药物分析实验讲义本科Word文档格式.docx

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容量瓶，洗瓶、阿贝折光计等

材料：

10%氯化钾注射液，氯化钾，乙醚等。

四、实验内容

（一）氯化钾折光率因素（F）的测定

1．配制标准氯化钾溶液取130℃干燥至恒温的氯化钾（A．R）约5g，精密称定，用水溶解后，转移至50ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得。

同法共配制四份标准氯化钾溶液。

2．测定折光率‘用已校正的阿贝折光计按折光计的用法中所述的测定方法，分别测定以上配制的四份标准氯化钾溶液的折光率：

并同时测定同温度水的折光率，按实验表l作妤记录，用下式分别计算氯化钾的折光率因素（F）值，并取其平均值为结果。

实验表110%氯化钾溶液的F值

次数

氯化钾注射液浓度%

折光率

同温度水折光率

计算F值

F平均值

1

2

3

4

（二）10%氯化钾注射液的含量测定.

用已校正的阿贝氏折光计，按折光计用法中所述的测定方法，测定氯化钾溶液的折光率，并同时测定同温度水的折光率。

按下式计算氯化钾溶液的含量或标示量的百分比。

含量百分比计算公式：

标示量的百分比计算公式：

《中国药典》2000年版规定本品含氯化钾（KCI）应为标示量的95.0%~105.0%。

五、注意事项

1．本教材所指的水，除另有规定外，均系指纯化水。

2．测定标准溶液或供试液的折光率时，每份实验需要三次读数，三次读数相差不能大于0.0002，取其平均值为测定的折光率。

3．因温度对折光率有影响，故测定时最好采用恒温水浴装置。

如恒温水浴温度为20℃，则测定时可不再测同温度水的折光率。

实验二葡萄糖中的杂质检查

一、目的和要求

1．了解药物中一般杂质检查的目的和意义

2．掌握葡萄糖中一般杂质检查的项目和限量计算方法。

3．掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷岩限量检查的基本原理和方法。

（一）氯化物

氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银微粒而显白色浑浊，再与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下用同法处理生成的氯化银浑浊程度相比较，测定供试品中氯化物的限量。

Cl-+AgNO3→AgCl↓（白色）

（二）硫酸盐

硫酸盐在盐酸溶液中与氯化钡作用生成硫酸钡白色浑浊，与一定量的标准硫酸钾溶液在同一操作条件下生成的浑浊比较，以判断供试品中硫酸盐的量是否超过限量。

SO42-十BaCl2→BaSO4↓（白色）

（三）铁盐

铁盐在盐酸溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性的硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色，以判断供试品中的铁盐是否超过限量。

Fe3++6SCN—→[Fe（SCN）6]3-（红色）

（四）重金属

药物中重金属离子在pH3.5条件下与CH3CSNH2的分解产物H2S反应，生成黄色至棕黑色的硫化物均匀悬浮液，与一定量的标准Pb2+在相同条件下反应生成的有色悬浮液比色，以判断供试品中的重金属是否超过限量。

CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2S

Pb2+十H2S→PbS↓

（五）砷盐检查（古蔡氏法）

是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐作用生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，以判断药物中砷盐的限量。

AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↓+3Zn2++3H2O

AsH3+2HgBr2→2HBr+AsH（HgBr）2（黄色）

AsH3+3HgBr2→3HBr+As（HgBr）3（棕色）

五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成砷化氢的速度较三价砷慢，故在反应液中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，碘化钾被氧化生成碘，碘又可被氯化亚锡还原为碘离子。

AsO43++2I-+2H+→AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2+→AsO33-+Sn4++H2O

I2+Sn2+→2I-+Sn4+

溶液中的碘离子，又可与反应中产生的锌离子生成稳定的配离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行。

（六）干燥失重

药品的干燥失重系指药品在规定的条件下，经干燥减失的质量，主要是指水分，也包括其他挥发性的物质，如乙醇等。

三、仪器与材料

干燥箱，称量瓶，电子天平，量筒，烧杯，纳氏比色管等

氯化钠，盐酸，硫酸钾，氯化钡，过硫酸铵，硫氰酸铵，硝酸铅，醋酸铵，硫代乙酰胺，硝酸铅，氢氧化钠，蒸馏水等

取本品0.60g，查教材加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml;

