黄靖修改稿.docx
- 文档编号:23645922
- 上传时间:2023-05-19
- 格式:DOCX
- 页数:20
- 大小:40.96KB
黄靖修改稿.docx
《黄靖修改稿.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《黄靖修改稿.docx(20页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
黄靖修改稿
学生毕业设计(论文)
课题名称
黑毛茶提取物对金花菌生长影响研究
姓名
黄靖
学号
0808402-23
院系
化学与环境工程学院
专业
生物工程
指导教师
库文珍讲师
2012年5月28日
湖南城市学院本科毕业设计(论文)诚信声明
本人郑重声明:
所呈交的本科毕业设计(论文),是本人在指导老师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果,成果不存在知识产权争议,除文中已经注明引用的内容外,本设计(论文)不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。
对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明。
本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。
本科毕业设计(论文)作者签名:
二○一二年五月二十八日
目录
摘要1
关键词1
Abstract:
1
Keywords:
1
1绪论2
1.1研究意义2
1.1.1学术价值2
1.1.2实践意义2
1.2国内外研究现状3
1.3研究目的4
2实验材料与方法4
2.1材料4
2.1.1实验材料4
2.1.2试剂4
2.1.3仪器4
2.1.4培养基4
2.2实验方法4
2.2.1孢子悬液的制备4
2.2.2提取物A的制备5
2.2.3提取物B的制备5
2.2.4提取物C的制备5
2.2.5提取物D的制备5
2.2.6提取物E的制备5
2.2.7仪器、培养基的灭菌条件5
2.2.8金花菌培养条件6
3结果与分析6
3.1提取物A的测定及影响6
3.1.1提取物A的测定结果6
3.1.2提取物A对金花菌固体平板培养的影响结果6
3.1.3提取物A对金花菌液体培养的影响7
3.1.4提取物A对金花菌实验室模拟发花的影响8
3.2提取物B的影响9
3.2.1提取物B对金花菌液体培养的影响9
3.2.2提取物B对金花菌实验室模拟发花的影响9
3.3提取物C的影响10
3.3.1提取物C对金花菌液体培养的影响10
3.3.2提取物C对金花菌实验室模拟发花的影响11
3.4提取物D的影响11
3.4.1提取物D对金花菌液体培养的影响11
3.4.2提取物D对金花菌实验室模拟发花的影响12
3.5提取物E的影响13
3.5.1提取物E对金花菌液体培养的影响13
3.5.2提取物E对金花菌实验室模拟发花的影响13
4结论与展望14
4.1结论14
4.2展望14
参考文献:
15
致谢:
16
黑毛茶提取物对金花菌生长影响研究
黄靖
(湖南城市学院化学与环境工程学院2012届生物工程专业)
摘要:
以黑毛茶为原料,研究不同的浸提方法得到的浸提物及其不同组合、提取物浓度对金花菌生长的影响。
金花菌在最适条件下,用高糖察氏培养基震荡培养。
结果表明,各种黑毛茶提取,主要成分分别为:
茶多酚(A)、茶多酚(B)、茶多糖(D)、茶色素(E)均对金花菌的生长有促进作用;咖啡碱(C)有抑制作用。
关键词:
黑毛茶;浓度;促进
BlackMaoChagoldflowerextractonbacterialgrowthimpactstudy
HuangJing
(2012YearStudentofBiologicalEngineeringMajor,HunanCityUniversity)
Abstract:
totheblackMaoChaasrawmaterials,differentwaystogetsoaksraisesthebaptismofextractingsandtheircombination,extractconcentrationontheinfluenceofthegoldflowerbacterialgrowth.Goldflowerbacteriaintheoptimumcondition,withhighsugar'scultureshockwastraining.TheresultsshowthatallkindsofblackMaoChaextraction,themaincomponentsare:
theteapolyphenol(A),teapolyphenol(B),teapolysaccharide(D),teapigment(E)ofthegrowthofbacteriaaregoldflowertopromotetherole;Caffeine(C)havetheinhibition.
