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各种蛋白标签汇总
各种蛋白标签汇总之相礼和热创作
蛋白标签
蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一同交融表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等.随着技术的不竭进展,研讨人员相继开发出了具有各种分歧功能的蛋白标签.现在,这些蛋白标签已在根底研讨和商业化产品消费等方面得到了广泛的运用.
标签
纯化
促进溶解度
抗体效价
细胞标识表记标帜
His6
+
+/-
+/-
Flag
+
+/-
+
GST
+
+
+
MBP
+
++
+
His-MBP
++
+
+
HA
+
eGFP/CFP/YFP
+++
Myc
+
His-Myc
+
+
His-AviTag™
++
++
++
Sumo
+++
+
His-Sumo
++
++
+
SNAP-Tag™
++
+
+++
HaloTag™
++
+
+++
TrxHIS
His6是指六个组氨酸残基组成的交融标签,可拔出在目的蛋白的C末端或N末端.当某一个标签的运用,一是能构成表位利于纯化和检测;二是构成独特的结构特征(结合配体)利于纯化.组氨酸残基侧链与固态的镍有猛烈的吸收力,可用于固定化金属螯合层析(IMAC),对重组蛋白进行分离纯化.运用His-tag有上面优点:
∙标签的分子量小,只要~0.84KD,而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD,一样平常不影响目的蛋白的功能;
∙His标签交融蛋白可以在非离子型概况活性剂存在的条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强的蛋白得到运用,后者在纯化包涵体蛋白时特别有用,用高浓度的变性剂溶解后经过金属螯和亲和层析往除杂蛋白,使复性不受别的蛋白的干扰,或进行金属螯和亲和层析复性;
∙His标签交融蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA互相作用研讨;
∙His标签免疫原性绝对较低,可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体.
∙可运用于多种表达零碎,纯化的条件和气;
∙可以和别的的亲和标签一同构建双亲和标签.
Flag标签蛋白
Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽(DYKDDDDK),同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的交融蛋白在真核表达零碎中表达服从更高.FLAG作为标签蛋白,其交融表达目的蛋白后具有以下优点:
∙FLAG作为交融表达标签,其通常不会与目的蛋白互相作用而且通常不会影响目的蛋白的功能、性子,这样就有利用研讨人员对交融蛋白进行卑鄙研讨.
∙交融FLAG的目的蛋白,可以直接经过FLAG进行亲和层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性的交融蛋白,而且纯化服从高.
∙FLAG作为标签蛋白,其可以被抗FLAG的抗体辨认,这样就方便经过WesternBlot、ELISA等方法对含有FLAG的交融蛋白进行检测、鉴定.
∙交融在N端的FLAG,其可以被肠激酶切除(DDDK),从而得到特异的目的蛋白.因而现FLAG标签已广泛的运用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研讨及其蛋白互相作用等相关领域.
MBP(麦芽糖结合蛋白)
MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码.MBP可添加在细菌中过量表达的交融蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白.MBP标签可经过免疫分析很方便地检测.有必要用位点埋头的蛋白酶切割标签.假如蛋白在细菌中表达,MBP可以交融在蛋白的N端或C端.纯化:
交融蛋白可经过交联淀粉亲和层析一步纯化.结合的交融蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱.结合亲和力在微摩尔范围.一些交融蛋白在0.2%TritonX-100或0.25%Tween20存在下不克不及无效结合,而其他交融蛋白则不受影响.缓冲条件为pH7.0到8.5,盐浓度可高达1M,但不克不及运用变性剂.假如要往除MBP交融部分,可用位点特异性蛋白酶切除.检测:
可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测.
