具
设备材料
1.仪器设备:
普通光学显微镜、冰箱、烘箱、水浴锅、染色缸、100ml小烧杯、载玻片、盖玻片若干、吸水纸若干、1L棕色试剂瓶。
2.实验材料:
洋葱根尖或蚕豆根尖切片、人血涂片。
3.试剂:
⑴1mol/LHCl:
82.5ml浓盐酸稀释于1000ml蒸馏水中。
⑵Schiff’s试剂配制:
100ml蒸馏水煮沸,加入0.5g碱性品红,搅拌溶解,溶液为红色。
待溶液冷却到50℃,过滤,加入10ml1mol/LHCl,摇动;继续冷却至25℃,加1.0g偏重亚硫酸钠,摇匀。
室温,暗处保存24h,直到溶液变为淡黄色或近于无色。
此时,品红已转化为无色品红衍生物,这一溶液称为Schiff’s试剂。
如果急用,加几粒活性炭,摇匀,过滤。
⑶漂洗液配制:
此溶液用时新鲜配制。
配制漂洗液与配制Schiff’s试剂所用偏重亚硫酸钠必须一致。
偏重亚硫酸钠5ml
1mol/LHCl5ml
蒸馏水90ml
⑷5%三氯乙酸:
5g三氯乙酸溶解定容于100ml蒸馏水中。
⑸0.5%固绿酒精溶液:
0.5g固绿粉末溶于100ml95%酒精中。
思考题
1.绘图表示蟾蜍或鹌鹑血细胞中DNA的原位分布情况。
2.简述Feulgen反应的原理及关键步骤。
说明Feulgen反应中设立对照组的必要性
课后记
教学内容
备注
实验原理:
核酸是最重要的生物大分子之一,它和蛋白质一起构成生命的主要物质基础。
核酸的最主要的生物学功能是它直接参与生物遗传信息的传递过程.在真核细胞中DNA主要分布在细胞核中,并与蛋白质结合核蛋白,构成染色质(体)的主要成分.在线粒体和叶绿体中也有少量DNA存在。
根据核酸三种成分的不同特性,可用不同方法加以显示。
核酸的碱基具有共轭双键,具有吸收紫外光的性质,其吸收高在260波长处,因此,可有紫外吸收法对核酸进行定量测定。
核酸的戊糖部分经稀酸水解后生成醛,可与Schiff氏试剂生成特异性的反应.这就是显示DNA的传统细胞化学方法Feulgen反应。
Feulgen反应的机理:
用稀酸水解DNA,首先破坏糖键,然后破坏糖和嘌呤碱之间的苷键,从而暴露出脱氧核糖化合物,通过磷酸键被连结在核糖主键中,稳定地保持着呋喃糖的形式,并在脱氧核糖的一端(C)性成游离的醛残基,像醛一样可以和Schiff氏试剂(无色品红亚硫酸)结合,形成紫红色化合物,所以只有DNA的部位,才能呈现紫红色阳性反应。
如果稀酸水解DNA继续进行,则会使蛋白质和核酸进一步被去除。
所以过度水解会使Schiff氏试剂的染色深度下降,甚至使反应呈阴性。
实验框图:
固定→酸水解→染色→水洗→镜检
1.固定:
血涂片
↓室温干燥
正常反应片对照片
↓↓90℃三氯醋酸15min
↓蒸馏水略洗
↓↓
2.稀酸水解:
1mol/L盐酸
↓冷3min
1mol/L盐酸
↓60℃水浴5-12min
1mol/L盐酸
↓冷略洗
3.染色:
Schiff氏试剂
↓暗盒避光30min
亚硫酸水I,II,III
↓各3min
4.水洗:
流水冲洗
↓2min
蒸馏水
↓略洗
镜检
5.Feulgen反应的结果:
由于DNA主要分布在细胞核,所以经Schiff氏试剂反应着色后,细胞核呈现深紫红色,而细胞的其它部分无色。
如用固绿复染,则细胞质和核仁呈现浅绿色。
6.Feulgen反应应注意的问题:
⑴做对照实验:
为了检验Feulgen反应的阳性的可靠程度,最好用DNA酶消化细胞材料,取得Feulgen阴性反应作为对照。
如果没有DNA酶,也可以用5%三氯醋酸抽提核酸作为阴性反应对照。
⑵稀酸水解的时间:
Feulgen反应的一个关键步骤是水解DNA,使其释放出游离的醛残基,但水解时间要适宜。
若水解时间不够,嘌呤硷脱落不下来,反应就变弱;反之,若水解时间过长,则可使DNA和蛋白质过度降解,使反应变弱,甚至呈阴性反应。
稀酸水解的时间一般为5-15min,随动植物种类以及固定剂的不同而异。
⑶Schiff氏试剂的质量:
Schiff氏试剂的好坏直接影响着DNA的呈色反应,所以应选用质量好的碱性品红来配制Schiff氏试剂,并注意避光保存,防止氧化变红失效。
《细胞生物学实验》授课教案
课程
细胞生物学实验
班级
11级3、4、5班
学期
2012-2013-2
课时
2
教师
何飞
上课日期
课程类型
实验
课程名称
(章、节)
细胞生物学实验
实验五细胞融合
教学目的、要求
1.了解PEG诱导细胞融合的基本原理。
2.通过PEG诱导的鸡红细胞之间或鸡红细胞与大鼠红细胞之间的融合实验,初步掌握细胞融合技术。
教学重点
PEG诱导细胞融合
教学难点
主要教具
设备材料