Keywords:
blackMaoCha;Goldflowerbacteria;growth
1绪论
1.1研究意义
1.1.1学术价值
益阳是闻名全国的茶乡,史料记载已有1000多年种茶历史。
益阳茶叶贸易历史悠久。
唐代中叶,益阳安化生产的“渠江薄片”远销湖北。
十六世纪末,益阳黑茶远销西北少数民族地区。
明嘉靖年间,资江下游出现了商埠重镇东坪和黄沙坪,它们与乔口和黄沙坪对岸的酉州一起,以茶叶为发端,成为丝绸之路的茶马古道在南方的重要起点。
清代集黑茶生产工艺之大成而问世的“千两茶”,被近代人誉为“世界茶王”。
现今故宫仅存的一支“千两茶”已成为无价之宝。
清末,安化茶叶名驰天下,茶叶产业盛况空前。
目前,尚有百年历史的茶行、茶亭、茶书、茶钟、茶马古道驿站、茶具、茶歌、茶谣、茶俗存在于民间。
新中国成立后,益阳茶叶贸易伴随茶叶生产的高速发展,茶市兴旺,贸易剧增。
益阳黑茶远销西北,出口中亚。
近年益阳茶厂生产的湘益高级茯砖茶,具有降血压、降血糖、降血脂、调理肠胃、消炎、防辐射等独特功效,在边疆地区流传着“喝酒要喝伊利特,喝茶要喝益阳茶”之风。
九十年代后,益阳茶叶产业因种种原因出现滑坡,茶园面积缩减,茶叶产销下降,茶叶作为益阳五大农副产品之一,其地位受到极大冲击。
近年来,黑茶逐渐成为消费者追逐的对象,其原因不外乎黑茶的品质和功效;关于黑茶各个方面的研究报告也越来越多。
很多研究证明金花菌在茶叶上生长是十分茂盛的,其机理却是非常的不明确,而金花菌是衡量茯砖茶品质优劣一个及其重要的标准。
尽管,关于黑茶各个方面的研究很多,但文献检索证明,目前国内外同类项目中研究黑茶中化学成分对金花菌生长影响的仍然处于空白状态。
而本课题为《黑毛茶提取物对金花菌生长影响研究》,该研究将致力于解决该问题,并初步对其机理做一定的阐述。
本课题研究的重点是针对黑茶生产流程中的发花工艺进行工艺改造,通过实验探索出一种快速、发花多、金花颗粒饱满的发花工艺,为提高黑茶品质提供可行性方案。
1.1.2实践意义
黑茶属于后发酵茶,其独特的加工过程,尤其是微生物的参与使其具有特殊的中医药理功效,其富含茶多糖类化合物被医学界认为可以调节体内糖代谢(防止糖尿病)、降血脂、血压、抗血凝、血栓、提高机体免疫力。
临床试验证明,黑茶之特殊功效显著,是其他茶类不可替代的。
金花菌是衡量黑茶优劣的一个重要标准,其关键在于黑茶中所含金花菌的质量和数量。
本课题研究的问题是黑毛茶对金花菌生长的影响,通过实验探究,我们已初步探索出黑毛茶提取物对金花菌生长的影响的关系。
而针对黑茶生产工艺中发花前有一道添加成分不明的黑茶茶汁的工艺环节,本次试验通过模拟黑茶发花工艺,把原生产工艺中添加的黑茶茶汁改成实验中具有促进作用的化学物质,并按梯度浓度添加具有促进作用的成分进行比较(设空白对照组)。
然后进行发花工艺的模拟。
实验证明试验方案对提高黑茶的品质是可行的。
因此,从根本上改善黑茶的品质,加大黑茶的市场占有率,扩大黑茶市场,改善人民生活水平,为社会造福是可行的。
1.2国内外研究现状
目前,关于与黑茶有关的研究项目已经很多。
从1981年仓道平等人鉴定认为优势菌是灰绿曲霉群中的谢瓦氏曲霉(Aspergilluschevalieri);到齐祖同的《茯砖茶中优势菌种的鉴定》中提出冠突散囊菌产生黄色闭囊壳,它是茯砖茶发酵过程中的有益菌……文献检索证明:
茯砖茶中金花菌对其发酵过程中茯砖茶中的茶多酚、茶氨酸、茶多糖、茶色素、咖啡碱、儿茶素、黄酮等各种物质的形成、转化及其消耗等相关的研究已经多如牛毛。
研究发现茯砖茶中各种物质的转变与其中金花菌参与生产过程中的发酵有非常大的直接联系。