GST(谷胱甘肽巯基转移酶)
GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签蛋白本人是一个在解毒过程中起到紧张作用的转移酶,它的自然大小为26KD.将它运用在原核表达的缘故原由大致有两个,一个是由于它是一个高度可溶的蛋白,盼看可以利用它添加外源蛋白的可溶性;另一个是它可以在大肠杆菌中大量表达,起到进步表达量的作用.GST交融表达零碎广泛运用于各种交融蛋白的表达,可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达.结合的交融蛋白在非变性条件下用10mM还原型谷胱甘肽洗脱.在大多数状况下,交融蛋白在水溶液中是可溶的,并构成二体.GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测.标签有助于呵护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并进步其波动性.在大多数状况下GST交融蛋白是完全或部分可溶的.纯化:
该表达零碎表达的GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathionesepharose)亲和树脂进行纯化.GST标签蛋白可在和气、非变性条件下洗脱,因而保存了蛋白的抗原性和生物活性.GST在变性条件下会失往对谷胱甘肽树脂的结合才能,因而不克不及在纯化缓冲液中加入强变性剂如:
盐酸胍或尿素等.假如要往除GST交融部分,可用位点特异性蛋白酶切除.检测:
可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测.
HA
HA标签蛋白,标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素概况抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶蛋白的空间结构影响小,容易构建成标签蛋白交融到N端或者C端.易于用Anti-HA抗体检测和ELISA检测.
c-Myc
C-Myc标签蛋白,是一个含11个氨基酸的小标签,标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu,这11个氨基酸作为抗原表位表达在分歧的蛋白质框架中仍可辨认其相应抗体.C-Myctag已成功运用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中,可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达.
eGFP
eGFP标签蛋白,是加强型绿色荧光蛋白eGFP,激发波长为488nm,发射波长为507nm,其是由野生型绿色荧光蛋白GFP经过氨基酸渐变和密码子优化而来的.绝对于GFP,eGFP荧光强度更强、荧光性子更波动.同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的交融蛋白在真核表达零碎中表达服从更高.eGFP作为标签蛋白,其交融表达目的蛋白后具有以下优点:
∙不必破碎组织细胞和不加任何底物,直接经过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时表现目的基因的表达状况,而且荧光性子波动,被誉为活细胞探针.
∙其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等状况.
∙同时细胞内的别的产品不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性.
∙其低斲丧、高灵敏度检测,非常适用于高通量的药物挑选.因而现eGFP表达标签被广泛地运用于基团表达调控、转基因功能研讨、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变更及药物挑选等方面.
此外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eGFP,用于目的基因的体内蛋白示踪研讨.
eYFP
eYFP标签蛋白为加强型黄绿色荧光蛋白eYFP,激发波长为513nm,发射波长为527nm,其是由野生型黄绿色荧光蛋白YFP经过氨基酸渐变和密码子优化而来的.绝对于YFP,eYFP荧光强度更强、荧光性子更波动.同时载体中构建的Kozak序列使得含有eYFP的交融蛋白在真核表达零碎中表达服从更高.eYFP作为标签蛋白,其交融表达目的蛋白后具有以下优点:
∙不必破碎组织细胞和不加任何底物,直接经过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时表现目的基因的表达状况,而且荧光性子波动,被誉为活细胞探针.
∙其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等状况.
∙同时细胞内的别的产品不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性.
∙其低斲丧、高灵敏度检测,非常适用于高通量的药物挑选.因而现eYFP表达标签被广泛的运用与基团表达调控、转基因功能研讨、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变更及药物挑选等方面.
此外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eYFP,用于目的基因的体内蛋白示踪研讨.
eCFP
eCFP标签蛋白为加强型青色荧光蛋白eCFP,激发波长为433nm或453nm,发射波长为475nm或501nm,其是由野生型青色荧光蛋白CFP经过氨基酸渐变和密码子优化而来的.绝对于CFP,eCFP荧光强度更强、荧光性子更波动.同时载体中构建的Kozak序列使得含有eCFP的交融蛋白在真核表达零碎中表达服从更高.eCFP作为标签蛋白,其交融表达目的蛋白后具有以下优点:
∙不必破碎组织细胞和不加任何底物,直接经过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时表现目的基因的表达状况,而且荧光性子波动,被誉为活细胞探针.
∙其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等状况.
∙同时细胞内的别的产品不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性.