(一)材料:
新鲜鸡血,大鼠若干只。
(二)器材:
离心机、显微镜、天平、水浴锅、血球计数板、滴管、离心
管、容量瓶、广口瓶、细口瓶、烧杯、注射器、盖玻片、载玻片。
(三)试剂
1.Alsever溶液:
葡萄糖2.05g,柠檬酸钠0.80g,NaCl0.42g,溶于100ml
双蒸水中。
2.0.85%生理盐水。
3.GKN溶液:
NaCl8g,KCl0.40g,Na2HP04·2H2O1.77g,NaH2P04.H2O
0.69g,葡萄糖2g,酚红0.01g,溶于1000ml双蒸水中。
4.1%詹纳斯绿B溶液(原液):
称取50mg詹纳斯绿B溶于5mlRinger氏
液,稍加微热(30~40℃),使之溶解,用滤纸过滤后,即为1%原液。
5.詹纳斯绿B溶液(应用液):
取1%原液1ml加入49mlRinger溶液,混
匀即可。
现用现配。
6.50%PEG溶液:
称取一定量PEG(WM:
4000)放入烧杯,沸水浴加热,
使之熔化,待冷却至50℃时,加入等体积预热至50℃的GKN溶液,混匀,置
37℃备用。
7.Ringer氏液氯化钠0.85g氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100ml
思考题
简述PAS法的反应原理,绘图描述细胞内多糖的分布。
课后记
教学内容
备注
细胞融合(cellfusion)或细胞杂交(cellhybridization):
是指真核细胞通过介导和培养,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。
细胞融合包括质膜的连接与融合,胞质合并,细胞核、细胞器和酶等互成混合体系。
细胞融合技术广泛应用于细胞生物学、遗传学、病毒学、肿瘤学的研究。
例如,细胞周期调控的研究,基因互补分析、检测病毒,胞对病毒敏感因素的分析、肿瘤细胞恶性分析等等。
单克隆抗体技术就是通过细胞融合技术发展起来的,对生命科学的研究及医学方面的应用产生了重大影响。
在人工条件下,只有在某些诱导物(如仙台病毒、聚乙二醇等)的诱导下,使亲本细胞膜发生一定的变化,才能使两个或多个或更多的细胞融合。
细胞融合过程,首先是在诱导物的作用下出现细胞凝集现象。
然后,在细胞粘连处发生融合,而成为多核细胞。
最后,经有丝分裂,细胞核进行融合,遂形成新的杂种细胞。
除了同种类细胞间可以融合,种间远缘细胞也能融合,细胞与组织不同,不排斥异类、异种细胞,动物细胞如此,植物细胞也是如此。
基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体(homokaryon);来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体(heterokaryon)。
细胞融合后的多核细胞大多只能存活一段时间(约十几日)就相继死亡,而只有双核的异核体才能存活下来。
存活下来的异核体经有丝分裂,染色体合并在一个细胞核内,形成杂种细胞(hybridcell)。
诱导细胞融合的方法诱导细胞融合的方法
诱导细胞融合的主要方法有:
1.病毒诱导融合:
有许多种类的病毒能介导细胞融合,最常用的是灭活的仙台病毒(HVJ),为RNA病毒。
病毒诱导细胞融合的过程有:
首先是细胞表面吸附许多病毒粒子,接着细胞发生凝集,几分钟至几十分钟后,病毒粒子从细胞表面消失,而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合,胞浆相互交流,最后形成融合细胞。
病毒被膜中目前发现了两种糖蛋白。
较大的一种具有粘附细胞和凝血的作用;较小的一种可介导病毒同宿主细胞融合,也可诱导细胞与细胞融合,称为融合蛋白(fusionprotein)。
人工利用病毒诱导细胞融合即是利用病毒的这一特性,使用时先用紫外线将病毒灭活,稀释到一定浓度后加入到细胞悬液中诱导细胞融合。
病毒介导细胞融合方法在使用前需要病毒的繁殖与灭活,如灭活不完全易对实验人员造成伤害。
2.化学融合剂诱导融合:
化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽,其中最常用的是聚乙二醇(PEG)。
PEG用于细胞融合至少有两方面的作用:
①可促使细胞凝集;②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层,从而使相互接触的细胞膜之间发生融合,进而细胞质沟通,形成一个大的双核或多核融合细胞。
3.电融合:
