TLC常用试剂配制及显色方法.docx
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TLC常用试剂配制及显色方法
常用试剂配制及显色方法
(一)通用显色剂
1.重铬酸钾——硫酸
一般有机物均能显色,不同化合物显示不同颜色。
喷洒剂:
5克重铬酸钾溶于100ml,40%硫酸中。
喷洒后加热至150oC斑点出现。
2.碘:
检查一般有机物
(1)碘蒸汽:
在一个密闭玻璃皿先放入碘片,使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色,有时在缸内放一盛水的小杯,增加缸内的湿度,可提高显色的灵敏度。
(2)0.5%碘的氯仿溶液,取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液,斑点转成蓝色。
3.碘——碘化钾溶液:
很我有机物虽黄色(配法见后)。
4.5%——磷钼酸乙醇溶液:
喷后120oC烤,还原性物质显兰色,再用氨气熏,则背景变为无色。
5.20%磷酸乙醇溶液:
喷后120oC,还原性物质显兰色。
6.碱性高锰酸钾试剂:
还原性物质在淡红背景上显黄色。
溶液I:
1%高锰酸钾溶液。
溶液II:
5%碳酸钠溶液。
溶液I和溶液II等量混合使用。
7.中性0.05%高锰酸钾溶液:
易还原性物质在淡红背景上显黄色。
8.硝酸银——氢氧化铵(Tollen’s--zoffaronl)试剂,喷后105oC烤5~10分钟,还原性物质显黑色。
溶液I:
0.1N硝酸银溶液。
溶液II:
氢氧化铵溶液。
临用前溶液I和溶液II以1:
5混合。
注意:
放久则形成爆炸性的叠氦化银。
9.硝酸银——高锰酸钾试剂:
还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。
溶液I:
0.1N硝酸银溶液:
2N氢氧化铵溶液:
2N氢氧化钠(1:
1:
2)。
临用前配制。
溶液II:
高锰酸钾0.5g,碳酸钠1g,加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。
10.四唑试剂:
还原性物质,在室温或微加热时显紫色。
溶液I:
0.5%四唑兰甲醇溶液。
溶液II:
6N氢氧化钠溶液。
临用前溶液I和溶液II等量混合。
11.铁氰化钾:
三氯化铁试剂:
还原性物质显兰色,再喷射2N/L盐酸溶液,则兰色加深。
溶液I:
1%铁氰化钾溶液。
溶液II:
2%三氯化铁溶液。
临用前溶液I和溶液II等量混合。
12.浓硫酸:
甲醇(1:
1)溶液,或5%硫酸的乙醇溶液,喷后100oC烤15分钟,各种不同物质显不同颜色。
13.萤光显色剂溶液:
试喷以下一溶液,不同的物质财富在萤光背景上可能显黑色或其他萤光斑点。
A:
0.2%2.7——二氯萤光素乙醇溶液。
B:
0.01萤光素乙醇液
C:
0.1%桑色素乙醇溶液
D:
0.05罗丹明B乙醇溶液
E:
萤光素一溴,检不饱和化合物。
(1)0.1%萤光素乙醇溶液
(2)5%溴的CCL4溶液。
喷洒
(1)以后,放置
(2)溶液的缸内,可在UV光下检查萤光,萤光素与溴化合成曙红(ensln)(无萤光),而光饱和化合物则与溴加成,保留了原来的萤光;若点样量较多,则成黄色斑点,底板成红色。
14.碱式醋酸铅试剂(可做喷洒或沉淀试剂,多种有机化合物均反应)。
取Pbo14g置乳钵内,加蒸馏水10ml,研后成糊状后,倾入玻璃瓶中,乳钵用10ml蒸馏水洗净,洗液并入瓶中,加醋酸铅溶液(取醋酸铅22g,加蒸馏水70ml制成)70ml,用力振摇,放置七天,滤过,并自滤器中添加适量新沸过的冷蒸馏水使成100ml即得。
(二)生物碱显色剂
通用显色剂:
1.改良碘化铋钾(Dragendorff)试剂:
生物碱和某些含氯化合物显橙红色。
溶液I:
碱式硝酸铋0.85g,溶于冰乙酸10ml和40ml.
溶液II:
碘化钾0.8g溶于水20ml.
