欧盟OMCL仪器确认附件1HPLC确认之欧阳体创编.docx

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欧盟OMCL仪器确认附件1HPLC确认之欧阳体创编

OMCLNetworkoftheCouncilofEurope

时间：

2021.02.03

创作：

欧阳体

QUALITYMANAGEMENTDOCUMENT

PA/PH/OMCL（11）04

QUALIFICATIONOFEQUIPMENT

仪器确认

ANNEX1:

QUALIFICATIONOFHPLCEQUIPMENT

附件1：

HPLC仪器的确认

Fulldocumenttitleandreference

文件全名和索引号

QualificationofEquipment

Annex1:

QualificationofHPLCequipment

PA/PH/OMCL（11）04

Documenttype文件类型

Guideline指南

Legislativebasis立法基础

ThepresentdocumentwasalsoacceptedbyEAasrecommendationdocumenttobeusedinthecontextofQualityManagementSystemauditsofOMCLs

Dateoffirstadoption

首次发行日期

May2005

Dateoforiginalentryintoforce

首次执行日期

June2005

Dateofentryintoforceofreviseddocument修订后执行日期

1stJuly2011

Previoustitles/otherreferences

原文件名/其它索引号

ThisdocumentreplacesdocumentPA/PH/OMCL（07）17DEF

CustodianOrganisation

保管机构

ThepresentdocumentwaselaboratedbytheOMCLNetwork/EDQMoftheCouncilofEurope

ConcernedNetwork

相关网络

GEON

ANNEX1OFTHEOMCLNETWORKGUIDELINE

“QUALIFICATIONOFEQUIPMENT”

OMCL网络指南“仪器的确认”之附件1

QUALIFICATIONOFHPLCEQUIPMENT

HPLC仪器的确认

Introduction概述

ThepresentdocumentisthefirstAnnexofthecoredocument“QualificationofEquipment”,anditshouldbeusedincombinationwithitwhenplanning,performinganddocumentingtheHPLCequipmentqualificationprocess.

本文件是核心文件“仪器的确认”第1个附件，在计划、实施和记录HPLC仪器的确认过程时，应将本文件与核心文件一起使用。

ThecoredocumentcontainsthegeneralintroductionandtheLevelIandIIofqualification,commontoalltypeofinstruments,andthepresentannexcontainsHPLCinstrument-relatedrecommendationsonparameterstobecheckedandthecorrespondingtypicalacceptanceLimits,aswellaspracticalexamplesontheMethodologythatcanbeusedtocarryoutthesechecks.

核心文件包括了第一级和第二级确认的通用介绍，适用于所有类型的仪器，本附件包括了HPLC仪器相关的需要检查的参数和相应典型的可接受标准的推荐，以及可用于进行这此检查的实用方法学举例。

WhenqualifyingHPLCequipment,itshouldbenotedthatitisacceptabletocheckatLevelIIIandIVseveralofthementionedparametersatthesametimeinacombinedtestprocedure（e.g.“overall”systemperformancetestgivinginformationonpeakareaprecision,retentiontimeprecision,gradientreproducibility,etc）.

在进行HPLC仪器确认时，应注意也可以对第三级和第四级几个提到的参数采用联合检测程序同时进行检查（例如“全面”系统性能检查，同时给出峰面积精密度、保留时间精密度、梯度重复性等的信息）

