临床检验基础实验指导要点Word文档下载推荐.docx

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2、消毒干棉球。

3、75％乙醇棉球

4、20u1吸管

【操作方法】

1、采血部位以左手无名指为宜。

2、轻轻按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮肤，待干。

3、紧捏刺血部位，用无菌刺血针迅速刺入皮肤约2—3mm，让血液自然流出，如血液不流出可在其周围轻轻加压，但不要过重。

4、用干棉球擦去第一滴血、按需要依次采血。

5、采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。

6、血红蛋白吸管的使用：

在采血前首先练习一下吸管使用，使其达到得心应手。

二、血红蛋白（微量）吸管的使用

【原理】挤压乳胶吸头，使刻度微量吸管内产生负压而吸取液体。

1.微量吸管、乳胶吸头、干脱脂棉。

2.试管、试管架。

3.2ml吸管、吸耳球。

1.洗涤液3管（蒸馏水、95%乙醇、乙醚）。

2.生理盐水。

【操作方法】

1.准备吸管及试管将乳胶吸头套在微量吸管上，注意两者连接处应严密不漏气。

试管上应贴上患者姓名或门诊/住院号标签。

2.加稀释液取试管1支，加生理盐水2ml。

3.持管吸血右手拇指和中指夹住吸管与吸头交接处，示指盖住吸头小孔。

三指轻微用力，排出适量的气体使管内形成负压。

将管尖插入抗凝血，三指慢慢松开，吸取抗凝血到所需刻度后抬起示指。

注意吸血时管尖始终不要离开液面，以免吸入气泡；

也不要用力过度，将血液吸入乳胶吸头内。

4.拭净余血用干脱脂棉沿吸管口方向拭净余血，并检查血量是否达到规定刻度。

5.释放血液将吸管插入含生理盐水的试管底部，慢慢排出吸管内的血液，再用上清液冲洗管内余血3次，最后将管内残余液体完全排净。

6.洗涤试管依次用蒸馏水洗净，95%（V/V）乙醇脱水，乙醚干燥。

如为一次性微量吸管，可省略该步骤。

【注意事项】

1.准备吸管吸管和胶吸头连接处应严密不漏气，挤压吸头力度应适宜。

2.持管吸血吸血时动作宜慢，防止血液吸入乳胶吸头内；

避免产生气泡。

3.拭净余血吸血后拭净管外余血以保证血量准确。

三、静脉采血法

【原理】使用注射器或负压采血器刺入浅静脉后，用负压吸取所需血量。

1.消毒棉签。

2.压脉带（止血带）2~3mm口径的橡皮软管。

3.一次性消毒注射器

（1）针头：

30~40mm长，18号、19号、20号带斜面。

若采集5岁以下儿童的血液标本，使用23号或25号针。

（2）注射器：

可选用2ml、5ml、10ml或20ml注射器。

4.一次性负压采血器。

5.试管含或不含抗凝剂，并应有采血量的标记（如5ml刻度）。

6.垫枕。

30g/L碘酊、75%（V/V）乙醇或碘伏。

1.抗凝剂（根据实验项目选择所需的抗凝剂）。

1.准备试管仔细阅读受检者申请单，决定采血量，准备每个试验所需的试管，并应按一定顺序排列，如患者仅做凝血试验一项，最初1ml血液必须丢弃。

如做红细胞沉降率测定，需取试管1支，加入适量抗凝剂（109mmol/L枸橼酸钠0.4ml）。

2.标记试管在试管上贴上标签，注明患者姓名、项目名称、采集日期、门诊或住院号等。

3.消毒双手采血前，操作人员应用肥皂或消毒液和水洗手。

4.选择静脉采血前，要求受检者坐在实验台前。

将前臂放在实验台上，掌心向上，并在肘下放一垫枕。

卧床受检者要求前臂伸展，暴露穿刺部位。

常用采血位置是肘前静脉，因其粗大、容易辨认。

5.检查注射器打开一次性注射器包装，左手持针头下座，右手持针筒。

将针头和针筒紧密连接，并使针头斜面对准针筒刻度，抽拉针栓检查有无阻塞和漏气。

最后排尽注射器中的空气，备用。

使用前，保持针头无菌状态。

6.消毒皮肤用30g/L碘酊棉签自所选静脉穿刺处从内向外，顺时针方向消毒皮肤，待碘酊挥发后，再用75%乙醇棉签以同样方式拭去碘迹；