溶液如不澄清，应滤过;

置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。

另取标准氯化钠溶液（10μgCl-/m1）6.0ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得对照溶液。

于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，供试溶液不得比对照溶液更浓。

（二）硫酸盐检查

取本品2.0g，加水溶解使成40ml（如显碱性，可滴加盐酸使遇石蕊试纸显中性反应）。

溶液如不澄清，滤过置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml，加25%氯化钡溶液5ml，加水稀释使成50ml，摇匀，放置10min，如发生浑浊，与对照标准液[取标准硫酸钾（100μgSO4/ml）溶液2ml，置50ml纳氏比色管中，加水稀释使成40ml，加稀盐酸2ml，加25%氯化钡溶液5ml，加水稀释使成50ml，摇匀，放置10min]比较，不得更浓（0.010%）。

（三）铁盐检查

取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成45ml，加30%硫氰酸铵溶液3ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液（10μgFe/ml）2.0ml，用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。

（四）重金属检查

取25ml纳氏比色管两支。

一管加标准铅溶液（10μgPb/ml）2.0ml，醋酸盐缓冲液2ml，加水至25ml，另一管取本品4.0g，加水23ml溶解。

加pH3.5醋酸盐缓冲液2ml。

两管各加硫代乙酸胺试液各2ml。

摇匀，放置2分钟。

同置白纸上，自上面透视，供试液显出的颜色不得更深。

含重金属不得过百万分之五（5ppm）。

（五）砷盐检查（古蔡法）

取本品2.0g，置检砷瓶中，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溴化钾-溴试液0.5ml，置水浴上加热约20min。

使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾-溴试液适量，并随时补充蒸发的水分，放冷。

加盐酸5ml与水适量使成28ml。

加碘化钾试液5ml，及酸性氯化亚锡试液5滴在室温放置10分钟后，加锌粒2g。

迅速将瓶塞塞紧（瓶塞上已安装好装有醋酸铅棉花及溴化汞试纸的检砷管）保持反应温度在25~40℃间（视反应快慢而定，但不应该超过40℃）。

1小时后，取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与标准砷溶液（1μgAs/ml）一定量制成的标准砷斑比较。

颜色不得更深。

含砷量不得过百万分之一（1ppm）。

标准砷斑的制备：

精密吸取标准砷溶液2ml，置另一检砷瓶中，加盐酸5ml及水21ml，照上述方法，自“加碘化钾试液5ml......”起依法操作即得。

（六）干燥失重测定

取本品约1g（如为较大的结晶，应先迅速捣碎使成2mm以下的小粒），置已干燥至恒重的扁形称量瓶中，加盖，精密称定。

然后在105℃干燥至恒重，减失重量不得超过9.5%。

（供试品干燥时，应平铺在扁形称量瓶中，厚度不可超过5mm，如为疏松物质，厚度不可超过10mm。

放入烘箱或干燥器进行干燥时，应将瓶盖取下，置称量瓶旁，或将瓶盖半开进行干燥；

取出时，须将称量瓶盖好。

置烘箱内干燥的供试品，应在干燥后取出置干燥器中放冷至室温，然后称定重量。

）

1．限度检查应遵循平行操作原则，即供试管与对照管的实验条件应尽可能一致，包括实验用具的选择、试剂与试液的量取方法及加入顺序，反应时间的长短等。

2．比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀。

比色方法是将两管同置白色背景上，从侧面或自上而下观察；

比浊方法是将两管同置于黑色背景上，从上向下垂直观察。

所用比色管刻度高低差异不应超过2mm，使用过的比色管应及时清洗、注意不能用毛刷刷洗，可用重铬酸钾洗液浸泡。

3．一般情况下供试品取样1份进行检查即可。

如结果不符合规定或在限度边缘时，应对供试品和对照管各复检2份，方可判定。

实验三阿司匹林片的分析

1．掌握片剂分析的特点及赋形剂的干扰与排除方法。

2．掌握阿司匹林片鉴别、检查、含量测定的原理及方法。

（一）鉴别

阿司匹林分子具有酯结构，与碳酸钠试液共热，水解生成水杨酸钠和醋酸钠，前者可与三氯化铁试液生成紫堇色化合物，后者放冷后用稀硫酸酸化，析出白色的水杨酸沉淀，并产生醋酸的臭气。

