畜禽血液和病料采集技术.docx
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畜禽血液和病料采集技术
第一章 畜禽血液和病料采集技术Kgbm/L0XR*
第一节畜禽血液采集技术y~S_V
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一、要求:
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1、所有采血用具均应事先以消毒、干燥处理;~_4~`_bT9
2、采血部位要进行剪毛、清拭并按常规进行消毒(先碘酊后酒精)。
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3、怀疑传染病时,采血过程要防止到处流散,检后的残余血液及所用器皿要进行消毒处理。
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4、需抗凝的要加入抗凝剂。
常用的抗凝剂有:
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①双草酸盐抗凝剂:
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草酸钾 0.6克;草酸铵 1.2克;蒸馏水 加至100毫升;溶解后,吸取0.5毫升,加入供采血用的试管或小瓶中,置干燥箱内(温度不能超过80℃),烘干备用(实际含草酸盐10毫克,可供5毫升全血抗凝用)m_D_B_
②枸橼酸钠6mg可使1ml血液不凝固,或配成3.8%的溶液。
适用于血钙的测定和血沉测定时的抗凝。
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③乙二胺四乙酸二钠(EDTA二钠)每10毫克可使5毫升全血抗凝;或配成10%的溶液,每2滴可使5毫升全血抗凝。
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④肝素对血中有机成分和无机成分测定均无影响,多用于科研。
常用肝素钠配成1ml内含1mg(0.1%)的水溶液,取0.1ml分装于小试管或小青霉素瓶中,在80℃以下烤干后备用,可使5~10ml血液不凝固。
n _ 5、需分离血清的血液(不抗凝),试管要静置、斜放,便于血清晰出。 _H_gI! _q<) 6、注意安全。 ___W_a_qD zw0w."V_ 二、家禽血样的采集{zdMm_p_QF (一)鸡翅内侧静脉采血d__UI5,3_* 1、器械准备: 酒精棉球;小试管或细塑料管,试管架;镊子;配5~7#针尖的一次性注射器。 _wQkM: _=t5 2、保定: 手提保定。 助手一手抓住两只鸡腿,一手抓鸡翅根部,以拇指按压静脉管。 TJ|Jv8j<_s 3、部位确定: 鸡翅内侧腋静脉,肉眼可见。 _ZL_MH~cc 4、操作: 助手抓住鸡翅根部,以拇指按压静脉管,使之充盈。 术者左手大拇指捏住鸡翅内侧,余四指捏住鸡翅外侧,展平鸡翅,右手持针,沿血管方向,于血管傍先刺入皮下,然后再斜刺向血管,抽取血液(此法避免拔针后出血过多)。 也可直接刺向血管,抽取血液(采用此法,拔针后要用干棉球按压数分钟止血)。 或者将鸡翅摆平,直接先将静脉用针刺破,待血液流出后,用细塑料管利用虹吸的原理吸取血液,事毕,用火将细塑料管一头封闭。 $pGT1oF_[E (二)鸡心脏采血sDY~jP[_Oa 方法1U|(_+_-R8Z 操作要点: 鸡左侧向上横卧保定,拔去胸上部部分羽毛,寻找由胸骨走向肩胛的皮下大静脉,心脏约在该静脉的分支下侧,有时用食指可摸到心脏跳动。 用酒精消毒后,以碘酊标记部位。 针头(7#)刺入时,如触及胸骨可稍拔出,使针头稍向右偏,避开胸骨,再将针头向里刺入,边刺边抽动活塞,若刺入心脏,便有血液涌入注射器,术毕,局部消毒。 _._n_-#__A 方法2{Kz__,_bo 操作要点: 鸡仰卧保定,鸡头部朝向术者,拔去胸上部少许羽毛,用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窝,右手持针(7#),自胸骨上方凹窝斜向前下方心脏方向(鸡的左侧、术者的右侧)刺入,边刺边抽动活塞,若刺入心脏,便有血液涌入注射器,术毕,局部消毒。 q'2vE;zKb 注意: 此法(含方法1、2)采血后,多会引起鸡只死亡,仅适用于淘汰鸡的采血。 1H)mJVIKkB (三)鸡头部静脉窦采血H}@: B_r_i 1、器械准备: 酒精或碘酊棉球;小试管,试管架;镊子;配5-7#短针尖的一次性注射器。 _0DX_*f 2、保定: 助手一手抓鸡的两只腿,一手抓鸡的两翅,使头部向上。 术者左手食指和中指夹住鸡喙,大拇指压住颈上部,以此固定头部。 