葵花宝典之植酸酶Word格式.docx
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1.15
82.6
17
棉籽粕
0.97
77.3
23
菜籽粕
1.17
74.4
21
大豆粕
0.62
64.5
2、为什么植酸有害?
植酸只对单胃动物如:
猪、鸡、鸭、火鸡、鹌鹑、鱼等有害。
集中在三个方面:
一是使磷和其他微量元素(钙、锌、锰、镁、铜、碘等)的可利用率大为降低;
二是同蛋白质、淀粉等结合形成不溶解的络合物,导致饲料的消化率降低(NRC,1993);
最后是与动物体内消化酶结合,使消化率下降。
所以植酸被列入有害因子。
3、为什么单胃动物不能利用植酸磷?
由于植酸只能被功能专一的植酸酶水解,而单胃动物消化道内几乎没有可以发挥作用的植酸酶,所以进食的植酸无法被水解,植酸磷同粪便一道排除体外无法被利用。
4、植酸酶是什么?
植酸酶是一个由蛋白质组成的酶。
是一个具有催化植酸水解功能的生物催化剂。
水解产物是肌醇、无机磷及其他可能与植酸结合的物质,如钙、锌、镁、锰等微量元素以及蛋白质、淀粉。
5、为什么植酸酶可以保护环境?
从宏观上讲,磷是畜牧业污染环境的主要污染源之一,造成地表水(河流,湖泊)和地下水的磷富营养化污染。
对于养殖密度很高的地区和集约化养殖地区,特别是严重缺水的大城市及周边地区最为突出。
来自排泄物中的磷远远超出了土壤的接受能力。
由于饲料中的总磷的利用率最高不过30%,添加植酸酶后,能将总磷的利用率提高到60%左右。
使磷的排泄量至少降低30%以上,从而保护了环境。
另一方面,磷是动物必须的代谢物质而不是畜产品中主要的沉积物质。
动物一生不断进食磷,又将绝大多数重新排出体外。
可以这么说,我们往往从遥远的地方源源不断将大量的磷酸氢钙运输到养殖地区,只是经过动物体再排放出来。
植酸酶能极大程度上扭转这个局面。
因此,保护了环境。
6、植酸酶降低饲料生产成本的原因是什么?
植酸酶降低饲料成本的原因有三个方面:
植酸酶可以定量地替代无机磷饲料。
在没有植酸酶的情况下,必须添加磷酸氢钙等无机磷饲料,而磷的价格很高;
植酸酶同时提高了饲料中多种养分的消化率,增加了可利用养分的数量;
最后由于植酸酶是浓度很高的催化剂,很小的添加量就替换出几十倍至百倍以上的磷酸氢钙,为饲料配方设计节省出了宝贵的空间,使成本进一步下降。
7、为什么植酸酶可以降低养殖成本?
植酸酶通过两方面降低养殖成本:
降低饲料的成本和提高动物的生产性能,如产蛋率上升,破蛋率下降,日增重上升等。
二、植酸酶的基本特点和质量标准
8、商品植酸酶的主要生产步骤有那些?
4阶段发酵(纯菌株接种、扩繁、二次扩繁、主发酵),植酸酶的分离与纯化(微滤和超滤),添加载体(玉米芯和淀粉),制粒,干燥,(包被),包装。
9、目前市场上,主要品牌的植酸酶的菌种来源和最佳PH值各有何特点?
BASF的酶他富来源于黑曲霉(Aspergullusniger),有2.5和5.5两个活性高峰;
罗氏的乐多仙来源于隔孢伏革菌(Peniophoralycii),5.5单峰,经过包被处理,比BASF稍耐高温;
新华扬赛乐来源于毕赤酵母(牛粪中培养的大肠杆菌基因),单峰;
挑战和昕大洋植酸酶来自于毕赤化酵母(黑曲霉基因改造),有2.5和5.5两个活性高峰;
诺伟司的诺伟磷来源于毕赤酵母(无花果曲酶Aspergullusficuum的耐热植酸酶基因),有2.5和5.5两个活性高峰。
10、毕赤酵母表达系统与大肠杆菌表达系统相比有什么特点?