TABLEIII表三

LevelIII.Periodicandmotivatedinstrumentchecks

第三级定期主动仪器检查

ExamplesofrequirementsforHPLCinstrumentsanddetectors

HPLC仪器和检测器要求举例

Instrumentmodule

仪器模块

Parametertobechecked

需检查的参数

TypicaltoleranceLimits

典型允差限度

Solventdeliverysystem

溶剂传送系统

●Flowrate流速

●Proportioningaccuracyandprecision（gradienttest）配比准确度和精密度（梯度测试）

●Proportioningripple配比波动

●±5%

●±2

●≤0.2%

Injector

进样器

●Volumeprecision进样量精密度

●Carry-over残留

●RSD≤1.0%

●seeAnnexI见附件1

Autosampler

自动进样器

Thermostattingaccuracyandprecision恒温准确度和精密度

●±3°C

Ovenorcoolingdevice

柱温箱或冷却装置

Thermostattingaccuracy

恒温准确度

●±2°C

UV/DADdetector

UV/DAD检测器

●Linearity线性

●Wavelengthaccuracy波长准确度

●r2≥0.999

●±2nm

Fluorescencedetector

荧光检测器

●Wavelengthaccuracyexcitation波长激发准确度

●Wavelengthaccuracyemission波长发射准确度

●Sensitivity灵敏度

●±3nm

●±3nm

●±seeAnnexI

Electrochemicaldetector电化学检测器

●Accuracyofthesignal信号准确度

●Stabilityofthesignal信号稳定性

●seeAnnexI见附件1

●seeAnnexI见附件1

RIDdetector

RID检测器

●Signal/Noiseratio信噪比

●Driftovertime飘移

●seeAnnexI见附件1

●0.1mV/min

CDdetector

CD检测器

●Signal/Noiseratio信噪比

●Sensitivity灵敏度

●Driftovertime飘移

●Linearity线性

●seeAnnexI见附件1

●seeAnnexI见附件1

●seeAnnexI见附件1

●r>0.999

TABLEIV表四

LevelIV.In-useinstrumentchecks

第四级在用仪器检查

ExamplesofrequirementsforHPLCinstrumentswithUVorDADdetectors

配备UV或DAD检测器的HPLC仪器的要求举例

Parametertobechecked

需检查参数

TypicaltoleranceLimits限度

●SystemsuitabilitycheckfortheMethod方法系统适用性检查

AccordingtoPh.Eur.orMAHdossierorvalidatedin-houseMethod

根据欧洲药典或MAH文件或公司内部经过验证的方法

●Peakareaprecision（applicabletothemainpeaksinthetestsolution）

峰面积准确度（适用于供试液中主峰面积）

RSD≤1.5%

（unlessotherwiseprescribedinthesystemsuitabilityoftheMethod,e.g.specificrequirementsfromPh.Eur.2.2.46,APImonographsorMAdossiers）除非在方法的系统适用性里有描述，例如EP2.2.46特定要求，原料药各论或MA文件

●Retentiontimeprecision保留时间精密度

RSD±5%

●Carry-over（bycomparingconsecutivestandard（ofthesubstancebeingquantified）andblankinjections）残留（通过比较连续（进行定量检测的物质）标准和空白进样）

≤0.2%

●Signal/Noiseratio（tobeappliedforrelatedsubstancestest）

信噪比（用于有关物质检测）

AccordingtoPh.Eur.

根据欧洲药典

ANNEXI附件1

LevelIII.Periodicandmotivatedinstrumentchecks

第三级定期性的主动仪器检查

ThisAnnexcontainspracticalexamplesoftestsandtheirassociatedtoleranceLimitsforseveralparametersrelatedtotheperformanceofthedifferentmodulesofaHPLC.

本附件包括一些实用几个与HPLC不同模块相关的参数检测举例及其相应的可接受限度。

TheseexamplescanbeconsideredbytheOMCLsaspossibleapproachestoperformtheLevelIIIoftheequipmentqualificationprocess:

“Periodicandmotivatedinstrumentchecks”.

这些例子可以认为是OMCL实验室可能的进行第三级仪器确认的方法“周期主动仪器检查”

HPLCSOLVENTDELIVERYSYSTEM高压液相溶剂传输系统

ThefollowingtestsareproposedfortheperiodicandmotivatedcheckoftheHPLCsolventdeliverysystem:

flowrateandgradienttest.

以下测试作为HPLC溶剂传输系统周期性主动检查：

流速和梯度检查

FLOWRATE流速

Materials:

材料

Volumetricflaskof5or10ml

5ml或10ml的容量瓶

Calibratedchronometer

校正过的计时计

Settings:

设置

Mobilephase:

degassedwater

流动相：

脱过气的水

Nocolumn（openend）*

无柱（开放式）*

Flowrate:

adjustedbetween0.5and3.0ml/min

流速：

调节在0.5到3.0ml/min

Ifhigh-pressuremixingsystemsareinstalled,thistesthastobedoneoneachsolventchannel.

如果有安装高压混合系统，本测试应在每一溶剂通道进行。

❆Forcertainequipment,e.g.inthecaseoflowflowrates,thecheckwouldbeperformedbyusingacolumnorabackpressureregulator.

对于一定的仪器，例如，流速较低时，采用一根柱子或背压调整器进行检查

 Method方法:

Settheflowrateatanappropriatelevelandmeasurethetimeneededtofillthevolumetricflaskuptothemark.Recordthetimeneeded.

将流速设定在一个合适的水平，测量将容量瓶装满至刻度的时间。

记录所用的时间。

f＝V/tf＝（V×60）/t

f.................measuredflowrate[ml/min]测量的流速

t.................elapsedtimetofilluptomark[s]充满至刻度所花的时间

V...............volumeofthevolumetricflask[ml]容量瓶的体积

D＝100×（f－F）/F

D...............deviation[%]偏差

F...............adjustedflowrate[ml/min]调节后的流速

f.................measuredflowrate[ml/min]测量的流速

Limits限度:

±5%

GRADIENTCOMPOSITIONANDRIPPLE梯度组成和波动

 Settings:

设置

Stainlesssteelcapillarye.g.2000x0.12mminstalledinsteadofacolumn

不锈钢毛细管，例如2000X0.12mm，代替色谱柱安装于仪器

Detection:

UV-Detectoradjustedto265nm

检测器：

紫外检测器调节至265nm

MobilephaseA:

degassedwater

流动相A：

脱气水

MobilephaseB:

degassedwatercontaining0.5%acetone

流动相B：

含0.5%丙酮的脱气水

Flowrate:

1.0ml/min

流速：

1.0ml/分钟

 Method方法:

Thetestiscarriedoutinthefollowingwaybyusingagradientprogramdependingonthenumberofsolventchannelsandtheconfigurationofthesystem:

按下列方法进行测试，根据通道数量不同使用下列不同系统参数和梯度进行洗脱

A-B

A-BandA-C

A-C,A-BandB-D

time[min]

时间[分钟]

%mobilephaseA（water）

%流动相A（水相）

%mobilephaseB%流动相B

（water-acetonemixture）（水-丙酮混合物）

0.0

100

0

0.1

90

10

10

90

10

10.1

50

50

20

50

50

20.1

10

90

30

10

90

30.1

0

100

40

0

100

40.1

100

0

Startthetestbypumpingwaterforatleast10mintoequilibratethesystem.

开始测试前，先用水平衡系统至少10分钟。

Thezero%valueatthestartofthetestisthebaseline.Allstepsaremeasuredatthebeginningofthehorizontalpartofthelineeitherbysoftwareormanuallyonthepaperprintusingaliner.Theheightofthe100%water/acetonemixtureisusedasthe100%valueinthefollowingcalculation.

开始时的0%值是基线值。

所有步骤均在开始时测量基线的水平部分，由软件或手动在纸上用衬垫打印。

100%水/丙酮混合物的高度在以下计算中作为100%值。

%H＝100*h/H

%H............calculatedcomposition计算组成

h................heightofthemeasuredline测量线的高度

H...............heightofthe100%water/acetonemixtureline（mobilephaseB） 

100%水/丙酮混合物线的高度（流动相B）

d＝%H－G

d................deviation偏差

G...............gradientcompositionadjusted[%acetone/watersolutionmixture=mobilephaseB] 梯度组成调节【%丙酮/水溶液混合物=流动相B】

Limits限度:

Absolutedeviation:

±2oftheadjustedvalue绝对偏差：

调整值的±2

Therippleofthegradientcompositionisthepercentageofnoiseofthe50%linefromthegradientprogram.梯度组分的波动为梯度程序噪声基线的50%

%R＝100*N/h50

%R............ripple波纹

h50.............heightofthe50%line50%的线高度

N...............heightofthenoiseline,measuredduring1minuteinthelinearregion噪声线高度，在线性区域1分钟测量的结果

 Limit限度s:

≤0.2%

HPLCINJECTOR进样器

Volumeprecisionandcarry-overarethetestsproposedfortheperiodicandmotivatedcheckoftheHPLCinjector.

建议在HPLC进样器周期性主动检查中进行体积精密度和残留检查

VOLUMEPRECISIONANDCARRY-OVER

体积精密度和残留

Solutions:

溶液

SolventA:

methanol:

waterR,60:

40.

溶液A：

乙醇：

水（试剂）=60：

40

Referencesolution（a）:

dissolve15.0mgmethyl-,ethyl-,andpropylparabenein100.0mlofsolventA.

对照液（a）：

取15.0mg乙基、甲基和尼泊金丙酯溶于100.0ml溶剂A中

Referencesolution（b）:

Dilute1.0mlofreferencesolution（a）to10.0mlofsolventA.

对照液（b）：

取1.0ml对照液（a）用溶于10.0ml溶剂A中

Referencesolution（c）:

Dilute1.0mlofreferencesolution（b）to100.0mlofsolventA.

对照液（c）：

取1.0ml对照液（b）用溶于100.0ml溶剂A中

Settings:

设置

Column:

Lichrospher100RP8,5um,125x4mm,withoutprecolumn

色谱柱：

Lichrospher100RP8,5um,125x4mm,无衬管

Mobilephase:

methanol:

water=60:

40

流动相：

乙醇：

水=60：

40

Flowrate:

1.0ml/min

流动速度：

1.0ml/分钟

Detection:

254nm

检测器：

254nm

Injectionvolume:

20μl

进样体积：

20ul

Method方法:

Injectionscheme:

进样序列

—       6xreferencesolution（b）对照液（b）6针

—      1xreferencesolution（a）对照液（a）1针

—       1xsolventA（blankinjection1）溶剂A（空白）1针

—       1xreferencesolution（b）对照液（b）1针

—       1xsolventA（blankinjection2）溶剂A（空白2）1针

—       1xreferencesolution（c）对照液（c）1针

Limits限度:

Repeatabilityofpeakareas:

Therelativestandarddeviationofthepeakareasofallpeaksint