微生物实习报告汇总.docx
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微生物实习报告汇总.docx
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微生物实习报告汇总
实习报告
实习名称
食品微生物检验实习
系别
生物与化学工程系
年级专业
学生姓名
指导老师
王瑶琼、吴菲菲、黄大川
邵阳学院
2013年12月10日
一、实验时间与地点
时间:
2013年下学期第13--15周
地点:
邵阳学院李子园校区生物与化学工程系微生物实验室
二、实习过程概述
11.18下午在2栋教学楼204室举行动员大会
11.18至12.19查找资料并设计实验方案。
11.20上午提交实验方案并通过了,下午再去领实验器材,清洗实验器材,烘干,包扎。
11.21配制牛肉膏蛋白胨培养基,做无菌检查
11.22样品中细菌的检测进行十倍稀释、接种
11.23细菌菌落的观察及计数
11.24配制察氏培养基,做无菌检查
11.25样品中酵母菌的检测进行十倍稀释、接种
11.26—11.28观察酵母菌落及计数
11.29配制察氏培养基,做无菌检查
11.30样品中霉菌的检测进行十倍稀释、接种
12.01--12.05观察霉菌菌落及计数
12.06配制乳糖发酵培养基,做产气实验
12.07观察产气情况
12.08—12.10数据的处理分析,完成实习报告。
三、实习内容
(一)香干中细菌含量的测定:
Ⅰ、实验材料
(1)、实验器材及试剂
设备:
电热恒温培养箱37℃±1℃、电磁炉、电子天平、PH试纸、吸管1ml、10ml6个、烧杯(1000ml)一个、三角瓶(500ml、250ml)各一个、培养皿(直径90mm)9个、试管9个、试管架、酒精灯、研钵、剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、量筒(500ml)、玻棒、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布
试剂:
75%乙醇、生理盐水、1mol/L氢氧化钠溶液
(2)、牛肉膏蛋白胨培养基
配方:
牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15—20g、无菌水1000ml、pH7.4—7.6
配置步骤:
①称量
②溶化
③调pH
④分装
⑤加塞
⑥包扎
⑦灭菌
⑧倒平板
(3)、检样稀释及培养
①以无菌操作,将检样豆干25g剪碎、研磨以后,放于盛有225ml无菌水的三角瓶内,并在三角瓶中放入玻璃珠,经充分振摇做成1:
10的均匀稀释液。
②用1ml无菌吸管吸取1:
10稀释液1ml,沿管壁缓慢注入含有9ml无菌水的无菌试管内,振摇试管混合均匀,做成1:
100的匀液。
③另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。
④根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择3个适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移0.3ml稀释液于无菌培养皿内,每个稀释度作三个培养皿。
同时做好空白对照组。
⑤稀释液移入培养皿后,应及时用涂布器在培养基表面将样品均匀涂布。
⑥等琼脂凝固后,翻转培养皿,置(36±1)℃恒温箱内培养24h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1g样品所含菌落总数。
Ⅱ、菌落计算方法
(1)菌落计数方法
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。
在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
(2)菌落计数的报告
①平板菌落数的选择
选取菌落数在30~100之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用三个平板,应采用三个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余的一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落数;如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。
②稀释度的选择
应选择平均菌落数在30~100之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度平均菌落数均大于100,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30~100之间,其中一部分大于100或小于30时,则以最接近30或100的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
(3)、实验具体流程如下
(4)、下表为实验时记录的豆干中细菌的含量数据:
样品中细菌的含量
稀释度10-410-510-6
平板一19612738
平板二18113545
平板三20311447
平均菌数(个/g)
注:
每个平板加入0.3ml的稀释液
其中,细菌菌落全为白色。
(二)豆干中酵母菌含量检测
Ⅰ、实验材料
(1)、实验器材及试剂
设备:
恒温培养箱、电子天平、锥形瓶容量(500mL、250mL)各一个、无菌吸管1mL、10mL6个、无菌培养皿9个、无菌试管20个、试管架、酒精灯、研钵、剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、牛皮纸袋、塑料
试剂:
蔗糖3g、NaN030.3g、K2HP040.1g、KCl0.05g、MgSO4·7H2O0.05g、FeS040.001g、琼脂1.5-2g、无菌水1000ml
(2)察氏培养基
配方:
蔗糖30g、NaN033g、K2HP040.1g、KCl0.5g、MgSO4·7H2O0.5g、FeS040.01g、琼脂15-20g、无菌水1000ml、自然pH
配制步骤:
①称量及溶化量取所需水量约2/3左右加入到烧杯中,分别称取蔗糖、NaNO3、K2HP04、KCl、MgSO4。
依次逐一加入水中溶解。
按每100ml培养基加入1ml0.1%的FeS04溶液。
②定容待药品全部溶解后,将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。
③加琼脂加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。
④分装、加塞、包扎。
⑤高压蒸汽灭菌0.103MPa,121°C灭菌20min。
⑥倒平板
Ⅱ、操作步骤
(1)、样品的稀释
①样品预处理:
以无菌操作,将检样香干25g剪碎、研磨以后,放于盛有225ml无菌水的三角瓶内,经充分振摇做成1:
10的均匀稀释液。
②取1mL1:
10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:
100稀释液。
③按上步操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管。