而且,通过查阅文献,发现茯砖茶或黑茶与金花菌相关性的研究,在国内外已经处于相对成熟阶段,基本探索出了其内在机理及其产生原因。
同时,金花菌的功效研究同样处于相对非常成熟的阶段。
例如:
邓放明从“金花菌”液体发酵液中提取出胞外多糖ECP和ECP#,利用核受体活化后能激活下游基因转录的原理,选用与肥胖和血脂代谢相关的PPARα、PPARδ、PPARγ3种模型进行高通量筛选,研究结果为金花菌孢外多糖对这3种模型均有活性,且对PPARγ的活性最强。
其实验说明“金花菌”可以通过多条途径产生降脂作用。
又如:
杨抚林采用体外模拟人体胃液和肠液环境条件,研究结果表明,“金花菌”发酵液比茯砖茶更能提高淀粉酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶活性,证明“金花菌”的发酵液具有调理人体胃肠消化的功能。
另外,金花菌能作用黑茶,改变黑茶中活性成分的改变,间接对黑茶九大功效起到促进作用。
由以上可以看出,虽然金花菌对黑茶形成的影响等类似的研究很多,但对于黑毛茶提取物对金花菌生长影响的研究仍然还处于空白状态。
而且金花菌的质量和数量是衡量黑茶品质优劣及其重要的标准。
本课题为《黑毛茶提取物对金花菌生长影响研究》,该课题的研究重点是研究黑毛茶提取物对金花菌生长的影响问题。
这将是一次全新的探索,一次对黑毛茶提取物对金花菌生长影响的探索。
1.3研究目的
由于国内外对黑茶及其相关的研究已经相当广泛,但黑毛茶对金花菌生长影响的研究还处于相对空白阶段。
本课题将以微生物培养的方法培养优势金花菌,研究黑毛茶提取物对其生长的影响,并判各种黑毛茶提取物对金花菌生长起促进或抑制作用;模拟黑茶发花工艺,把原生产工艺中添加的黑茶茶汁改成实验中具有促进作用的黑毛茶提取物,并按梯度浓度添加具有促进作用的成分进行比较(设空白对照组)。
然后模拟发花工艺进行探究性实验。
2实验材料与方法
2.1材料
2.1.1实验材料
实验采用的是茯砖茶的原料黑毛散茶,为实验室所购买。
2.1.2试剂
无水乙醇、琼脂粉、蔗糖、查氏培养基试剂、PDA培养基试剂、氯仿、乙酸乙酯、邻二氮菲等均为分析纯。
2.1.3仪器
FC104型电子天平;LDZX-75KBS立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂);超净工作台(苏州华宏);LRH-250A型生化培养箱(广东省医疗器械厂);FN101-2A型鼓风干燥箱(长沙仪器仪表厂);DK-98-ⅡA电热恒温水浴锅;真空抽滤泵;PJ230-AN美的微波炉;离心机;常见玻璃仪器等。
2.1.4培养基
基础培养基(查氏培养基):
NaNO3:
2g/L;K2HPO4:
1g/L;KCl:
0.5g/L;MgSO4•7H2O:
0.5;FeSO4•7H2O:
0.0100g/L;蔗糖:
30~80g/L;(琼脂:
30g/L);自然pH。
PDA培养基:
土豆:
80g/L;蔗糖:
6g/L;自然pH。
2.2实验方法
2.2.1孢子悬液的制备
首先选取优势金花菌作为实验用的菌种。
配制高糖PDA液体培养基,并经过严格的灭菌处理。
在无菌超净工作台上,将优势金花菌种接种到无菌的PDA液体培养基中扩到培养。
放置在最适条件下培养大约一周,直至金花菌基本覆盖培养基表面即可。
将上述金花菌放置在摇床中,100r/min振摇30min,制成孢子悬液(若孢子悬液浓度过高,可在无菌超净工作台上添加无菌水稀释)。
2.2.2提取物A的制备
根据程慧青[1]等人的研究,以及本实验室实际实验条件。
称取1g茶叶粉末,加入9mL浓度为50%的。