或以碘伏消毒，待干。

7.扎压脉带在采血部位上端约6cm处，将压脉带绕手臂一圈打一活结，压脉带末端向上。

要求患者握紧和放松拳头几次，使静脉隆起。

压脉带应能减缓远端静脉血液回流，但又不能紧到压迫动脉血流。

8.穿刺皮肤取下针头无菌帽，以左手拇指固定静脉穿刺部位下端，右手持注射器，示指固定针头下座。

保持针头斜面和针筒刻度向上，沿静脉走向使针头与皮肤成30°

角斜行快速刺入皮肤，然后成5°

角向前穿破静脉壁进入静脉腔。

确认穿刺入静脉中心位置，并沿着静脉走向将针头推入10~15mm。

9.抽血用左手缓缓向后拉注射器针栓，见少量回血后，松开压脉带。

然后，向后拉针栓到达采血量刻度。

若使用一次性负压采血器，当针头进入血管后会见少量回血，将负压采血管插入试管托内采血针中，因试管内负压作用，血液自动流入试管，到达采血量刻度后拔出试管即可。

10.止血嘱受检者松拳，用消毒棉签压住穿刺点，迅速向后拔出针头。

继续紧按住消毒棉签3min。

11.放血从注射器上取下针头。

将血液沿试管壁缓缓注入，到达标记处。

含抗凝剂试管需迅速轻轻颠倒混匀几次。

1.采血准备采血前应向患者耐心解释，以消除不必要的疑虑和恐惧心理。

如遇个别患者进针时或采血后发生眩晕，应立即拔出针头让其平卧休息片刻，即可恢复。

必要时可给患者嗅吸芳香酊、针刺（或拇指压掐）人中和合谷等穴位。

若因低血糖诱发眩晕，可立即静注葡萄糖或嘱患者服糖水。

如有其它情况，应立即找医生共同处理。

2.准备试管不同检查项目可根据试验需要选择不同的抗凝剂及与血液的稀释比例，如血细胞计数及MCV、MPV等参数测定时应选择EDTA-K2抗凝，不要用肝素抗凝，因为肝素抗凝会影响RBC和PLT的计数结果。

3.选择静脉如果肥胖患者的静脉暴露不明显，可以左手示指经碘酊、乙醇或碘伏消毒后，在采血部位触摸，发现静脉走向后凭手感的方向与深度试探性穿刺。

4.检查注射器静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固，针筒内是否有空气和水分。

所用针头应锐利、光滑、通气，针筒不漏气。

抽血时针栓只能向外抽，不能向静脉内推，以免形成空气栓塞，造成严重后果。

5.扎压脉带采静脉血时压脉带压迫时间不能过长、绑扎不能过紧，以避免淤血和血液浓缩，最好不超过1min，否则会影响某些实验结果，如造成血红蛋白和血细胞比容增高。

6.穿刺皮肤不能从静脉侧面进针。

针头进入静脉的感觉是：

皮肤有一定阻力，而静脉壁阻力较小，更富弹性。

7.抽血血液加入抗凝试管中应与抗凝剂充分混匀以达到抗凝目的；

无须抗凝时则将血液直接注入试管中。

要防止血液标本溶血，因为溶血后标本不仅血红细胞数和血细胞比容减低，还会使血清（浆）化学成分发生变化。

造成溶血的原因有：

注射器和容器不干燥、不清洁；

压脉带捆扎时间太久，淤血时间长；

穿刺过程中损伤组织过多；

抽血速度太快；

血液注入容器时未取下针头或用力推出时产生大量气泡；

抗凝血用力震荡；

离心时速度过快等。

8.止血不能弯曲手臂，以免形成血肿。

9.放血颠倒混匀时，需防止溶血和泡沫产生。

切忌震荡试管。

10.标本检测与保存血液标本采集后应立即送检，实验室接到标本后应尽快地检查。

抗凝静脉血可稳定8~12h，如不能及时测定，应将其置于较稳定的环境中，如4℃冰箱，减少和降低条件的变化。

测定前，将其从冰箱内取出，恢复至室温状态，混匀后再测定。

要注意有的试验标本不宜4℃保存，如PLT计数。

用于生物化学检查的标本若不能及时检查，应将血清或血浆与细胞分离，进行适当的处理。

11.一次性器材只能使用一次，不能反复使用。

四、血红蛋白测定（Hemoglobin简称Hb）

氰化高铁血红蛋白法

【原理】

血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与氰离子（CN-）结合生成稳定的氰化高铁血红蛋白，用光电比色法根据标准曲线求得每升血液的血红蛋白克数。