是指细胞在电场中极化成偶极子,并沿着电力线排列成串,然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。
本实验采用鸡红细胞和大鼠红细胞为研究对象,在融合剂聚乙二醇(PEG)的作用下,促使鸡-鸡红细胞、鸡-鼠红细胞等发生融合。
实验操作1.红细胞的制备
(1)鸡血红细胞的制备注射器内先吸入2mlAlsever溶液,从鸡翼下静脉
取2ml鸡血,注入离心管,再加入6mlAlsever溶液,使之成为1:
4悬液。
(2)取lml鸡血悬液,加入4ml0.85%生理盐水,混匀平衡后,800r/min
离心3min,弃去上清液,再按上述条件离心2次。
最后,弃去上清液,加GKN
液4ml,离心1次。
(3)弃去上清液,加GKN液(体积比1:
9),制成10%细胞悬液。
(4)大鼠血红细胞的制备左手抓住大鼠,将大鼠头部向下,右手持尖头镊
子,轻轻将镊子插入大鼠眼眶内,然后将眼球向外拉出,此时流出的血液置于
预先盛有10mlAlsever溶液的烧杯中,操作顺利的话,可以得到6~10ml大鼠
血。
然后按上述鸡血红细胞制备的方法制成10%细胞悬液。
2.细胞计数取以上悬液以血细胞计数器计数,若细胞密度过大,用GKN
溶液稀释至(3~4)×107个/ml。
3.温育取以上细胞悬液lml于离心管,放入37℃(39℃左右更佳)水浴锅
中预热。
同时将50%PEG液放入水浴锅中预热。
4.融合
(1)待温度恒定后,在lml细胞悬液中慢慢逐滴加入0.5ml50%PEG溶液
(慢慢沿离心管壁流下融合剂),且边加边摇匀,然后放入水浴锅中。
(2)细胞融合一段时间(20~30min)后,加入GKN溶液至8ml,静止于水
浴锅中20min左右。
(3)取出离心管,1500rpm/min的转速离心5分钟,使细胞完全沉降。
弃去上清液,加GKN溶液,再离心1次。
5.染色弃去上清液,加入少量GKN溶液,混匀,取少量悬液于载玻片
上,加入Janusgreen染液小半滴,用牙签搅匀,3min后盖上盖玻片,观察细
胞融合情况。
6.实验设计实验共分为三种融合方式进行,即鸡红细胞-鸡红细胞、大鼠
红细胞-大鼠红细胞、鸡红细胞-大鼠红细胞融合,每位同学可选1~2融合方
式进行实验。
实验步骤•1实验时取0.2ml鸡血保存液于EP管中。
1500rpm离心10min弃去上清,可见血细胞沉淀。
2.用手轻弹管底,使沉淀松散,加入无血清1640培养液0.2ml制成悬液。
然后放入38℃水浴中预热10min。
3.吸取预热在38℃水浴锅中的50%PEG0.2ml在38℃水浴锅中于1min内沿离心管壁逐滴加入离心管中,边加边摇动离心管,使之与细胞混匀,38℃水浴中保温。
4.保温15~20min后轻轻混匀。
取细胞液一滴制成临时制片,并加入少量Giemsa染色,用牙签混匀,3min后,显微镜下观察细胞融合情况。
(注意:
1.细胞液不能多2.显微镜观察只用40×观察)
结果1.在显微镜下,观察细胞融合情况,计算融合率。
2.融合率=视野内发生融合的细胞核总数/视野内所有细胞核总数×100%
注意事项1.影响细胞融合的因素很多,其中对PEG要求更严格。
实验时最好选
择分子量在1500~6000(视细胞种类不同来定,也可参考文献);PEG的浓度
以50%为好。
2.细胞融合对温度很敏感,过高过低的温度均不利于融合。
实验最佳温度
应控制在37℃~39℃范围内。
3.PH也是影响细胞融合成功与否的关键因素之一。
所配的试剂溶液PH值
应控制在7.0~7.2。
4.为了便于观察到细胞融合的形态,需要对细胞进行染色。
除Janusgreen
染液外,也可选择HE染色或姬姆萨染液。
《细胞生物学实验》授课教案
课程
细胞生物学实验
班级
11级3、4、5班
学期
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2
教师
何飞
上课日期
课程类型
实验
课程名称
(章、节)
细胞生物学实验
实验六动物细胞培养
教学目的、要求
熟练掌握细胞的传代培养法。
教学重点
教学难点
主要教具
设备材料
药品:
培养基(RPMI1640或DMEM),小牛血清或胎牛血清,0.25%胰蛋白酶,Hanks液。
仪器:
C02培养箱,倒置:
显微镜,超净台。
思考题
课后记
教学内容
备注
实验原理:
传代培养是组织培养常规保种方法之一。
也是几乎所有细胞生物学实验的基础。
当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长。