④根据对样品污染状况的估计,选择3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取0.3mL样品匀液于3个无菌平皿内。
同时作好空白对照。
⑤稀释液移入培养皿后,应及时用涂布器在培养基表面将样品均匀涂布。
⑥等琼脂凝固后,翻转培养皿,置(28±1)℃恒温箱内培养3—5天取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1g样品所含菌落总数。
Ⅲ、结果与报告
(1)、计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数计算。
①若所有平板上菌落数均大于150CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
②若所有平板上菌落数均小于10CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
③若所有稀释度平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算;如为原液,则以小于1计数。
(2)、报告
①菌落数在100以内时,按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字报告。
②菌落数大于或等于100时,前3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数来表示结果;也可用10的指数形式来表示,此时也按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字。
③称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告,报告酵母数。
实验具体流程如下:
下表为实验时记录的香干中酵母菌的含量数据:
样品中酵母菌的含量
稀释度10-410-510-6
平板一17123
平板二022
平板三21175
平均菌数(个/g)
注:
每个平板加入0.3ml的稀释液
酵母菌菌落呈白色,且表面很潮湿。
(三)豆干中霉菌霉菌含量检测
Ⅰ、实验材料
(1)、实验器材及试剂
设备:
恒温培养箱、电子天平、锥形瓶容量(500mL、250mL)各一个、无菌吸管1mL、10mL6个、无菌培养皿9个、无菌试管20个、试管架、酒精灯、研钵、剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、牛皮纸袋、塑料
试剂:
蔗糖30g、NaN033g、K2HP041g、KCl0.5g、MgSO4·7H2O0.5g、FeS040.01g、琼脂15-20g、无菌水1000ml
(2)察氏培养基
配方:
蔗糖30g、NaN033g、K2HP041g、KCl0.5g、MgSO4·7H2O0.5g、FeS040.01g、琼脂15-20g、无菌水1000ml、自然pH
配制步骤:
①称量及溶化量取所需水量约2/3左右加入到烧杯中,分别称取蔗糖、NaNO3、K2HP04、KCl、MgSO4。
依次逐一加入水中溶解。
按每1000ml培养基加入10ml0.1%的FeS04溶液。
②定容待药品全部溶解后,将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。
③加琼脂加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。
④分装、加塞、包扎。
⑤高压蒸汽灭菌0.103MPa,121°C灭菌20min。
⑥倒平板
(3)、检样稀释及培养
①以无菌操作,将检样香干25g剪碎、研磨以后,放于盛有225ml无菌水的三角瓶内,并在三角瓶中放入玻璃珠,经充分振摇做成1:
10的均匀稀释液。
②用1ml无菌吸管吸取1:
10稀释液1ml,沿管壁缓慢注入含有9ml无菌水的无菌试管内,振摇试管混合均匀,做成1:
100的匀液。
③另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。
④根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择3个适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移0.3ml稀释液于无菌培养皿内,每个稀释度作三个培养皿。
同时做好空白对照组。
⑤稀释液移入培养皿后,应及时用涂布器在培养基表面将样品均匀涂布。
⑥等琼脂凝固后,翻转培养皿,置(28±1)℃恒温箱内培养5—7天取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1g样品所含菌落总数。
实验具体流程如下:
下表为实验时记录的豆干中霉菌的含量数据:
样品中霉菌的含量
稀释度10-410-510-6
平板一305
平板二221
平板三822
平均菌数(个/g)
注:
每个平板加入0.3ml的稀释液
霉菌菌落有菌丝,菌落较大,有白色、黄色、黑色的菌落。
(四)、香干中大肠杆菌的检测
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
Ⅰ、实验材料
(1)、实验器材及试剂
设备:
恒温箱(36±1℃)、电子天平、乳钵、试管20个、吸管(1mL、10mL)6个、三角烧瓶(500ml、250ml)各一个、酒精灯、试管架、烧杯(1000ml)一个、杜氏小管
试剂:
结晶紫1克、95%乙醇20ml、1%草酸铵水溶液80ml、0.85%灭菌生理盐水、磷酸二氢钾34g、1mol/L氢氧化钠175ml、无菌水5000ml、蛋白胨30g、乳糖25g、2%伊红水溶液20ml、0.5%美蓝水溶液13ml、胰蛋白胨20g、3号胆盐1.5g、磷酸氢二钾2g、氯化钠100g、琼脂20g、0.65%美蓝溶液10ml、0.04%溴甲酚紫水溶液25ml、猪胆盐5g、0.4%溴甲酚紫水溶液2.5ml
Ⅱ、操作步骤
(1)、检样稀释
以无菌操作将检样25g放于有225mL无菌水的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠),经充分振摇或研磨做成1:
10的均匀稀释液。
(2)乳糖发酵试验
分别取1ml1:
10的均匀稀释液于9个乳糖胆盐发酵管内,置36±1℃温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
(3)、分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
(4)、证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
(5)、报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。
实验具体流程如下:
Ⅲ、结果报告
乳糖胆盐发酵管现象
4只试管都不产生气泡(注:
每只试管加入1ml稀释液,产气的现象为杜氏小管中有气泡产生。
)
试验结论:
香干中无大肠杆菌群
四、实验经验与心得总结
(一)、实习体会
1.团队的重要性,一个人是不可能在三星期内完成实习内容的,必须在多人共同努力下才能完整的完成实验,才能很好的完成实验。
2.实验前必须有详细的实习计划书,熟话说的好,万事开头难,好的开始是成功的一半。
制定详细的计划书可以很好的帮助我们后面实验的过程,为我们节约了很多时间。
合理的规划了我们的时间.