（二）杂质检查

1．水杨酸与三氯化铁试液显紫堇色。

2．检查溶出度是利用在碱性条件下，加热，使阿司匹林水解，测定水解产物水杨酸的吸收度，按

为265计算水杨酸的含量，故用阿司匹林的含量表示溶出度时应乘以换算因数。

换算因数=MASP／MSA=1.304。

（3）含量测定

为消除阿司匹林水解产物水杨酸，醋酸及稳定剂枸椽酸、酒石酸对含量测定的影响故采用两步滴定法。

第一次滴定：

CH3COOH＋NaOH→CH3COONa＋H2O

第二次滴定：

1．取本品约0.lg，加水l0ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液l滴，即显紫堇色。

2．取本品约0.5g，加碳酸钠试液l0ml，煮沸2分钟后，放冷，加过量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并发生醋酸的臭气。

（二）杂志检查

1．游离水杨酸

取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林0.1g），加乙醇lml溶解后，加冷水适量使成50ml，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液[取盐酸液（1mol/L）1ml，加硫酸铁铵指示液2ml后，再加水适量使成100ml]1ml，摇匀；

30秒钟内如显色，与对照液（精密称取水杨酸0.1g，置1000ml量瓶中，加冰醋酸1ml，摇匀，再加水适量至刻度，摇匀，精密量取1.5ml，加无水乙醇2ml与5％乙醇使成50ml，再加上述新制的稀硫酸铁铵溶液1ml，摇匀）比较，不得更深。

2．溶出度

取本品1片，照溶出度测定法第一法（2010年药典二部附录），以稀盐酸24ml加水至1000ml为溶剂，转篮转速为每分钟100±

5转，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml滤过，精密量取续滤液3ml置50ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠液5ml，置水浴中煮沸5分钟，放冷，加硫酸液2.5ml；

并加水稀释至刻度，摇匀。

照分光光度法，在303nm的波长处测定吸收度，按C7H6O3的吸收系数

）为265计算，再乘以1.304，计算出每片的溶出量；

不得少于标示量的80%。

其他应符合片剂项下有关的各项规定。

取本品10片，精密称定，研细，精密称出适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，振摇，使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40ml，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，有硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。

每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。

本品含阿司匹林（C9H8O4）应为标示量的95.0～105.0％。

实验四葡萄糖氯化钠注射液的质量检查

1.通过对葡萄糖氯化钠注射液的全面分析，进一步树立药品质量的全面观点。

2.熟练使用旋光仪，掌握旋光法测定葡萄糖含量的操作并能进行有关计算。

3．熟悉用法杨司法测定氯化钠含量的操作并能进行有关计算。

4.熟悉用紫外分光光度计检查药物中杂质的操作。

1．葡萄糖本品分子中含有醛式结构而具还原性，能还原碱性酒石酸铜试液（斐林试液）生成氧化亚铜红色沉淀。

2．氯化钠

（1）利用氯化物与硝酸银生成白色凝乳状氯化银沉淀，沉淀能溶于氨试液中，若再加硝酸，沉淀复生成。

（2）利用钠盐与醋酸氧铀锌试液反应，生成醋酸氧铀锌钠的黄色沉淀：

（3）利用钠盐的焰色反应呈持久亮黄色。

采用紫外分光法检查5-羟甲基糖醛。

检查是利用5-羟甲基糖醛在284nm波长处有最大吸收。

本品每l00ml中含0.2g葡萄糖的水溶液在284nm波长处的吸收度不得大于0.25。

（三）含量测定

1．葡萄糖采用旋光法测定其含量。

根据测得供试品的旋光度与2.0852相乘，计算出葡萄糖在供试品中的百分比浓度和标示量的百分比。

2．氯化钠采用法杨司法测定其含量。

利用氯化钠与硝酸银定量反应生成氯化银，采用吸附指示剂确定终点。

常用的吸附指示剂有荧光黄、曙红等。

酸度计，旋光仪，水浴锅，烧杯，纳氏比色管，量筒，纳氏比色管等。

葡萄糖氯化钠注射液，硫酸铜，酒石酸钾钠，硝酸，浓氨水，冰醋酸等。

（一）性状：

观察葡萄糖氯化钠注射液的性状，本品应为无色的澄明液体。

（二）鉴别

1．葡萄糖鉴别：

取本品，缓缓漓入温热的碱性酒石酸铜试液，生成氧化亚铜红色沉淀。

2．氯化钠的鉴别

（1）取本品数滴，加稀硝酸及硝酸银试液各1滴，即产生白色凝乳状沉淀，分离，沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成。