【试剂】

HicN试剂

【操作方法】

取试剂5毫升加入血液20立方毫米混匀置5分钟后用540nm波长，试剂为空白调0点比色，读取光密度，查标准曲线得结果。

【报告方式】HbXXXg/L

【参考区间】

男性成人：

120—160g／L

女性成人：

110—150g／L

新生儿：

170—200g／L

五、红细胞计数（redbloodcell简称RBC）

——显微镜直接计数（试管法）

【原理】

一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数。

【血细胞计数板】

血细胞计数板中央有两个刻度平台（即血细胞计数池），每个平台划分为9个大方格，每个大方格的面积为1平方毫米，加特制盖片的深度为0.1毫米，故每l大方格的容积为0.1立方毫米。

四角的四个大方格又等分为16个中方格，作为计数白细胞用。

中央大方格又等分为25个中方格，每个中方格又等分为16个小方格，共为400个小方格，作为计数红细胞和血小板之用。

计数台之上覆以特制的盖片（厚度0.4mm，表面平直，质地较硬）后构成计数室。

每个大格方格体积是0.1mm（1mm×

1mm×

0.1mm），参阅图1、2及3。

l、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管内。

2、用血红蛋白吸管吸血至l0立方毫米处。

3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，吸上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。

4、用玻棒取混悬液少量，充入计数池内。

5、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。

红细胞计数的区域是中心大方格中的5个中方格（正中一个和四角各一个）。

计数方法：

长城迂回法。

计数原则：

凡压在中方格边线（双线）上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。

即“数上不数下，数左不数右”的原则进行。

图4红细胞计数的方式

【计算】

红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×

5×

10×

201×

106或

红细胞数/L=5个中方格内红细胞数÷

100×

1012

式中×

55个中方格换算成1个大方格

×

101个大方格容积为0.1ul，换算成1.0uL。

201血液的稀释倍数

106由u1换算成L

【报告方式】RBCXXX×

1012/L

1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝块应重新采血，同时做血红蛋白测定、红细胞计数、白细胞计数和分类计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。

2、充液前，红细胞悬液要充分摇匀，红细胞悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡，亦不可有多余液体外溢。

3、中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每中方格红细胞数约为80—100个，各中方格内之红细胞相近，如悬殊过大（超过10个细胞以上的）应重混匀再充填。

【参考区间】男性成人：

（4—5.5）×

女性成人：

（3.5—5）×

（6—7）×

实验二

血液一般检验

（二）GeneralExaminationofBlood

【内容】

1、白细胞计数及分类计数

2、各类白细胞的形态（示教）

【目的要求】

1、掌握白细胞直接计数，分类计数的标本送检要求、方法及参考值，并换算出白细胞绝对值。

2、掌握血液涂片的制作与瑞氏染色方法。

3、熟悉并能识别三类五种白细胞的正常形态及常见异常白细胞的形态。

血细胞计数板、载物片、推片、手揿计数器、染色架、吸耳球、三棱针、酒精棉球及干棉球，血红蛋白吸管，小试管，显微镜。

1、白细胞稀释液，冰醋酸2毫升，蒸馏水加至98ml，l％亚甲兰（或结晶紫）数滴显色借以区别其他稀释液。

2、瑞氏染液、缓冲液或蒸馏水、香柏油。

瑞氏—姬姆萨复合染色液

取瑞氏染粉1g，姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸出上层染液。

再加少量甲醇继续研磨，再吸出上层染液，如此连续几次，共用甲醇500ml，收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟共5天，以后存放一周即能使用。