这一过程就叫传代。
传代培养可获得大量细胞供实验所需。
传代要在严格的无菌条件下进行,每一步都需要认真仔细的无菌操作。
【实验步骤】
1.人无菌室之前用肥皂洗手,用75%酒精擦拭消毒双手。
2.倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
将培养用液置37℃下预热。
3.超净台台面应整洁,用0.1%新洁尔灭溶液擦净。
4.打开超净台的紫外灯照射台面20min左右,关闭超净台的紫外灯,打开抽风机清洁空气,除去臭氧。
5.点燃酒精灯;取出无菌试管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。
6.将培养用液瓶口用75%酒精消毒,过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
7.倒掉培养细胞的旧培养基。
酌情可用2—3mLHanks液洗去残留的旧培养基,或用少量胰酶涮洗一下。
8.每个大培养瓶加入1mL胰酶,小瓶用量酌减,盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察,当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶,使细胞脱离胰酶,然后将胰酶倒掉。
注意勿使细胞提早脱落入消化液中。
9.加入少量的含血清的新鲜培养基,反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散,再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7~10mL/大瓶,3~5mL/小瓶)制成细胞悬液,然后分装到新培养瓶中。
盖上瓶盖,适度拧紧后再稍回转,以利于CO2气体的进入,将培养瓶放回CO2培养箱。
10.对悬浮培养细胞,步骤7-9不做。
可将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清,加入新鲜培养基,然后分装到各瓶中。
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课程
细胞生物学实验
班级
11级3、4、5班
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上课日期
课程类型
实验
课程名称
(章、节)
细胞生物学实验
实验七细胞膜通透性的观察和细胞活力测定
教学目的、要求
1、观察红细胞的溶血现象;
2、掌握细胞膜的选择通透性原理。
3、学习台盼蓝排斥实验的原理和方法
教学重点
台盼蓝排斥实验的原理和方法
教学难点
主要教具
设备材料
器材:
试管,试管架
试剂:
血红细胞、0.32M葡萄糖、0.17M硝酸银、0.32M甘油、0.32M硫酸钠、0.32M乙醇、0.17M草酸胺、0.4%台盼蓝染液
思考题
课后记
教学内容
备注
一、
1.观察10%的血红细胞悬液,可见该悬液为一种不透明的红色液体
2.观察溶血现象取一支试管,加入0.4ml血红细胞悬液,再加入4ml蒸馏水,混匀后注意观察溶液颜色的变化,可见溶液由不透明的红色变成透明的红色液体(可将试管贴靠在书上,隔着试管看书中的字,如发现溶血则文字可被看清)。
3.观察血红细胞对不同物质的通透性
二、
1.将待染色细胞稀释至所需浓度。
(方法及浓度范围与细胞计数相同)
2.每0.1ml细胞悬液约加新鲜配置的染液一小滴,室温下染3~5min。
3.染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放在高倍镜下观察。
4.死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽;活细胞不着色并保持正常形态,有光泽。
计数100~200个白细胞。
统计未染色细胞。
可按公式计算出细胞活力。
细胞活力(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100
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班级
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实验
课
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- 关 键 词:
- 细胞生物学 实验 教案