放入美的微波炉中,用中火档微波加热60s后,静置冷却至室温。
在4000rad/min离心分离2min,得到上清液。
将沉淀按上述步骤重复一次,合并两次浸提液,混匀,得到提取液。
记作提取物A。
2.2.3提取物B的制备
根据姜爱莉[2]等人的研究,以及本实验室实际实验条件。
称取茶叶10g,将其加入预热到80℃的50%乙醇中,水浴恒温浸提20min,连续浸提两次。
合并两次浸提液,减压浓缩。
将浓缩液先用氯仿萃取,料液比1:
1,萃取次数3次。
得到萃余相,即水相。
将水相再用乙酸乙酯萃取,料液比1:
1,萃取次数3次。
保留萃取相,即乙酸乙酯层。
回收溶剂,得到浓缩液。
将浓缩液真空干燥得到主要物质为茶多酚的提取物质。
记作提取物B。
2.2.4提取物C的制备
根据姜爱莉[2]等人的研究,以及本实验室实际实验条件。
方法同提取物B的提取方法。
将第一次萃取操作的氯仿层,回收溶剂,得到釜残,干燥后得到粗咖啡碱。
然后,再135-180℃条件下,升华得到咖啡碱晶体。
记作提取物C。
2.2.5提取物D的制备
根据崔志芳等人的研究,以及本实验室实际实验条件。
称取茶叶10g,加入蒸馏水30ml。
将其放入美的微波炉中,中火档微波加热10min后,静置冷却至室温。
向浸提液中加入25%乙醇,料液比2:
1,搅拌均匀。
最后以8000rad/min离心10min,弃去上清液,得到主要物质为茶多糖提取物。
记作提取物D。
2.2.6提取物E的制备
根据超临界CO2提取提纯物质的方法,以黑毛茶粉末为原料,在适当操作条件下进行萃取,获得主要物质为茶色素提取物。
记作提取物E。
2.2.7仪器、培养基的灭菌条件
一般情况下,采取湿热灭菌为主,紫外光灭菌为辅的方法对实验用仪器、培养基等实验用品进行彻底灭菌。
首先,将需要灭菌的物包好,放入高压灭菌锅中,在温度121℃高温下灭菌20min。
然后,将经过湿热灭菌的物品,集中放到无菌超净工作台上,紫外灯杀菌30min即可。
2.2.8金花菌培养条件
液体PDA培养基中,28℃恒温、60%恒湿培养。
3结果与分析
3.1提取物A的测定及影响
3.1.1提取物A的测定结果
利用茶多酚的一个苯环的邻位有2个羟基,具有还原性,可将Fe3+还原为Fe2+,而Fe2+可与邻二氮菲发生反应生成橘红色的络合物,该络合物在509nm出的摩尔吸收系数最大,从而可以通过测定该络合物的吸光度来间接测定样品中茶多酚的含量。
表1提取物A中茶多酚含量测定
编号
0
1
2
3
4
铁标样浓度/μg/mL
0
0.2
0.4
0.6
0.8
铁标样吸光度A
0.000
0.110
0.228
0.400
0.525
茶样溶液量/mL
0.00
0.15
0.25
0.35
-
茶样吸光度A
0.000
0.270
0.392
0.380
-
计算结果表明:
茶样中含茶多酚的量为0.103mol/L。
3.1.2提取物A对金花菌固体平板培养的影响结果
以查氏培养基为基础培养基,用固体培养法,分别向编号为1、2、3、4滴加3、6、10、15滴提取物A,分别向编号为1'、2'滴加5、10滴从茶厂取得的茶汁。
然后用自制涂布器,涂布均匀。
均统一放置到28℃恒温、60%恒湿培养箱中培养,并每日定时观察并记录。
以下是第三日,观察并记录菌落数,结果如下:
表2探索实验第一次观察结果及计算(第三日)
编号
0
1
2
3
4
提取物A的量/滴
0
3
6
10
15
菌落平均数
10
14.67
14.33
23.33
21.67
表2'探索实验第一次观察结果及计算(第三日)
编号
0
1'
2'
-
-
茶厂添加液量/滴
0