（2）取本品1ml，加醋酸氧铀锌试液数滴，即发生黄色沉淀。

（3）取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。

（三）杂质检查

《中国药典》2000年版规定本品应检查酸度、5-羟甲基糠醛、重金属、不溶性微粒、细菌内毒素及其他有关注射剂项下的各项规定。

本次实验仅做酸度检查。

酸度《中国药典》2000年版规定本品的pH应为3.5～5.5。

采用玻璃电极为指示电极，用电位法进行测定。

（1）pH计的调节与校准：

按pH计的使用步骤经预热、温度补偿调节、量程调节等，再将邻苯二甲酸氢钾缓冲液（pH=4.00）置小烧杯中，接通pH计测量电路，按照该测定温度下标准缓冲液的pH，调节定位调节器旋钮，使仪器上的读数与标准缓冲液的pH一致。

（2）测定注射液的pH：

将葡萄糖氯化钠注射液置小烧杯中，按照pH值测定方法进行测定，读取其pH。

2．5-羟甲基糠醛

（1）测定液的配制：

精密量取本品1ml（约相当于葡萄糖0.lg）置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

（2）测定：

取配制的测定液盛入lcm厚的石英池中，置预先校正好的紫外分光光度计的试样室中，以水为空白，在284nm波长处测定其吸收度，‘重复三次，取其平均值。

《中国药典》2000年版规定，其吸收度不得大于0.25。

（3）杂质限量计算：

根据5-羟甲基糠醛的

（284nm）为145，测定液允许的吸收度不得大于0.25，可由下式计算出5-羟甲基糠醛的限量：

则l00ml测定液中的5-羟甲基糠醛的最大允许量为：

因测定液中葡萄糖浓度为10%，取量为1ml，稀释为50ml制得，则1ml葡萄糖原液中5-羟甲基糠醛的最大允许量即为0.00172g。

故本品中5-羟甲基糠醛的限量为：

3．重金属《中国药典》2000年版规定本品含重金属不得过5%。

（1）供试液制取：

取本品30ml（约相当于葡萄糖3g）于蒸发皿中，置水浴上蒸发至约20ml，放冷，转入纳氏比色管中，如醋酸盐缓冲液（pH=3.5）2ml，再加水准确使成25ml，摇匀即得。

（2）对照液制取：

，于另一支纳氏比色管中，精密加入1.5ml标准铅液，再加醋酸盐缓冲液（pH=3.5）2ml与水适量准确使成25ml，摇匀，即得。

（3）于供试液和对照液中分别加入硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，要求供试液所显的颜色不得比对照液的颜色更深。

（四）含量测定

《中国药典》2000年版规定本品（l00ml：

葡萄糖10g，氯化钠0.9g）含葡萄糖（C6H12O6·

H2O）与氯化钠（NaCI）均应为标示量的95.0%～105.0%。

葡萄糖含量测定

（1）操作：

精密量取本品25ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，依法测定该溶液的旋光度，与2.0852相乘（测定管长度为ldm）或与1.0425相乘（测定管长度为2dm），即得供试品中含有C6H12O6·

H2O的重量（g）。

按下式求出该注射液中葡萄糖标示量的百分比。

（2）计算：

（五）注意事项

1．碱性酒石酸铜试液是由碱性酒石酸铜试液I（硫酸铜溶液）与碱性酒石酸铜试液Ⅱ（碱性酒石酸钾钠溶液）于临用前等量混合而得。

2．钠盐与醋酸氧铀锌试液的反应若不明显，可用玻棒磨擦管内壁，即可产生浑浊。

3．酸度检查是以玻璃电极为指示电极，甘汞电极为参比电极。

测定中尤其要注意玻璃电极的使用及维护。

4．紫外分光法检查5~羟甲基糠醛时，由于仪器的不同，测定操作亦可能有所差异。

在测定中除应注意光源及波长的选定外，须用溶剂做空白，调吸收度为零，以消除吸收池及溶剂可能带来的误差。

因是直接通过所测吸收度值来判断5一羟甲基糠醛的限量，未采取与标准品比较法，故所测吸收度值应准确，仪器必须先校正合格后，方可进行测定。

5．重金属检查是取30ml葡萄糖氯化钠注射液（相当于3g葡萄糖），其体积已超过重金属检查中规定的总体积（27ml），故应将注射液置水浴上蒸发浓缩至20ml后，再行检查。