∙其低斲丧、高灵敏度检测,非常适用于高通量的药物挑选.因而现eCFP表达标签被广泛的运用与基团表达调控、转基因功能研讨、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变更及药物挑选等方面.
AviTag
AviTag标签蛋白是一个15个氨基酸的短肽,具有一个单生物素化赖氨酸位点,与已知自然可生物素化序列完全分歧,可以加在目的蛋白的N端和C端.交融表达后,可被生物素连接酶生物素化,为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物,除了用于蛋白质分离纯化,还用于蛋白质互相作用研讨.
AviTag标签零碎具有以下几大优点:
∙无论在体外或者体内,几乎全部的蛋白都可以在一个独特的AviTag位点随便且无效地被生物素化;
∙生物素化是经过酶和底物的反应来完成,反应条件相当和气而且标识表记标帜的埋头性极高;
∙生物素AviTag只要15个氨基酸,对蛋白空间结构的影响非常小.
SNAP-Tag
SNAP-Tag是新一代的蛋白标签技术,不但埋头性极高而且波动,最大的优点是适用于多种环境下的蛋白质检测与纯化,如活细胞内、溶液中、或固态相(如SDS-PAGEgels)等.
SNAP-Tag是从人的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移(O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase)获得.无论体内还是体外,SNAP-Tag都能与底物高特异性地共价结合,使蛋白标识表记标帜上生物素或荧光基团(如荧光素和若丹明).SNAP所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团,释放出了鸟嘌呤.这种新的硫醚键共价结合使SNAP所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标识表记标帜物.苯甲基鸟嘌呤在生化条件下波动,而且没有其他蛋白会和这类物质作用,以是SNAP标签反应是高特异的.检测:
生物素或各种颜色荧光的底物(如荧光素、若丹明)可渗出进入细胞,方便快捷地进行活细胞内SNAP-Tag交融蛋白的标识表记标帜与检测.它们也可特异性地标识表记标帜大肠杆菌,酵母和哺乳动物等细胞抽提液或曾经纯化的蛋白液中的SNAP-tag交融蛋白.
将纯化的或未纯化的SNAP-Tag交融蛋白与概况固定了苯甲基鸟嘌呤的基质混合,蛋白即可特异与底物作用,构成共价键,交融蛋白间接被固定在了基质概况上,可以达到更方便快捷地研讨蛋白功能或纯化蛋白的目的.
HaloTag
HaloTag™标签蛋白是一种脱卤素酶的遗传修饰衍生物,可与多种合成的HaloTag™配基无效地共价结合.这个分子量为33KDa的单体蛋白能交融在重组蛋白的N端或C端,并在原核和真核零碎中表达.
HaloTag™配基是小分子化学物,可以在体外或体内与HaloTag™蛋白共价结合.这些配基由两个关键组分组成:
(1)一个通用的HaloTag™反应联合子,结合HaloTag™蛋白;
(2)一个功能基团,例如荧光染料或亲和媒介.可以共价和特异性结合多种合成的陈述基团和亲和配基的特性,使得HaloTag™蛋白可以用于检测和亲和结合或固相化固定目的蛋白.
SUMO
SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白(Smallubiquitin-likemodifier),是泛素(ubiquitin)类多肽链超家族的紧张成员之一.在一级结构上,SUMO与泛素只要18%的同源性,但是两者的三级结构及其生物学功能却非常类似.研讨发现SUMO可以作为重组蛋白表达的交融标签和分子伴侣,不单可以进一步进步交融蛋白的表达量,且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠,进步重组蛋白可溶性等功能.此外SUMO还有一项紧张的运用,就是可用于完好地切除标签蛋白,得到自然蛋白.由于SUMO蛋白水解酶(我公司可提供)能辨认完好的SUMO标签蛋白序列,并能高效地把SUMO从交融蛋白上切割上去.切除SUMO后,经过亲和层析,往除标签蛋白部分,就得到和自然蛋白一样的重组蛋白.以是SUMO标签也经常运用于和其他标签一同运用,作为特异酶切水解位点.
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