大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、生产成本低。
然而,许多蛋白质在翻译后,需经过翻译后的修饰加工,如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。
大肠杆菌缺少上述加工机制,不适合用于表达结构复杂的蛋白质。
另外,蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构,在大肠杆菌中表达的蛋白质往往不能进行正确的折叠,为了得到有活性的蛋白,就需要进行变性溶解及复性等操作,这一过程比较繁琐,同时增加了成本。
与大肠杆菌相比,酵母是低等真核生物,具有细胞生长快,易于培养,遗传操作简单等原核生物的特点,又具有真核生物时表达的蛋白质进行正确加工,修饰,合理的空间折叠等功能,非常有利于真核基因的表达,能有效克服大肠杆菌系统缺乏蛋白翻泽后加工、修饰的不足。
因此酵母表达系统受到越来越多的重视和利用。
11、什么是纯化酶制剂和粗发酶制剂?
纯酶制剂和粗酶制剂主要取决于生产过程的提纯工艺。
纯酶制剂制造成本高,但产品的质量和一致性有保障;
粗酶制剂因省却提纯工艺而成本低,但含量变异幅度大,组分混杂,比如作为诱导剂的甲醇残留过高,最大的问题还是微生物发酵过程中有可能产生对畜禽有毒有害副产物。
12、6-植酸酶与3-植酸酶有什么区别?
微生物来源的植酸酶,有6植酸酶和3植酸酶,3-植酸酶是从3位起始,然后水解4,5,6,1,2;
而6植酸酶是从6位开始,然后1,2,3,4,5。
6-植酸酶和3-植酸酶是二类完全不同的植酸酶产品。
它们的pH作用高峰、耐热性及酶活释放速度等方面都有很大差别。
(1)pH作用高峰
畜禽消化道正常的pH是5.5-6。
在猪胃中,由于盐酸的作用使pH降至2-3,在家禽,植酸酶主要在嗉囔起作用,它的pH是4.5-5,下图是二种植酸酶在不同pH环境下活性变化的曲线。
3-植酸酶有2.5和5.5二个pH作用高峰,而6-植酸酶仅有pH5.5一个作用高峰。
在pH低于3的酸性环境和高于6(相当于猪、鸡小肠)的环境中,3-植酸酶的活性明显高于6-植酸酶产品。
这说明二种植酸酶在相同pH环境下作用效果不完全相同。
(2)生物水解效率
由于pH作用高峰的不同,6-植酸酶产品在畜禽体内的水解效率只有3-植酸酶的50%。
(3)耐热性
3-植酸酶诺伟磷5000G耐热性能很好,制粒温度75℃,酶活保持力为100%,在制粒温度达到90℃时,酶活保持力至少在70%以上。
与植物性植酸酶同源的6-植酸酶不耐热,尽管有些6-植酸酶产品进行了多层包被处理,但其在90℃制粒温度下,酶活保持力却在50%以下,而且它的酶活释放速度和生物水解效率都因包被受到了影响,最终作用效果明显低于3-植酸酶诺伟磷5000G。
(4)酶活释放速度
植酸酶是一种活性蛋白质,在动物消化道复杂的环境条件下很容易失活,所以好的植酸酶产品应该是在饲料中稳定,在体内迅速释放发挥作用。
下图可见3-植酸酶在畜禽采食后迅速释放,几分钟内达酶活高峰,而6-植酸酶产品释放速度则相对比较缓慢。
13、为什么脂肪包被的颗粒植酸酶产品的活性释放速度慢?
由于植酸酶必须先释放出来,在有水的条件下接触植酸,才能发挥作用。
所以,脂肪包被的产品就必须首先将包裹在植酸酶表面的脂肪水解掉或融化掉,才能使植酸酶释放出来。
在口腔、食道甚至在胃中没有脂肪酶,唯一的可能是靠体温融化。
所以需要较长的时间才能达到酶的最大活性。
相比之下,低温挤压成型的产品在释放速度方面更有优势。
根据体外的试验,显示有40分钟的差别(见上图)。
★14、诺伟司植酸酶---诺伟磷的耐高温原理是什么?