vq__f_$_(" 3、部位确定: 鸡头后部,枕骨大孔为刺入点。 __c__\b_L_ 4、操作: 鸡只如上述方法确切保定后,枕骨大孔部少许拔毛,消毒,术者右手持针,自枕骨大孔进针,针头对准喙尖,约与颈椎纵轴成45°角,刺入约0.5~0.8cm(视鸡只大小),刺入静脉窦后,针头感觉无阻力,抽取血液,术毕消毒。 ^)VwxH: __s 注意: 此法采血后,亦会引起鸡只死亡,故适用于淘汰鸡的采血。 苗鸡采血亦可用此法。 zM0NRERi__ <=uYfi_3, 第二节畜禽病料采集技术gT+/n_SrLV 一、样品采集的原则7u_bz7__* 采集检测样品是诊断检测工作的重要内容。 采样的时机是否适宜,样品是否具有代表性,样品处理、保存、运送是否合适及时,与检验结果的准确性、可靠性关系极大。 采集样品时,需要符合以下规定: 9___d2u# 1、适时采样。 根据检测要求及检测对象和检验项目的不同,选择适当的采样时机十分重要。 样品是有时间要求的,应严格按规定时间采样,有临床症状需要作病原分离的,样品必须在病初的发热期或症状典型时采样,病死的动物,应立即采样。 s? Ss__pu_V 2、合理采样。 根据诊断检测的要求,须严格按照规定采集各种足够数量的样品外,不同疫病的需检样品各异,应按可能的疫病侧重采样。 对未能确定为何种疫病的,应全面采样。 _L_74Mz]v 3、典型采样。 选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的样品,如有并发症,还应兼顾采样。 4_#__U}_bN 4、无菌采样。 采集检验样品除供病理组织学检验外还供病原学及血清学检验,供病原学及血清学检验的样品,必须无菌操作采样,采样用具、容器均须无菌处理,尸体剖检需采集样品的,先采样后检查,以免人为污染样品。 : 5d>^6eoB? 5、适量采样。 采集样品的数量要满足诊断检测的需要,并留有余地,以备必要时复检使用。 )Q)qz_$h@ 6、样品处理。 采集的样品应一种样品一个容器,立即密封,根据样品的性状检验要求的不同,作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。 供病毒学检验的样品,数小时内要送到实验室,只作冷藏处理,超过数小时的要冷冻处理,(冻结方法: 可将样品放入-30℃冰箱内冻结,然后再装入有大小冰块或干冰的冷藏瓶(箱)内运送,亦可将装入样品的容器放入隔热保温瓶内,再放入冰块,然后按100g冰块加入食盐约35克,立即将隔热保温瓶瓶口塞紧。 瓶内温度可达-21℃左右)。 供细菌学检验或血清学检验的样品,冷藏送实验室即可。 装样品的容器应贴上标签,标签要防止因冻结而脱落,标签标明采集的时间、地点、号码和样品名称,并附上发病、死亡等相关资料,尽快送实验室。 ! _-gU~0_ 7、安全采样。 既要保护采样人员,以要防止病原外泄,还要防止样品受到污染。 Bq0\T0,_ 8、样品包装。 主要是密闭,防止样品损坏、污染和外泄等意外发生。 _ 迅速送检。 应尽快送实验室进行检测,延误送检时间,会影响到检测质量和结果的可靠性。 _XtFm5\U 二、血液样品的采集'_U@o! \=a 1、病毒检验用血液样品。 应在动物发病初体温升高期采集。 血液样品必须是脱纤血或是抗凝血。 抗凝剂可选用肝素或EDTA,枸缘酸钠对病毒有轻微毒性,一般不宜采用。 采血前,在真空采血管或其它容器内按每毫升血液加入0.1%肝素1ml或EDTA20mg。 采集的血液立即与抗凝剂充分混合,防止凝固。 采脱纤血时,先在容器内加入适量小玻璃珠,加入血液后,反复振荡,以便脱去血液纤维。 采集的血液经密封后贴上标签,以冷藏状态立即送实验室。 必要时,可在血液中按每毫升加入青霉素和链霉素各500~1000IU,以抑制血源性可采血中污染的细菌。 n*4`T_duu^ 2、细菌检验样品。 采血应在动物发病初体温升高或发病期,未经药物治疗期间采集。 血液应脱纤或加肝素抗凝剂(或EDTA或枸缘酸钠),但不可加入抗生素。 采集的血液经密封后贴上标签,以冷藏状态立即送实验室,否则须置4℃冰箱内暂时保存,但时间不宜过久,以免溶血。 \&_JZ>h 3、血清学检验样品。 用作血清学检验的样品不加抗凝剂或脱纤处理。 为保障血清质量,一般情况下,空腹采血较好。 采集的血液贴上标签,室温静置待凝固后送实验室,并尽快将自然析出的血清或经离心分离出的血清吸出,按需要分装,再贴上标签冷藏保存备检。 较长时间才检验的,应冻结保存,但不能反复冻融,否则抗体效价下降。 作血清学检验的血液,在采血、运送、分离血清过程中,应避免溶血,以免影响检验结果。 采集双份血清检测比较抗体效价变化的,第一份血清采于发病的初期并作冻结保存,第二份血清采于第一份血清后3~4周,双份血清同时送实验室。 4、寄生虫检验样品。 