蒸发时，不可将蒸发皿直火加热，以防局部有炭化现象而影响比色结果。

实验五对乙酰氨基酚片的质量分析

1.通过对乙酰氨基酚的全面分析，进一步树立药品质量的全面观点。

2.熟练掌握对乙酰氨基酚含量的操作并能进行有关计算。

3．熟悉对乙酰氨基酚中杂质检查的方法。

1.对乙酰氨基酚遇到三氯化铁即显蓝紫色。

对乙酰氨基酚+FeCl3蓝紫色化合物

2.对乙酰氨基酚具有芳伯氨基，可以发生重氮化-偶合反应。

亚硝酸碱性条件下+β-萘酚

对乙酰氨基酚+重氮盐有色偶氮染料

3.对乙酰氨基酚的测定原理

三、实验内容

（一）性状

本品为白色结晶或结晶性粉末，无臭，味微苦。

本品在热水和乙醇中易溶，在丙酮中溶解，在水中略溶。

（2）鉴别

1.取本品的水溶液加三氯化铁试液，即显蓝紫色。

2.取本品约0.1g，加稀盐酸0.5ml，置水浴中加热40分钟，放冷；

取0.5ml，滴加亚硝酸钠5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性β-萘酚试液2ml，摇匀，即显红色。

（3）杂质检查

1.乙醇溶液澄清度与颜色

取本品1.0g，加乙醇10ml溶解后，溶液应澄清无色；

如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓，如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准液比较，颜色不得更深。

2.对氨基酚

取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀，放置30min；

如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50μg用同一方法制成对照液比较，不得更深（0.005%）。

（四）对乙酰氨基酚的含量测定

药典规定：

按干燥品计算，含对乙酰氨基酚应为98.0~102.0%。

1.精密称取对乙酰氨基酚，研细（约相当于对乙酰氨基酚0.25g），置锥形瓶中，加入盐酸液（1→2）20ml，加溴化钾3g溶解后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，在不低于20℃的温度下，用0.lmol/L亚硝酸钠液迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管尖端提出液面，用少量的水将尖端洗涤，洗液并入溶液中继续缓缓滴定，至用细玻棒蘸取溶液少许，划过涂有含碘化钾淀粉指示液的白瓷板上，即显蓝色的条痕，停止滴定，5分钟后再蘸取少许，划过一次，如仍显蓝色的条痕，即达终点。

每lml的0.lmol/L亚硝酸钠液相当于15.12mg的C8H9NO2。

按下式计算每片含对乙酰氨基酚的克数：

式中：

为亚硝酸钠液的实际浓度，0.1为亚硝酸钠液的理论浓度

2.取本品约40mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml容量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照紫外—可见分光光度法，在257nm的波长处测定吸光度，按C8H9NO2的吸收系数（

）为715计算，即得。

实验六维生素C注射液的质量检查

本实验为设计性实验，使同学自己根据所学知识设计实验方案，然后进行实验操作，完成维生素C注射液的鉴别及含量测定。

要求：

1.让学生根据所学有关专业知识按照中国药典的格式自己设计维生素C鉴别的方法（设计两种方法）及应准备用的仪器、试药、试剂。

2.让学生根据所学有关专业知识按照中国药典的格式自己设计维生素C用碘量法、折光率、旋光度法等方法测定维生素C注射液含量实验方案和操作方法（设计两种方法）及应准备用的仪器、试药、试剂。

3.写出预习报告。

包括实验目的，原理，实验应用的仪器、试药试剂，操作步骤，计算公式，及实验操作中应注意的问题。

然后经教师指导进行实验，写出实验报告。

二、实验内容

同学根据所学有关专业知识按照中国药典的格式自己设计用维生素C鉴别、含量测定的实验方案和操作方法（每项操作设计两种方法）及应准备用的仪器、试药、试剂。

经教师指导完成实验，写出实验报告。