【实验】

一、白细胞计数（Whiteb1oodcell简称WBC）

血液经稀酸稀释后，成熟红细胞全部被溶解，注入计数池后，在显微镜下计数白细胞。

1、取白细胞稀释液0.38毫升，置于小试管内。

2、用血红蛋白吸管吸血液至20立方毫米处，擦去管尖多余的血液，将血液迅速放入稀释液中再吸上清液冲洗几次，立即混匀。

3、待液体呈褐色后，摇匀用玻棒充填入计数池内（与红细胞计数操作相同）。

4、静置2-3分钟，低倍镜下计数四角四个大方格中白细胞总数。

计数原则压边线的白细胞，仍为数上不数下，数左不数右。

4个大方格内白细胞总数

白细胞数/L=————————————×

20×

106

4

式中÷

4为每个大方格（即0.1u1）内白细胞平均数

101个大方格容积为0.1ul，换算成lul

20血液稀释倍数

106由lul换算成1L

【报告方式】WBCXXX×

109/L

成人：

（4—10）×

新生／L（15—20）×

6个月至2岁：

（11—12）×

1、与红细胞计数的注意事项相同

2、计数时，两次重复计数误差不得超过10%。

3、在某些病理情况下，血中可出现大量有核红细胞以致影响白细胞计数，此时应通过分类计数将有核红细胞从总数中减去。

【校正公式】

白细胞校正数=X×

100／100+Y

X=未校正前白细胞数

Y=在分类计数时，计数100个白细胞的同时，计数到的有核细胞数

例：

某标本校正前“有核细胞数”为10×

109/L，血片分类计数100个白细胞过程中见有核红细胞20％个。

则校正后的白细胞数应为：

100

白细胞数／L=10×

109/L×

——————＝8．3×

100+20

二、白细胞分类计数（Differentcount简称DC）

（一）血片制备法

1、自手指端取血一小滴置于玻片一端，把推片的一端放在血滴前方，将推片略向后移，并左右移动一二次使血滴散开。

2、使推片与玻片之间形成30-40度角，均匀向前推成一个厚薄均匀，头、体尾分明的血片。

见图5。

（二）瑞氏染色法

瑞氏染色液中含有甲醇，起固定细胞的作用，其中还含有碱性染料（美兰及小量天青）和酸性染料（伊红），在一定PH下细胞蛋白质因等电点不同，可选择性的吸附上述染料而着色。

【染色方法】

1、待血片干燥后，于血膜上滴加瑞氏染色液数滴以盖住血膜为宜，静置约一分钟。

2、再加等量的缓冲液与染液混匀（边加边用洗耳球打气或口吹），静置8—10分钟，染色的时间随室外温度升高而适当缩短，反之可延长。

3、用自来水缓缓的将染料液冲去，干后油镜分类。

【分类方法】

1、将染好的血片先用低倍镜观察选染色良好，厚薄适宜，细胞分布均匀处，以油镜进行分类。

2、在血片的体尾交界处滴加香柏油一滴，用油镜对好视野，以曲径推动血片，向尾部上下迂回移动，如图6白细胞分类的镜检顺序。

同时将遇到的各类白细胞分别记录下来至总数达100个为止，每类的白细胞数目即为其百分率，一般来说粒细胞、单核细胞以及体积大的细胞多分布于涂片上下边缘及其尾端，淋巴细胞多分布于体部。

（图6）

3、各种白细胞绝对值计算，由每立方毫米内的白细胞总数，乘以该白细胞的百分数，

即得出绝对值。

如：

白细胞数为10×

109/L，淋巴细胞为30％，淋巴细胞的绝对值为：

10×

30％=3×

【报告方式】以国际单位（比值）报告

嗜中性杆状核粒细胞（neutrophilicstabgranulocyteNst）0—5％国际单位0—0.05

嗜中性分叶核粒细胞（NNeutrophil）50—70％国际单位0.5—0.7

嗜酸性粒细胞（EEosinophil）0.5—5％国际单位0.005—0-05

嗜碱性粒细胞（BBasophil）0—1％，国际单位0—0.01

淋巴细胞（LLymphocyte）20—40％，国际单位0.2—0.4

单核细胞（MMonocyte）3-8％，国际单位0.03—0.08

【注意事项】

l、在白细胞分类计数时，如遇到幼稚红细胞，要注意不要将此种细胞包括在白细胞的百分数内，应另行报告。

2、儿童的白细胞分类计数，其正常值随年龄的大小而不同，特别是淋巴细胞的变化较大。

新生儿及2岁以内的幼儿淋巴细胞可高达0.7—0.8，3—5岁时，淋巴细胞约为0.42—0．6，6—8岁时为0.5左右，8—14岁则接近成人。

三、白细胞常见的病理形态（示教）

中毒颗粒、空泡变性、大小不均等。

实验三

血液一般检验（三）GeneralExaminationofBlood

【内容】

1、网织红细胞计数

2、红细胞比积测定（示教）

3、红细胞沉降率测定（示教）

1、掌握网织红细胞计数标本送检要求、原理和方法。

2、熟悉红细胞比积测定及红细胞沉降率检测原理和方法。

3、了解红细胞比积测定及红细胞沉降率检测标本送检要求。

一、网织红细胞计数（RecitudocytoCount）

（试管法）

网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之间的尚未完全成熟的红细胞，由于其胞浆中尚残存核糖体等嗜碱性物质，因而用煌焦油兰染液进行活体染色后，胞浆中可见浅兰绿色和深兰色的网状结构，故名为网织红细胞。