5
10
-
-
菌落平均数
10
均染杂菌
10
(含杂菌)
-
-
观察表明:
提取物A对金花菌在固体培养基中生长具有促进作用,且随添加量增加而促进作用增强;当达到添加的提取物A达到最适量后,促进作用随提取物A添加的量增加而减少。
茶厂茶汁对金花菌的生长不惧明显促进左右,且易感染杂菌。
说明提取物A具有较黑茶茶厂中的茶汁有明显促进作用的化合物。
以查氏培养基为基础培养基,用固体培养法,分别向编号为1、2、3、4滴加3、6、10、15滴提取物A,分别向编号为1'、2'滴加5、10滴从茶厂取得的茶汁。
然后用自制涂布器,涂布均匀。
均统一放置到28℃恒温、60%恒湿培养箱中培养,并每日定时观察并记录。
以下是第四日,观察并记录菌落数,结果如下:
表3探索实验第二次观察结果及计算(第四日)
编号
0
1
2
3
4
提取物A的量/滴
0
3
6
10
15
菌落平均数
26.67
25.67
65.33
59.33
51
表3'探索实验第二次观察结果及计算(第四日)
编号
0
1'
2'
-
-
茶厂添加液量/滴
0
5
10
-
-
菌落平均数
10
均染杂菌
51
(含杂菌)
-
-
再次观察结果表明:
上述结论是正确的。
其中从黑茶茶厂获得的茶汁对金花菌生长的促进作用开始显示出来。
这说明,提取物A先对黑茶茶厂的茶汁具有促进金花菌快速生长的作用。
3.1.3提取物A对金花菌液体培养的影响
以查氏培养基为基础培养基,采用液体培养法。
首先分别用100mL量筒向每个锥形瓶中准确加入统一配制的查氏培养基70mL。
然后,用2.0mL的移液管分别向编号0、1、2、3、4准确添加0、0.2、0.5、1.0、2.0mL提取物A。
充分摇匀之后,将其放入恒温恒湿振荡培养箱中120rad/min、28℃恒温恒湿培养。
每日定期对实验结果进行观察及记录。
两周后,将它们经真空抽滤机真空抽滤,获得金花菌饼。
最后将其放入真空烘干箱中100℃烘干。
充分烘干并冷却后,经分析天平称重,直至两次相差质量小于0.0005g为止,并记录好结果,如下:
表4提取物A对金花菌液体培养实验记录及计算
编号
0
1
2
3
4
提取物A的量/mL
0
0.2
0.5
1.0
2.0
滤纸/g
1
0.5363
0.5530
0.5282
0.5407
0.5403
2
0.5384
0.5617
0.5236
0.5329
0.5194
3
0.5560
-
0.5320
0.5498
0.5447
滤纸及菌重/g
1
0.5750
0.5906
0.6007
0.6123
0.6336
2
0.5774
0.5900
0.5833
0.5854
0.5683
3
0.5851
-
0.6245
0.6256
0.5950
差值/g
1
0.0387
0.0376
0.0725
0.0716
0.0933
2
0.0390
0.0283
0.0597
0.0525
0.0489
3
0.0191
-
0.0925
0.0758
0.0503
平均值/g
0.0322
0.0330
0.0749
0.0666
0.0642
实验表明:
通过分析和处理提取物A对金花菌液体培养实验,发现该实验结果能够进一步证明金花菌固体培养的实验结果。
且最适量约为。
这表明提取物A对金花菌的生长的确具有促进作用。
且在最适添加量以下,随添加量增加,提取物A对金花菌的生长的促进作用增加;反之,促进作用随提取物A的添加量增加而促进作用减弱。
3.1.4提取物A对金花菌实验室模拟发花的影响
3.2提取物B的影响
3.2.1提取物B对金花菌液体培养的影响
以查氏培养基为基础培养基,采用液体培养法。