因不同的血液寄生虫在血液中出现的时机及部位各不相同,因此需要根据各种血液寄生虫病的特点,取相应时机及部位的血液制成血涂片,送实验室。 _rIb_+c=|F 三、组织样品的采集7_#8G_n=g 组织样品一般由扑杀动物或病死尸体剖中采集。 从尸体采样时,先剥去动物胸腹部皮肤,以无菌器械将腹腔打开,根据检验目的和生前疫病的初步诊断,无菌采集不同的组织。 >rG>_Bz^Pu 1、病毒检验样品。 作病毒检验的组织,必须以无菌技术采集,组织应分别放入灭菌的容器内并立即密封,贴上标签,放入冷藏容器立即送实验室。 如果时间较长,可作冻结状态运送,也可将组织块浸泡在PH7.4左右的乳汉液或磷酸缓冲肉汤保护液内,并按每毫升保护液加入青霉素、链霉素各1000IU,然后放入冷藏容器内送实验室。 %36x'Dn_? 2、细菌检验样品。 供细菌检验的组织样品,应新鲜并以无菌技术采集。 如遇尸体已经腐败,某些疫病的致病菌仍可采集于长骨或肋骨,从骨髓中分离细菌。 采集的所有组织分别放入灭菌的容器内并立即密封,贴上标签,放入冷藏容器立即送实验室。 _S0$_^|/Sr 四、粪便样品的采集.UyE|t4_ 1、病毒检验样品。 分离病毒的粪便必须新鲜。 少量采集时,以灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔粘膜上蘸取粪便,并立即投入灭菌的试管内密封,或在试管内加入少量PH7.4的保护液再密封。 贴上标签冷藏送实验室。 r8k(_L {W 2、细菌检验样品。 作细菌检验的粪便,最好在动物使用抗菌药物之前,从直肠或泄殖腔粘膜上采集,采样方法与供病毒检验的相同。 可投入无菌缓冲盐水或肉汤的指形管内,贴上标签冷藏送实验室。 __qA_*~_B' 3、寄生虫检验样品。 粪便样品应选取新排出的或直接从直肠内采得,以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态,一般寄生虫检验的粪便用量较多。 采得的粪便以冷藏不冻结状态送实验室。 qTO6I_5_u e_3~MU6_ 第三节 几种畜禽疫病的样品采集Ts_i_JK 一、禽流感的样品采集、保存和运输P<<$__o-a" 病毒主要在呼吸道粘膜细胞内增殖。 RNIXQns-=S (一)病禽N(__/_)_e 1、至少从5只濒死禽采集样品。 样品包括: 泄殖腔拭子和气管拭子(置于缓冲液中)各5个(小珍禽可采集新鲜粪便);气管和肺的混样5个,肠管及内容物的混样5个;肝、脾、肾和脑等组织样品(不能混样)各5个。 ? vXgHDs^_T 采集方法: 1)泄殖腔棉拭子: 将棉拭子插入肛门并旋转,使粪便沾在拭子上,后放在运输缓冲液中。 2)气管棉拭子: 活鸡采样时,将棉拭子插入活鸡的气管内,轻轻擦拭气管壁并放入缓冲液中。 死亡动物采气管样品时,可在肺和气管离体情况下进行采集,应将棉拭子插入较深部位用力擦拭,并按上述方法将棉拭子放在运输缓冲液中。 3)粪便样品: 可从活禽市场采取新鲜粪便,用棉拭子沾取粪便,并将采好的样品放在运输缓冲液中。 Dc9uq5l_ 2、分别采集至少10个病鸡的血样(急性发病期血清)。 采集10只病禽的血样,使用一次性采血器,心脏或翅静脉采血,每只禽采血样2ml~3ml,经离心或自然析出血清后,将血清移到指形管中。 封好口,贴好标签。 不同禽只的血样不能混合。 _QPH=`s (二)病死禽MqmQ5__2HR 无发病禽时,可从死亡不久的病禽采样,采样要求同病禽。 A^_U84_kV= 棉拭子单独放入容器,容器中盛放含有抗菌素的PH值为7.0~7.4的PBS液。 抗生素的选择视当地情况而定,组织和气管拭子悬液中加入青霉素(20001U/mL)、链霉素(2mg/mL)、庆大霉素(50цg/mL)、制霉菌素(100001U/mL)。 但粪便和泄殖腔拭子所用的抗生素浓度应提高5倍。 加入抗生素后pH值应调至7.4。 &(F_c.3m (三)样品的保存和运输T_^bAO-d# 1、血样要单独存放,不能混合。 _R|;BO: S1 2、样品应密封于塑料袋或瓶中,置于有制冷剂的容器中运输,容器必须密封,防止渗漏。 <'y<8gpM_ 3、样品若能在24小时内送到实验室,冷藏运输。 否则,应冷冻运输。 若样品暂时不用,则应冷冻(最好-70℃或以下)保存。 3i_^X9[_. 二、新城疫]>_3_Y~KH( 新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分泌物和排泄物,以脑、脾和肺含毒量最高,骨髓含毒时间最长。 X2 w)J? _pv 样品: 眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、气管粘膜、脑等。
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