诺伟磷的耐高温特性与国内外其它同类产品的所谓的耐高温有着本质上的不同,她不是通过包被技术,而是从无花果曲酶中提取了耐高温的植酸酶基因,该基因中含有一些分子结构很稳定的氨基酸基团,使得植酸酶蛋白的二级结构和三级结构更加紧凑,从而使植酸酶蛋白能够耐受更高温度,再把这些能够耐受高温的植酸酶蛋白基因导入毕赤酵母中,经特殊培养基(与众不同的碳源)培养,选育出稳定性更好的植酸酶蛋白的菌株,然后通过现代生物调控技术,发酵生产出耐高温的植酸酶。
由于诺伟磷毋需包被,所以在生物体内有着很好的生物利用率。
15、商品植酸酶在何时开始发挥作用?
一般说,进入口腔就开始发挥作用,即一旦遇到水分就开始了催化作用。
在一些特别的情况下,如稀料或稠料拌喂猪或填鸭食麋,植酸酶在动物进食前已经开始水解植酸了。
16、商品植酸酶在动物体发挥作用的主要部位在哪里?
在猪的胃(pH2~3)、家禽的嗉囊(pH4.5~5.0)。
17、胃是否是植酸酶发挥作用的最后部位?
不是。
在小肠中仍然发现植酸酶有活性,甚至在大肠中也有发现。
但是由于部位靠后,对提高磷的利用来说,意义已经不大。
18、既然植酸酶由蛋白质组成,为什么胃蛋白酶没有将所有的植酸酶消化掉?
由于植酸酶是具有活性的蛋白质。
而具有活性的蛋白质或结构没有破坏的蛋白质对蛋白酶具有抵抗作用,不易被消化。
所以,有外源的植酸酶可以通过胃、甚至整个消化道。
食物中的有害细菌对人和动物的危害,口服疫苗等都是类似的例子。
19、什么是植酸酶的生物水解效率?
植酸酶的生物效率是指植酸酶在动物体内发挥水解作用的能力。
同是植酸酶,因来源不同或后加工不同,即使在体外测定的活性相同,而在动物体内有可能表现出不同的活性。
这个差别,称为生物效率不同。
20、植酸酶在动物体内有足够的反应时间吗?
一般来讲是足够的。
相比之下,在蛋鸡体内的反应时间更长。
应该尽量创造条件延长在体内的作用时间,以达到充分地水解植酸的目的。
例如在体外创造更好的水解条件,如稀料喂猪,食糜填鸭和改变植酸酶颗粒产品的结构,加快溶解速度等。
21、为什么会有粉状、颗粒状和液体的植酸酶?
有何特点?
目前有三种商品植酸酶剂型,原因是受植酸酶生产技术的限制和适应饲料企业加工工艺的要求。
由于植酸酶的温度耐受极限还远不能满足大多数生产颗粒饲料的要求,所以液体植酸酶是借助后喷涂技术在颗粒饲料中使用。
但需要相应的喷涂设备,安装费用和日常维护要求较高。
颗粒状植酸酶经稳定性和耐热性较好,适宜于生产各种饲料产品包括配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料,也可以在低温制粒时生产颗粒饲料。
稳定性好,但价格较高,对混合均匀度要求比较高。
粉状植酸酶制造成本低,适宜于生产对植酶酶效价破坏小的饲料产品,如粉状配合饲料,储存期短(如集约化企业,饲料—养殖一体化企业或养殖场)的产品。
22、颗粒状植酸酶之间有什么区别?
颗粒状植酸酶又分为脂肪-矿物盐包被(Fat-saltCoating)和淀粉载体挤压成型(StarchExtrusionGranulate)两种。
后者的关键生产工艺是低剪切压技术。
使用脂肪包被保护的植酸酶,容重大,流动性差,在动物体内植酸酶的释放速度慢;
使用淀粉载体挤压成型保护的植酸酶,以淀粉为主要辅料,镁和锌等微量元素为稳定剂。
容重适宜,流动性好,不结块,在动物体内酶活释放速度快。
23、植酸酶发挥作用的适宜温度是多少?
商品植酸酶纯品的最适宜温度是45-60℃。
经过后加工保护的产品,温度上限有所提高
耐高温的极限随产品而不同。
高温极限的意义在耐受饲料加工的温度。
就目前市场上的产品
一般来说,超过80℃则有大量的酶钝化失活。
24、为什么植酸酶怕高温?
