工艺研究原始记录doc.docx

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工艺研究原始记录doc

工艺研究的试验资料

灯盏细辛的提取工艺条件筛选

一、试验方法：

⑴实验方法

称取灯盏细辛200g，破碎或未破碎，加入一定量的80%乙醇回流提取2次，每次一定时间。

回流提取后放出药液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmI左右，供含量测定用。

（每1ml含2g灯盏细辛药材）。

⑵总黄酮含量的测定

吸取样品液1ml，置250ml量瓶中，用6O%乙醇稀释至刻度，滤过，精密吸取续滤液0.2ml置10ml量瓶中，用6O%乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

精密称取干燥的灯盏细辛宾对照品，置100ml容量瓶中，加6O%乙醇制成每1ml中含灯盏细辛宾0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

按照《中国药典》（2000年版一部附录ⅤA）分光光度法，在波长288nm波长处分别测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度，计算样品中总黄酮的含量。

总黄酮类化合物的含量=A样×C标×V总/A标/M。

⑶破碎及未破碎的总黄酮含量考察

1、试验方法与结果

试验1：

称取破碎灯盏细辛200g，用80%乙醇加热回流2次，每次加入5倍量的乙醇，回流2小时；合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

8:

30

5

9:

10

11:

10

13:

35

16:

20

第2次

11:

50

5

12:

15

标准品溶液浓度:

C标=0.101mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

0.3257；供试品吸收度（A样）：

0.3442

含量（mg/g）：

66.719

试验2：

称取未破碎灯盏细辛200g，用80%乙醇加热回流2次，每次加入5倍量的乙醇，回流2小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

结果：

未破碎的灯盏细辛比破碎后的灯盏细辛含量偏高，故选择未破碎的灯盏细辛种子做为研究对象。

⑷因素水平表

水平

因素

加醇量（A）

回流时间（B）

醇浓度（C）%

1

3倍量，2倍量

2小时，1小时

90

2

5倍量，4倍量

1.5小时，1小时

85

3

7倍量，6倍量

1小时，0.5小时

65

表2.正交试验方案与结果表

试验号

因素

A

B

C

D（空白）

实验1

1（3，2倍量）

1（2，1h）

1（90％）

1

实验2

1

2（1.5，1h）

2（85％）

2

实验3

1

3（1，0.5h）

3（80％）

3

实验4

2（5，4倍量）

1

2

3

实验5

2

2

3

1

实验6

2

3

1

2

实验7

3（7，6倍量）

1

3

2

实验8

3

2

1

3

实验9

3

3

2

1

二、试验过程：

1、试验方法与结果

试验1：

称取灯盏细辛200g，用90%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验2：

称取灯盏细辛200g，用90%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验3：

称取灯盏细辛200g，用90%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验4：

称取灯盏细辛200g，用85%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验5：

称取灯盏细辛200g，用85%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验6：

称取灯盏细辛200g，用85%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验7：

称取灯盏细辛200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验8：

称取灯盏细辛200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验9：

称取灯盏细辛200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

四、试验复核

1、试验方法与含量测定结果

复核试验1：

称取灯盏细辛500g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至25OmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

复核试验2：

称取灯盏细辛500g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至25OmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

复核试验3：

称取灯盏细辛500g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至25OmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

2、浸膏得率的计算

精密吸取样品液50ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，按照《中国药典》（2000年版一部附录ⅨG）干燥失重测定法测定重量，计算浸膏得率。

浸膏得率=浸膏重量×（250ml/50ml）/投料量×100%

试验号

蒸发皿重量

蒸发皿重量+浸膏重量

浸膏重量

浸膏得率

复核试验一

复核试验二

复核试验三

五味子的提取工艺条件筛选

一、试验方法：

⑴实验方法

称取五味子200g，加入一定量的80%乙醇回流提取2次，每次一定时间。

回流提取后放出药液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmI左右，供含量测定用。

（每1ml含2g五味子药材）。

⑵总黄酮含量的测定

吸取样品液1ml，置250ml量瓶中，用6O%乙醇稀释至刻度，滤过，精密吸取续滤液0.2ml置10ml量瓶中，用6O%乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

精密称取干燥的野黄芩苷对照品，置100ml容量瓶中，加6O%乙醇制成每1ml中含野黄芩苷0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