3.实验前资料查阅的重要性,没有好的指导,就不可能做出好的结果。
只有明确了我们需要做什么,我们需要什么样的培养基,什么样的试剂以及仪器。
只有在准备充分的前提下才能有条不紊的进行试验。
4.组长的重要性,如果狼群没有狼王,那就没有任何威慑力。
组长合理的分配了各个组员的任务,使大家分工明确,知道该做什么,要做什么,这样就不会出现有组员打酱油的情况发生,也不会让组员感觉无聊。
让大家都参与进来,为实验做自己的一点贡献,做出实验成果时,都能有一定的收获。
一分耕耘,一分收获。
组长还可以协调组员有时发生的矛盾。
5.自己动手的重要性。
看着别人做,好像很简单的样子,可是当自己做的时候就不是那么回事了,没有想象中的简单。
实践出真知。
6.不要怕失败,没做实验前感觉实验还挺简单的,安排那么多时间,纯粹是浪费。
后来自己做了后才知道,事情并不是想象中的那么简单。
不仅耗时,而且耗力。
不知道失败了多少次后才做出了实验结果。
坚持到最后的都是英雄。
7.做事要有始有终,不能刚开始满腔热情,但是还没开始一半就半途而废了。
微生物实验不要想做一次就能成功的。
一般是要多次才能成功。
所以要坚持做完。
8.操作一定要标准,微生物实验室一项精密的实验,稍微有点疏忽或者操作不当,可能实验就报废了,得重新来过。
9.细节的重要性,细节决定成败。
每次试验完后,实验桌一定要整理干净,实验药品一定要放回原处,以方便下次做实验以及另外组做实验
(二)、试验中存在的不足与建议:
1、实验室的样品试剂需好好保存,每次用完后都需盖好放回原处好好保存,防止变质。
2、样品在研磨时,要研磨充分。
3、在做细菌的实验时,我们组做了两次,第一次是因为涂布器没有完全冷却就涂布,导致细菌被烫死,实验没有现象。
4、在做大肠菌群的测定时,杜氏小管需用注射器注满培养基,再倒置后缓缓放入试管中,切忌不可垂直丢入,这样很可能会导致试管破裂,杜氏小管注射培养基时,需注满,不然,放入试管后会导致小管内出现气泡,影响实验结果!
总的来说,这次的微生物课程实习,让我学到了很多,比如怎样设计实验方案、团队合作精神的重要性以及操作时操作技术日渐成熟等等。
而且,这次的课程实习,让我对自己的实验动手能力有了一个新的认识和提高,能更深刻的认识到自己实验过程中不足的一方面,意识到自己的理论知识还不够扎实,动手能力还不够成熟。
让自己在日后的学习中能更好地运用操作实验,对自己日后的发展打下了坚实的基础
五、课后思考题
1、用滤膜法检测大肠菌群有什么优点?
答:
(1)与直接法比较可以检测大量的样品。
(2)浓缩效应使微生物的检测结果提高。
(3)带有菌落的滤膜可作为检测的永久记录存档。
(4)可见的菌落与样品量直接对应,得出定量结果。
2、检查豆制品中的大肠菌群有何意义?
答:
主要是以该菌群的检出情况来表示豆制品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低,表明了粪便污染的程度,也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便,也有肠道患者或带菌者的粪便,所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等),因而食品中有粪便污染,则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性,潜伏着食物中毒和流行病的威胁,必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
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