由于植酸酶是具有活性的蛋白质,发挥作用的前提是必须维持其三级空间结构。
高温
三级空间结构有很大的影响。
所以要尽量避免高温的破坏。
25、什么是植酸酶的热加工稳定性?
商品植酸酶的热加工稳定性专指在饲料加工工艺中有加热过程时的稳定性。
典型的加热
工艺有压制颗粒和膨化。
针对固体植酸酶而言,这时植酸酶受到温度、湿度(蒸汽压力)、
机械挤压剪切、调质时间等多种因素的综合影响,十分复杂。
经压颗粒后,存留率越高,稳
定性愈好。
另据报道(KarldeBruyne,2000),环模孔径和长度都对颗粒饲料中植酸酶的
存留率有影响。
2mm的孔径与4mm相比,孔径愈小,机械挤压剪切产热愈多,破坏愈大。
26、什么是植酸酶的储存稳定性?
稳定性是指商品植酸酶或添加到饲料中的植酸酶在一定的条件下,植酸酶含量随储存时间的延长而下降的幅度称为储存稳定性。
所谓的“一定条件”是指温度、水分和原包装。
储存稳定性是商品植酸酶最重要的质量指标之一,稳定性愈高,损失愈少,质量愈好。
27、什么情况下储存稳定性最差?
商品植酸酶在高温(≥30℃)和高水分(≥14%)条件下失活最快。
适宜储存温度是≤20
℃,原包装存放。
含有植酸酶的饲料产品同样在高温(≥30℃)和高水分(≥14%)或高湿度(≥
60%)条件下失活最快。
饲料霉变对植酸酶稳定性有很大的破坏。
28、与其他添加剂相比,为什么植酸酶的添加量这么小?
由于植酸酶不是营养物质,也不是代谢物质,只是催化剂,具有反复使用的特点。
所以,
只需要在饲料添加微量的植酸酶足够了。
就可以启动水解植酸的反应。
植酸酶在水解了一个植酸分子后,再去水解另一个植酸。
29、什么是植酸酶的推荐量和添加量?
推荐量是指在饲料中建议的植酸酶添加量。
对同一种动物而言,几乎在全世界都使用同一个推荐量。
当然随着不同来源和特征的植酸酶产品的出现,推荐量也可能随之变化。
植酸酶的推荐量是由动物种类、饲料的类型以及活性损失风险决定。
目前使用的推荐量是由巴斯夫公司根据各方面的研究结果提供,最有权威性和通用性。
目前的推荐量适用于3-植酸酶,而不能用于6-植酸酶。
添加量是指用户在饲料中真正添加的植酸酶数量。
确定添加量的因素有:
商品植酸酶的含量浓度、动物种类、饲料的类型、不同的生产用途、保质期和使用季节。
推荐量往往是添加量的上限,添加量是在推荐量的基础上确定的。
用户在刚刚开始使用植酸酶的时候,都将推荐量直接作为添加量使用,这样做的好处是安全保险。
但不是最佳的添加量,有偏高的可能。
最适宜的添加量是用户自己摸索出来的。
★30、诺伟磷-5000G的推荐量和添加量如何?
诺伟磷-5000G在饲料中的最适添加量需根据底物浓度,即饲料中植酸(盐)的含量而定,还需根据饲料成分,加工条件,动物的采食量,期望效果和饲料成本进行调整。
诺伟磷-5000G的推荐添加量为:
诺伟磷-5000G的推荐用量
动物种类
活性单位(U/公斤全价饲料)
推荐量(克/吨全价饲料)
蛋、种鸡
300
60
蛋鸭
400
80
肉鸡、肉鸭
400-500
80-100
猪
1)若配合饲料形态为粉状饲料或制粒温度为75℃以下的颗粒饲料,诺伟磷-5000G在蛋鸡、蛋鸭、肉鸡/鸭和猪的推荐添加量分别为60、80、80、80g/T,所替代的磷酸氢钙量分别为:
蛋鸡、蛋鸭料8-10kg;
肉鸡、肉鸭和猪料6-8kg。
2)若配合饲料形态为制粒温度为75℃以上的颗粒饲料(肉鸡、肉鸭饲料),根据压制颗粒时所受的因素(调制时间、调制温度、蒸汽的压力、颗粒直径等)的不同,推荐添加量在80~100g/T,所替代的磷酸氢钙量为6-8kg。
31、植酸酶的添加量与底物含量有关系吗?