取上述两种溶液各5ml，分别精密加入亚硝酸钠溶液（1→2O）O.3ml，摇匀。

放置6min，加硝酸铝溶液（1→1O）0.3m1，摇匀。

再放置6min，加氢氧化钠试液4m1，分别用水稀释至刻度，摇匀。

放置15min。

按照《中国药典》（2000年版一部附录ⅤA）分光光度法，在波长288nm波长处分别测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度，计算样品中总黄酮的含量。

总黄酮类化合物的含量=A样×C标×V总/A标/M。

⑶因素水平表

水平

因素

加醇量（A）

回流时间（B）

活性炭用量（C）%

1

12倍量，8倍量

2小时，1小时

2

2

10倍量，6倍量

1.5小时，1小时

3

3

8倍量，5倍量

1小时，0.5小时

4

表2.正交试验方案与结果表

试验号

因素

A

B

C

D（空白）

实验1

1（12，8倍量）

1（2，1h）

1（2％）

1

实验2

1

2（1.5，1h）

2（3％）

2

实验3

1

3（1，0.5h）

3（4％）

3

实验4

2（10，6倍量）

1

2

3

实验5

2

2

3

1

实验6

2

3

1

2

实验7

3（8，5倍量）

1

3

2

实验8

3

2

1

3

实验9

3

3

2

1

二、试验过程：

1、试验方法与结果

试验1：

称取五味子200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验2：

称取五味子200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验3：

称取五味子200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验4：

称取五味子200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验5：

称取五味子200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验6：

称取五味子200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验7：

称取五味子200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验8：

称取五味子200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

试验9：

称取五味子200g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

四、试验复核

1、试验方法与含量测定结果

复核试验1：

称取五味子500g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至25OmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

复核试验2：

称取五味子500g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至25OmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

复核试验3：

称取五味子500g，用80%乙醇加热回流2次，第一次加入倍量的乙醇，回流小时；第二次加入倍量的乙醇，回流小时，合并提取液，滤过，滤液合并，浓缩至25OmL左右，供含量测定用。

提取次数

开始时间

加醇量

煎煮

开始时间

煎煮

结束时间

浓缩过程

开始时间

浓缩过程

结束时间

第1次

第2次

标准品溶液浓度:

C标=mg/ml；

标准品吸收度（A标）:

；供试品吸收度（A样）：

含量（mg/g）：

2、浸膏得率的计算

精密吸取样品液50ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，按照《中国药典》（2000年版一部附录ⅨG）干燥失重测定法测定重量，计算浸膏得率。

浸膏得率=浸膏重量×（250ml/50ml）/投料量×100%

试验号

蒸发皿重量

蒸发皿重量+浸膏重量

浸膏重量

浸膏得率

复核试验一

复核试验二

复核试验三

五味子的喷雾干燥工艺条件筛选

一、试验方法：

⑴实验方法

称取五味子膏200g，喷雾干燥，每次一定时间。

回流喷雾干燥后放出药液，滤过，滤液合并，浓缩至lOOmI左右，供含量测定用。

（每1ml含2g五味子药材）。

⑵总黄酮含量的测定

吸取样品液1ml，置250ml量瓶中，用6O%乙醇稀释至刻度，滤过，精密吸取续滤液0.2ml置10ml量瓶中，用6O%乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

精密称取干燥的野黄芩苷对照品，置100ml容量瓶中，加6O%乙醇制成每1ml中含野黄芩苷0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

取上述两种溶液各5ml，分别精密加入亚硝酸钠溶液（1→2O）O.3ml，摇匀。

放置6min，加硝酸铝溶液（1→1O）0.3m1，摇匀。

再放置6min，加氢氧化钠试液4m1，分别用水稀释至刻度，摇匀。

放置15min。

按照《中国药典》（2000年版一部附录ⅤA）分光光度法，在波长288nm波长处分别测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度，计算样品中总黄酮的含量。

总黄酮类化合物的含量=A样×C标×V总/A标/M。

⑶因素水平表

水平

因素

加醇量（A）

回流时间（B）

活性炭用量（C）%

1

12倍量，8倍量

2小时，1小时

2

2

10倍量，6倍量

1.5小时，1小时

3

3

8倍量，5倍量

1小时，0.5小时

4

表2.正交试验方案与结果表

试验号

因素

A

B

C

D（空白）

实验1

1（12，8倍量）

1（2，1h）

1（2％）

1

实验2

1

2（1.5，1h）

2（3％）

2