大蒜根尖染色体观察实验文档格式.docx
- 文档编号:22982872
- 上传时间:2023-02-06
- 格式:DOCX
- 页数:9
- 大小:52.88KB
大蒜根尖染色体观察实验文档格式.docx
《大蒜根尖染色体观察实验文档格式.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《大蒜根尖染色体观察实验文档格式.docx(9页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
多倍体的诱导使用秋水仙素,秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合,从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成,但是姐妹染色单体照常想成,只是没有被拉向两级,于是染色体数目加倍。
各步骤的作用:
固定液可以迅速杀死细胞,保持细胞形态在有丝分裂相。
解离可以破坏细胞的胞间层(果胶),使细胞之间的联系变松散,有利于压片和染色。
漂洗可以洗去过量的盐酸,防止解离过度
(3
破坏细胞结构或影响染色效果(盐酸是酸性,而醋酸洋红是碱性染料)。
有丝分裂
完整的有丝分裂相包括G1期(合成前期)、S期(合成期)、G2期(合成后期)和M期(分裂期),其中G1期、S期和G2期合称间期,细胞完成DNA的复制以及有丝分裂的准备,而M期又可以分为前期、中期、后期和末期,为了形态观察的方便,本实验采用后一种分法。
如表一。
表一植物有丝分裂各时期特点
MW®
Ct貼
转-址k眦FF]ma棚汗匪龙旺的第白喷,NDNA址制化"
£
各
S删
DHA复制.一咋醐A并予览帕1渤凹个DMA轩于遹过若逹点渥#工1凰・崎蚩山帧^<
!
冷H独2金蛆Miifr色业划.
占H地
沁扎甘舉H)州准省f^^戚汝啟附K'
NA种ihflMi)
牡色网转变虛坡色也制9斛瞅瞅洞注:
肋戢呃体
•甘狀直仙列斤亦通檢中班:
謂晞,圧眾廉训泄
衙謀点行覩,除巴屮戟弁幵,ff邮裤休哼£
|下《问無腕腐慣
诰色巾E转空施茸壬色应:
践腹丽违.核仁出休:
$•趙脸-细胞换一细yy堂
4、实验步骤
(1将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中,加入清水,放进25°
C恒温
培养箱中2~3天,催化大蒜生根。
(2选择根长0.5~1cm且不定根生长情况差不多的大蒜分为10组。
(3在大蒜生
根之后,先选取一些根尖放进卡诺式固定液中固定3个小时,
用Schiff氏试剂染色,镜检,观察染色体是否能染上色以及染色效果。
若染色效果不行,则重新配制Schiff氏试剂,直至染色效果良好,然后将其贮存于4°
C冰
箱中准备使用。
(4将分好组的大蒜分别用清水、50mg/LGr6+、100mg/LGr6+、150mg/L
Gr6+、30mg/L1,2,4-三氯苯、40mg/L1,2,4-三氯苯、50mg/L1,2,4-三氯苯、浓度分别为50mg/LGr6+和30mg/L1,2,4-三氯苯的混合液、100mg/LGr6+和40mg/L1,2,4-三氯苯的混合液、150mg/LGr6+和50mg/L1,2,4-三氯苯的混合液培养24小时。
清水组为对照组。
(5在早上有丝分裂旺盛的时候,将处理过的大蒜根尖剪下,分别放入青
霉素小瓶中,加入卡诺氏固定液固定3个小时,然后放入4C冰箱内保存,以
备使用。
(6取出部分经过固定的根尖先用酒精和清水洗涤,加入1mol/LHCL覆
盖根尖,放入60摄氏度水浴锅内水浴加热7~10分钟,取出用清水洗涤3次,每次5分钟。
(7取出解离后的根尖,放在载玻片上,用刀片切下根尖乳白色的分生区
部分,滴加1滴Schiff氏试剂染色10分钟,然后盖上盖玻片,吸干染液,并用镊子钝的一端在盖玻片上轻轻敲击,将细胞打散。
(8将制备好的根尖放在显微镜下观察,统计微核数目、以及有丝分裂间
期、前期、中期、后期、末期细胞数目并计算有丝分裂指数以及微核率。
每组浓度细胞计数400个。
实验结果与数据处理
1、制片观察情况
图1前期
图2后期
图3末期
图4核崩解
图5微核
图6双核
2、数据记录情况
表2试验结果统计
分组
组别
细胞总数
50mg/LCr6+
50mg/LCr6++秋水仙素
100mg/LCr6+
100mg/LCr6++秋水仙素清水
389421402
395401396390
25211
135215
384398379
9121
5620
前期数目
中期数目
后期数目
末期数目
微核数
多核
分裂数
3、数据处理结果
表3实验计算结果
分组30号%50mg/LCr6+50mg/LCr6++秋水仙素100mg/LCr6+100mg/L
Cr6++秋水仙素清水
0.71±
.03
0±
0.24±
0.18
0.47±
.1
0.08
1.43±
.5
0±
0.25±
0.4
0.77±
0.1
前期
0.52±
.2
2.11
中期
00±
后期
0.26±
1.58
±
0.
末期
0.52±
0.2
微核
1.56±
2.34±
0.26
1.30±
0.5
5.28
0.0
图1分裂期及比例图
a5Omg/Lce-
四、实验结论
1、数据评价
Ji
4-
lOQrs/L匸血
-iOCmc/L£
「*<
0忙'
仏*f
■肖出
a.由上面图表可以看出
50mg/LCr6+与50mg/LCr6++秋水仙素相比,后者
分裂期的数目增多,微核数和多核数没有太大的变化。
而100mg/L的相比之
F有所增加。
b.同是没有加秋水仙素的50与100mg的相比较,浓度增大微核和多核
数有增加。
2、原因分析
a.只有两个浓度,实验数据可比性不高。
b.压片不够熟练,导致计数不全
面。
C.观察计数时存在计数误差。
五、
实验心得体会
1.培养洋葱根尖时,水不可放多,待根尖长出后,使根尖分生区接触到水面
即可;
水至少一天一换,若有浑浊,立即更换。
2.剪下洋葱根尖时注意时间,正午时分最合适,因为此时洋葱根尖分生区有丝分裂最为活跃,此时固定,可以观察到最多的分裂相。
解离时间要控制好,时间太短,效果不够;
时间太长,解离过度破坏细胞。
3.漂洗不能少,染色时间要足够,否则染色不够深影响观察,但染色时间过长则细胞质也会部分被染色,影响观察效果
4.压片对于最终效果来说十分关键,需要尽力并用上多种手段,但是切记只可纵向压,不可横向搓。
5.这个实验关键在于压片,我们第一次压片不太好,力度没有足够会把细胞重叠在一起,不能计数,如果力度过大,细胞就会给压碎,细胞核会被压出胞外,计数不准确,所以要多加练习。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 大蒜 根尖 染色体 观察 实验