理论上一定有关系,但在实际使用中除了特殊情况,没有用底物-植酸的含量确定植酸酶添加量的。
特殊的情况是饲料中不含植酸或很低,根本就不必用植酸酶。
如动物性原料很高时,或纯淀粉含量很高时(仔猪开食料,肉食性鱼饵料等)。
对常用的畜禽日粮的构成结构,推荐的植酸酶添加量已经是考虑了底物的含量范围,都足够水解所需要了。
另外,植酸的测定不简单。
所以,一般情况下不必再考虑底物的浓度了。
在植酸酶添加量固定的情况下,饲料中植酸含量愈低,植酸的相对水解度也愈低。
除了特殊情况,玉米-饼粕型日粮中植酸磷含量在0.2%~0.3%之间。
当植酸磷含量低于0.2%时,问题并不是植酸酶不起作用,而在于释放出的可利用磷有限,必须考虑以无机磷补足。
32、植酸酶活性单位是如何定义的?
中华人民共和国国家标准(GB/T18634-2002)将植酸酶的活性单位定义为:
样品在植酸钠浓度为5.0mmol/L、温度为37℃、pH值5.50的条件下,每分钟从植酸钠中释放1µ
mol的无机磷所需要的酶量,即为一个植酸酶活性单位,以U表示。
33、如何检测植酸酶的活性?
有国标方法和企标方法两种。
对于同一产品,不同的检测方法所得到的检测结果是不一样的。
企标方法检测的数值要高于国标方法的结果。
国标方法(GB/T18634-2002)采用的是分光光度法,其原理是:
植酸酶在一定温度和pH条件下,水解底物植酸钠,生成正磷酸和肌醇衍生物,在酸性溶液中,用钒钼酸铵处理会生成黄色的[(NH4)3PO4NH4VO3•16MoO3]复合物,在波长415nm下进行比色测定。
国标方法有绝对法和相对法两种。
绝对法以无机磷为标准用于标定植酸酶标准品的精确含量;
相对法以植酸酶标准品为对照,测定各种样品中植酸酶的含量。
34、为什么含量测定非常重要?
由于植酸酶本身的特点,使含量测定变得非常重要。
首先,按植酸酶的应用方式划分属于直接替代类酶,如果含量没有保障,将直接导致饲料的质量下降,立即造成动物出现缺磷问题;
其次,植酸酶是具活性的蛋白质,对环境温湿度敏感,有必要了解在下游产品的加工、储存后的存留率;
最后,所有与植酸酶有关的质量认证和仲裁判定,含量都是最常涉及到和最重要的指标。
所以,植酸酶含量测定非常重要。
35、衡量植酸酶质量好坏的重要指标有哪些?
含量、生物利用率、加工性能(容重,流动性和粒度)、储存稳定性(常温和低温)和加工稳定性(高温和常温)。
三、植酸酶的潜在营养价值
36、潜在营养价值与营养价值有什么区别?
潜在营养价值是指产品本身不含有某种营养成分,但是可以将底物-植酸所含的养分直接或间接地释放出来。
潜在营养价值的前提是有植酸存在。
假如饲料中不含植酸,就没有必要添加植酸酶,也无从谈起潜在营养价值。
用常规的养分分析测定方法,无法测得潜在营养价值。
潜在营养价值是在动物体内有酶和底物同时存在的条件下用消化试验或生长性能试验测定获得的。
因此,与通常概念的营养价值相比较,潜在营养价值在功能上是一样的,而且是可消化养分。
但通常概念的营养价值是总养分。
潜在营养价值具有明显的饲料构成特异性和动物特异性。
37、什么是潜在营养价值的饲料构成特异性和动物特异性?