储存液:
溶液I和溶液II等量混合(置棕色瓶中杨以长期保存)。
显色剂:
储存1ml与冰乙酸2ml和水70ml混合,用前配制。
2.碘化铂钾(碘铂酸)试剂,不同的生物碱显不同的颜色。
10%六氯化铂酸溶液3ml和水97ml混合,加6%碘化钾溶液100ml,混合均匀,临用前配制。
3.碘—碘化钾(Wagner)试剂:
生物碱显棕褐色。
碘1g和碘化钾10g溶于50ml水中,加热,加冰醋酸2ml用水稀释到100ml。
4.改良碘化铋钾:
碘,碘化钾(1:
1)试剂;生物碱显紫棕色或灰黑色。
5.硫酸铈——硫酸试剂(改良sonnensclein试剂):
喷后110oC烤几分钟,不同的生物碱显不同的颜色。
硫酸铈0.1g悬浮于水4ml中,加三氯化乙酸1g,加热煮沸,放冷,逐滴加入浓硫酸直到混浊消失为止。
6.碘化氯钾(vmayer)试剂(沉淀试剂):
取HgCL2(毒)1.35g加蒸馏水60ml溶解后,量取碘化钾5g,加碘馏水10ml使溶解将两液混合,加蒸馏水稀释使成100ml即得。
7.硅钨酸(Bertrand)试剂(沉淀试剂):
5g硅钨酸溶于100ml蒸馏水中,加稀盐酸使呈酸性反应即得。
(三)强心苷显色剂
1.碱性3.5——二硝基苯甲酸试剂:
强心苷显紫红色、几分钟后褪色。
2%3.5——二硝基苯甲酸甲醇溶液与2N氢氧化钾溶液,用前按劳1:
1混合。
2.碱性三硝基苯:
在浅橙色背景上显橙红色。
溶液I:
间三硝基苯100mg。
溶于二甲基甲酰胺40ml,加浓HCL3~4滴,加水至100ml,避光能长期保存。
溶液II:
5%碳酸风溶液
先喷溶液I,再喷溶液II,喷后90~103.0oC烤5分钟。
3.三氯乙酸试剂:
喷后110oC烤7~10分钟,紫外光下观察萤光。
试剂I:
25%三氯乙酸的乙醇或氯仿溶液,配制后可放置数日。
或用试剂II:
上述乙醇溶液用前每10ml加过氧化氢溶液4滴或新配3%氯铵T水溶液按4:
1混合。
4.三氯化锑试剂:
喷后100oC烤5分钟,日光下或紫外光下观察。
25%或饱和的三氯化锑氯仿溶液。
5.磷酸——溴试剂
溶液I:
10%磷酸溶液。
溶液II:
溴化钾饱和溶液:
25%盐酸溶液(1:
1:
1)。
薄层用溶液I喷洒后,在125oC烤12分钟(薄层太湿时则烤的时间可适当延长),在紫外光下观察一次,将薄层再烤热,趁热喷溶液II,再在紫外光下观察。
6.Keller——Kllianl试剂:
(检查α——去氧糖)
试液:
100ml冰HAC和FeCL3试液0.5ml混匀,试样1ml混匀。
试样1ml加试液2ml溶解后,沿试管壁滴入浓硫酸2接触面即显棕色。
渐变浅绿,兰色。
最后HAC层全部染成兰色。
(四)黄酮苷显色剂
黄酮类成份在紫外光下大多显出不同颜色,用氨熏,喷三氯化铝溶液或喷氢氧化钠等碱性溶液,则颜色变深或变色。
1.氨气
2.10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液。
3.1%或5%碳酸钠溶液。
4.1%或5%三氯化铝乙醇溶液。
5.2%乙酸镁甲醇溶液。
6.饱和三氯化锑的氯仿溶液,100oC烤5分钟。
以上六种试剂在喷前喷后将薄层置日光与紫外光下观察。
7.1~2%三氯化铁乙醇溶液。
8.1%中性乙酸铅或碱式乙酸铅溶液。
9.0.1N硝酸银溶液。
10.铁氰色钾——三氯化铁试剂。
溶液I:
2%铁氰化钾溶液。
溶液II:
2%三氯化铁溶液。
临用前溶液I与溶液II等量混合。
11.硼氢化钾试剂:
双氢黄酮化合物显红、橙红色。
溶液I:
1~2%硼氢化钾(钠)异丙醇溶液,必须新鲜配制。
溶液II:
浓盐酸
先喷I、5分钟后放入盐酸蒸气槽内。
12.Shinoda试剂:
在混有锌粉的硅胶薄层上喷盐酸,黄酮醇显红紫色。
制备硅胶薄层时,加入2%w/w锌粉混合,薄层展开后盐酸溶液,如展开剂为酸性,可在展开后先喷锌——丙酮混悬液,再喷盐酸溶液。
罗丹明——氨试剂。
溶液I:
0.1%罗丹明B的4%盐酸溶液。
溶液II:
浓氨溶液。
先喷溶液I,然后再将薄层放入氨汽槽内。
14.对氨基苯磺酸试剂。
溶液I:
对氨基苯磺酸盐溶液。
溶液II:
5%亚硝酸钠溶液。
将对氨基苯磺酸0.3g溶液对8%盐酸溶液100ml中,到紫溶液25ml用冰冷却,加预冷的溶液II1.5ml。
15.硼酸——柠檬酸试剂
溶液I:
饱和硼酸的丙酮溶液。
溶液II:
柠檬酸丙酮溶液。
先喷溶液I,再喷溶液II。
16.福林试剂(FolinCiocalteu试剂)
钨酸钠10g和钼酸钠2.5g溶于70ml水中,再缓缓加85%磷酸5ml和浓盐酸10ml,将混合液回流煮沸10小时,然后加硫酸锂15g,水5ml及溴1滴,再回去流煮沸15分钟,所得溶液冷却后移置100ml溶量瓶中并用水稀释到刻度(贮备液),溶液应不显绿色。
溶液I:
20%碳酸钠溶液。
溶液II:
临用前上述贮备液1份用水三分稀释。
先喷溶液I,稍干再喷溶液II。
(五)皂苷灶显色剂
1.25%磷钼酸乙醇溶液:
喷后在140oC加热5~10分钟皂苷元均呈深兰色。
2.三氯化锑浓盐酸或氯仿溶液:
喷后在90oC烤10分钟(应在通风厨中进行),不同的皂苷元在可见光或紫外光下显出各种颜色。
3.硫酸:
甲醇(1:
2)溶液,喷后加热,不同的皂苷元可显红褐色、紫色、黄色或黑色,所显颜色与温度无关。
4.氟磺酸:
乙酸(1:
1)溶液,喷后130oC加热5分钟。
各种皂苷元可显天兰紫、粉红、淡棕等色,在紫外光下也显不同萤光。
5.碘蒸汽:
薄层置于碘蒸汽筒中,皂苷无皆显棕黄色斑点。
6.三氯快乙酸或三氯乙酸:
乙酸(1:
2)溶液,喷后在100oC加热20分钟皆显黄色。
7.2%血球生理盐水混悬液(溶血试验、检皂苷)。
取新鲜兔血(由心脏或静脉取血)适量,用洁净小毛刷迅速搅拌除去纤维蛋白,并用生理盐水反复离心洗涤至上清液无色后,量取沉降红血球(可以管的离心管通接读取)用生理盐水配成2%混悬液贮冰箱内备用(贮存期2~3天)。
(六)蒽醌苷显色剂
蒽醌及其苷本身在日光下显黄色,在紫外光下则显黄,红橙色萤光。
在薄层上用氨熏或喷氢氧化钾与碱溶液,则颜色变深或变色。
1.氨气
2.10%氢氧化钾、甲醇溶液。
3.3%氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。
4.50%哌啶的苯溶液。
5.饱和喷酸锂溶液。
6.饱和硼砂溶液。
7.0.5%乙酸镁甲醇溶液:
喷后90oC烤5分钟。
8.0.5%乙酸铝溶液,喷后紫外光下看萤光。
9.0.5%牢固兰B试剂,喷后则原来氢氧化钠、锂、钾等溶液碱溶液显萤光的斑点此时在可见光下显棕、紫或绿色。
也可先喷本试剂,再喷稀氢氧化钠溶液而显色。
也用于酚类及能偶芳香胺的显色。
溶液I:
新配的0.5%牢固兰B盐的水溶液。
溶液II:
0.1N/L氢氧化钠溶液。
先喷溶液I,喷溶液II。
(七)香豆精苷显色剂
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