首先分别用100mL量筒向每个锥形瓶中准确加入统一配制的查氏培养基70mL。
然后,分别向编号0、1、2、3准确添加1000μL无菌水、1000μL10-2、10-3、10-5提取物B。
将其放入恒温恒湿振荡培养箱中120rad/min、28℃恒温恒湿培养。
每日定期对实验结果进行观察及记录。
十天之后,将它们经真空抽滤泵真空抽滤,最后将其放入真空烘干箱中100℃烘干。
将它们经真空抽滤机真空抽滤,获得金花菌饼。
最后将其放入真空烘干箱中100℃烘干。
充分烘干并冷却后,经分析天平称重,直至两次相差质量小于0.0005g为止,并记录好结果,如下:
表5取物B对金花菌液体培养实验记录及计算
编号
0
1
2
3
浓度/g/mL
0
10-2
10-3
10-5
滤纸/g
1
0.5429
0.5407
0.5471
0.5440
2
0.5426
0.5379
0.5340
0.5449
3
0.5422
0.5434
0.5348
0.5412
滤纸及菌重/g
1
0.5652
0.5662
0.5727
0.5608
2
0.5532
0.5882
0.5747
0.5749
3
0.5718
0.5720
0.5724
0.5621
差值/g
1
0.0223
0.0255
0.0256
0.0168
2
0.0106
0.0503
0.0407
0.0300
3
0.0296
0.0286
0.0376
0.0209
平均值/g
0.0208
0.0338
0.0346
0.0225
实验表明:
通过分析和处理提取物B对金花菌液体培养实验结果,我们可以发现,提取物B对金花菌的生长的童颜是具有促进作用的,但似乎作用不是非常明显。
其最适量浓度大概是10-3。
在最适添加量以下,随添加量增加,提取物B对金花菌的生长的促进作用增加;反之,促进作用随提取物B的添加量增加而促进作用减弱。
3.2.2提取物B对金花菌实验室模拟发花的影响
3.3提取物C的影响
3.3.1提取物C对金花菌液体培养的影响
以液体查氏培养基为基础培养基,首先分别用100mL量筒向每个锥形瓶中准确加入统一配制的查氏培养基70mL。
然后,分别向编号0、1、2、3、准确添加1000μL无菌水、1000μL10-2、10-3、10-5提取物C。
将其放入恒温恒湿振荡培养箱中120rad/min、28℃恒温恒湿培养。
每日定期对实验结果进行观察及记录。
十天之后,将它们经真空抽滤泵真空抽滤,最后将其放入真空烘干箱中100℃烘干。
将它们经真空抽滤机真空抽滤,获得金花菌饼。
最后将其放入真空烘干箱中100℃烘干。
充分烘干并冷却后,经分析天平称重,直至两次相差质量小于0.0005g为止,并记录好结果,如下:
表6提取物C对金花菌液体培养实验记录及计算
编号
0
1
2
3
浓度/g/mL
0
10-2
10-3
10-5
滤纸/g
1
0.5416
0.5407
0.5492
0.5428
2
0.5462
0.5517
0.5567
0.5458
3
0.5538
0.5495
0.5459
0.5518
滤纸及菌重/g
1
0.5473
0.5520
0.5606
0.5545
2
0.5596
0.5596
0.5617
0.5698
3
0.5589
0.5520
0.5654
0.5589
差值/g
1
0.005
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 修改稿
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)