10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液：

煌焦油蓝1g，枸橼酸钠0.4g，氯化钠0.85g溶于双蒸馏水l00ml中，过滤后备用。

取干燥洁净小试管一只，滴加煌焦油兰生理盐水溶液一滴，加入病人指端血液3-4滴（贫血者多加几滴）混匀，l0分钟再混匀取一小滴推成薄膜片，干燥后用油镜检查，分类计数1000个红细胞，求出其中网织红细胞百分率，以国际单位（比值）或绝对值报告。

1、血膜宜薄，以免使细胞重叠、挤缩而影响计数。

2、用二甲苯擦片后，可使结果偏低。

【报告方式】

网织红细胞百分率：

以国际单位（比值）报告

网织红细胞绝对值：

XXX×

成人0.5—1.5％平均1％，国际单位0.005—0.015

新生儿3—6％国际单位0.03—0.06

成人网织红细胞绝对值（2.4—8.4万／uL）国际单位（24—84）×

【网织红细胞绝对数的计算】

%网织红细胞×

红细胞数/立方毫米

网织红细胞绝对数值=——————————————————

100

举例：

设网织红细胞百分率为1％，红细胞数为500万／立方毫米，则

1%1×

500万/立方毫米

网织红细胞绝对数值=—————————————=5万/ul

【附注】

如因视野太小。

其中红细胞太多，以至视觉混乱，无法数清时，可在接目镜内，先接上一个中间开一个矩形的硬圆纸片，将视野缩小（见图7甲）或先粘上四根头发（见图7乙），以便计数。

二、红细胞比容

（DeterminationofHematocritHct）测定（示教）

将定量的抗凝血液用一定速度和时间离心沉淀后，观察压实红细胞与全血体积的比值（L/L），称为红细胞比容，它的多少与红细胞数量和大小有关．

1、静脉穿刺取血2mL，放入肝素抗凝剂（肝素钠0.2mg）的小试管内充分摇匀，防止凝固。

2、用长的毛细管取上述血液将其插到温氏血管底部，将血徐徐注入至“0”刻度处。

3、置离心机内，以每分钟3000转的速度离心30分钟。

4、取出温氏管观察红细胞高度并加以记录，再将温氏管同上述速度再离心5分钟，至红细胞不再下降为止，乘以0.01即为每升血液中红细胞体积的升数，以L/L为单位报告结果。

【报告方式】0.×

成年男性0.42—0.49L／L（42—49％）

成年女性0.37—0.43L／L（37—43％）

三、红细胞沉降率

（DeterminationofErythrocytesedimentationrate简称ESR）

测定（示教）

红细胞具有细胞膜的胶体性质，除具有一定的表面张力以外，在红细胞外有一层水化膜使红细胞互相隔离，红细胞表面带阴电荷，因此红细胞互相排斥，而不易粘合下沉。

球蛋白与纤维蛋白原带正电荷，因此二者增多或减少，都会使红细胞沉降率发生变化。

离体抗凝血液置于特制刻度测定管内，垂直立于室温中，记时1小时观察上层血浆高度以红细胞下沉的毫米数值报告。

109mmol/L（32g/L）枸橼酸钠溶液：

取含二分子结晶水枸橼酸钠（分子量294.12）3.2g，用蒸馏水溶解，稀释至100ml。

室温保存不能超过2周.

测定方法很多，现介绍魏（Mestergren）氏法

在13mm×

l00mm试管中先加3.8％枸橼酸钠0.4毫升，静脉取血1.6毫升注入上述试管内，立即混匀，用血沉管吸取抗凝血至刻度“0”处，垂直固定于血沉架上，在室温置1小时。

【报告方式】×

毫米／小时

男性<

15毫米／小时

女性<

20毫米／小时

l、注射器、试管、血沉管均应保持干净干燥，以免溶血。

2、血沉管必须完全垂直，否则血沉加快，影响结果的准确性。

3、血液与抗凝剂的比例应要准确，充分混合，并应在抽血后3小时内测定。

4、测定时温度应在18—250C室温进行，温度过高血沉加快，过低则变慢。

实验四

出血与血栓