饲料构成特异性:
由于植酸酶的潜在营养价值是通过饲料中的植酸才能表现出来,就是说植酸酶的效果受植酸水平的影响,即潜在营养价值的高低实质上由植酸的数量决定。
所以,即使相同的植酸酶添加量,在不同饲料原料结构的配方中的表现也不尽相同。
目前弥补的办法是针对几乎所有的配方原料类型分别测定潜在的营养价值,然后取平均数加安全系数,基本上可以满足使用的要求。
动物特异性:
由于潜在营养价值最终是通过动物而表现出来的,受动物的消化道结构和机能的直接影响,植酸酶的添加量也不尽相同。
所以,同样数量的植酸酶在不同动物中就表现出不同的潜在营养价值。
38、潜在营养价值的数据是怎样获得的?
磷的潜在营养价值是最早确定的。
是使用线性方程计算得到的。
以磷酸氢钙为参照物,选择动物的生产性能(日增重,饲料报酬,产蛋率和磷代谢指标如趾骨灰分等)为指标,用线性方程计算出每一植酸酶单位相当于无机磷的数量(mg)。
钙、能量、蛋白质和氨基酸的潜在营养价值则不同,是通过动物消化实验测定出来的。
一般利用回肠末端消化试验,同时测定添加植酸酶日粮和未添加植酸酶日粮的回肠表观消化率,二组数据之差即为潜在营养价值。
除了能量以外,通常都以%表示。
而能量使用MJ/kg或kcal/kg。
目前公布的数据是各种类型日粮的平均值。
39、植酸酶潜在营养价值数据的可靠性有多大?
潜在营养价值的可靠性由数据的来源及其试验的数量决定。
目前的数据是以平均值表示,用大安全量保证其可靠性,基本上可以满足设计配方的要求。
以后应该不断会有实验数据补充和完善潜在营养价值数据,使可靠性更高。
40、为什么植酸酶的能量潜在价值对饲料成本意义很大?
由于饲料配方中能量所占成本最高,开支最大,而植酸酶能够明显提高猪鸡饲料的表观代谢能值。
所以,利用植酸酶配制等能量水平的日粮时,可以发现饲料成本随之降低,特别是在肉鸡配方中更明显。
因此,有“植酸酶的能量价值胜过蛋白质价值”的说法。
★41、如何理解和利用诺伟磷-5000G的潜在营养价值?
诺伟磷-5000G的潜在营养价值
料别
代谢能Kcal/kg
粗蛋白质
%
赖氨酸
蛋氨酸
胱氨酸
苏氨酸
色氨酸
钙
总磷
有效磷
蛋鸡料
530000
2250
120
10
30
130
1700
2480
2150
蛋鸭料
2500
2180
肉鸡料
1250
1440
猪料
93000
2000
25
50
1480
例1:
诺伟磷在肉鸡饲料中总磷的潜在营养价值为1440%,即每100g植酸酶相当于1440g磷酸氢钙的磷。
计算方法是:
100g*2480%=1440g。
在每吨肉鸡全价饲料中,诺伟磷-5000G最低添加量为80g,则:
80g*1440%=1152g,如果磷酸氢钙含磷量为16%,则80g诺伟磷-5000G能够替代7.2kg磷酸氢钙。
计算方法为:
1152g/16%=7200g。
例2:
诺伟磷-5000G在肉鸡饲料中代谢能的潜在营养价值为530000Kcal/kg。
由于诺伟磷-5000G在肉鸡全价料的最低推荐添加量为0.008%,所以实际提供的代谢能值为0.008%*530000=42Kcal/kg。
如果是用饲料配方优化设计软件来设计饲料配方,使用时只需将诺伟磷-5000G当作一种饲料原料,将其潜在营养价值输入原料数据库,确定饲养标准和选择原料,限制诺伟磷-5000G的用量,优化配方即可。
利用配方优化设计软件使用潜在营养价值的注意事项请参见第42问。
对于技术条件差,没有配备计算机和配方优化设计软件的中小型企业,可使用简易计算公式来计算。
参见第44、45问。
42、利用配方优化设计软件使用潜在营养价值要注意什么?
1)必须按动物种类预先设置固定植酸酶的添加量,防止因植酸酶的高营养价值造成计算机自动优先选择而加大添加量而出现错误。
2)由于潜在营养价值的动物特异性,在建立基础数据库输入植酸酶的潜在营养价值时,要注意按动物种类将植酸酶细分。
如植酸酶—肉鸡,植酸酶—猪等。
3)建立基础数据库输入植酸酶的营养价值时,软件必须能够接受大于100%
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