维生素D3联合高脂饲料建立大鼠动脉粥样硬化模型重点Word格式.docx
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2结果
2.1大鼠存活率及体重变化实验结束时,大鼠存活率对照组100%,高脂组85%,模型组78%。
各组大鼠
基金项目:
国家教育部留学归国人员启动基金资助课题(编号:
1999-363;
吉林大学创新基金资助课题(2002
作者单位:
130021长春市,吉林大学药学院实验药学与毒理学
教研室
通信作者:
任立群
E-mail:
renlq@jlu.edu.cn
维生素D3联合高脂饲料建立大鼠动脉粥样硬化模型
赵娟
李相军孙波高海成任立群
摘
要
目的:
探索维生素D3(VD3联合高脂饲料快速建立大鼠动脉粥样硬化模型的方法。
方法:
健康雄
性Wistar大鼠60只,分为对照组、高脂组、模型组。
4周后,检测血清中Ca2+、TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量,制作胸主动及肝脏切片进行形态学观察。
结果:
模型组与对照组和高脂组相比,各血清学指标均明显升高(P﹤0.05;
模型组胸主动脉内膜下可见明显的钙化、平滑肌细胞增生及泡沫样细胞,而高脂组大鼠胸主动脉未见明显变化;
模型组肝细胞内有大量的脂滴空泡,肝系数明显高于高脂组和对照组(P﹤0.05。
结论:
大鼠腹腔注射VD370万U/kg,联合高脂饲料喂养,可快速成功复制大鼠动脉粥样硬化模型。
关键词
动脉粥样硬化;
VD3;
模型;
大鼠
EstablishmentofaratmodelofatherosclerosisusingvitaminD3andhigh-fatdietZHAOJuan,LIXiang-jun,SUNBo,GAOHai-cheng,RENLi-qun.DepartmentofExperimentalPharmacologyandToxicology,SchoolofPharmacy,JilinUniversity,Changchun130021,China
Correspondingauthor:
RENLi-qunE-mail:
【Abstract】ObjectiveToexploreanefficientmethodtoestablisharatmodelofatherosclerosisusingvitaminD3andhigh-fatdiet.MethodsSixtyhealthyWistarratswererandomlydividedinto3groups:
controlgroup,high-fatdietgroupandmodelgroup.Fourweekslater,calciumion,triglyeride,totalcholesterol,high-densitylipoproteinandlow-densitylipoproteininratserumweredetected,andthesectionsofthoracicaortaandlivertissuewerepreparedformorphologyobservation.ResultsThelevelsofserologicindexesinmodelgroupwereobviouslyhigherthanthoseincontrolgroupandinhigh-fatdietgroup(P<
0.05;
Obviouscalcification,smoothmusclecellproliferationandfoamcellscouldbeobservedunderaorticintimainmodelgroup.Lotsoffatdropvacuoleswereappearedinthelivercellsinthemodelgroup,andthelivercoefficientinmodelgroupwasobviouslyhigherthanthatincontrolgroupandinhigh-fatdietgroup(P<
0.05.ConclusionTheratmodelofatherosclerosiscanbesuccessfullyestablishedusingvitaminD3combinedwithhigh-fatdiet.
【Keywords】Atherosclerosis;
VitaminD3;
Model;
Rat
3569
实用医学杂志年第卷第期
在实验前体重无明显差异,对照组的大鼠体重随饲养时间的增加而增长。
高脂组和模型组大鼠体重在1周和2周均增加,到第3周和第4周体重明显减少,模型组减少幅度大于高脂组(P﹤0.05。
见表1。
2.2
血脂和血钙浓度的变化4周后,与对照组相比,其他两组动物血清Ca2+、TG、TC、HDL-C、LDL-C均明显升高(P﹤0.05。
模型组的动物血清Ca2+、TC及LDL-C,明显高于高脂组和对照组,组间比较有统计学意义(P﹤0.05。
见表2。
2.3
胸主动脉组织学改变胸主动脉HE染色观察结果发现,对照组内膜、中膜和外膜分界清楚,血管内皮完整,中膜可见梭形平滑肌细胞,弹力纤维层结构清晰完整,呈环行排列,外膜为疏松结缔组织;
高脂组可见内膜内皮向管腔突起;
中膜平滑肌细胞增生,排列紊乱,外膜为薄层疏松结缔组织;
模型组主动脉内膜下可见明显的钙化、炎细胞浸润、平滑肌细胞增生及泡沫样细胞,弹力纤维发生变性、断裂和崩解,中膜萎缩,出现典型动脉粥样硬化病理变化。
见图1。
表1
大鼠体重变化
±
s,g
组别对照组高脂组模型组
实验前
189±
8.69188±
8.44188±
8.53
1周194±
6.1
243±
10.30*226±
14.04*2周233±
7.22
252±
10.08*236±
15.95*3周261±
11.71
227±
6.98202±
17.01*
4周302±
10.27221±
9.36*179±
13.91
注:
与对照组比较,*P<
0.05
表2
血脂、血钙浓度的变化
组别对照组高脂组模型组Ca2+(mmol/L2.45±
0.122.63±
0.01
*
3.77±
0.37*TG(mg/L0.41±
0.090.74±
0.06
1.65±
0.33*TC(mg/L
1.17±
0.1412.22±
0.59*
16.26±
2.58*HDL-C(mg/L1.01±
0.231.76±
0.08
2.11±
0.11*
LDL-C(mg/L
0.22±
0.19
9.75±
0.51*12.33±
1.60*
s
2.4
肝脏形态学及肝系数改变对照组肝脏形态规则,边缘锐利,色红有光泽,HE染色观察发现,肝细胞排列正常,细胞核大而圆、居中,胞浆中无脂肪滴,无炎症细胞浸润。
高脂组和模型组大鼠肝脏体积增大,包膜紧张,边缘较钝,质地略软,切面均呈淡黄色而稍隆起,包膜外翻,触之油腻感。
光镜下肝细胞排列紊乱,高脂组肝细胞内出现多少不等的小脂肪空泡,多分布在核的周围;
模型组肝细胞内脂滴空泡大而多,散布在整个胞浆中,甚至融合成大空泡,将细胞核挤压至一边,肝细胞出现重度的脂肪变性和大量的炎症细胞浸润(图2。
模型组的肝系数明显高于高脂组和正常组,组间差异比较有统计学意义(P﹤0.05,见图3。
图2
肝脏形态学的改变
A
B
C
图1胸主动脉组织学改变
A为对照组;
B为高脂组;
C为模型组a;
图2同
BC
3570
实用医学杂志年第卷第期3讨论
AS是危害人类健康的一类疾病,人类死亡的头号杀手,因此AS发病机制和治疗对策的探究成了医学
研究的热点。
传统的学说如脂质渗入学说、巨噬细胞受体缺失学说、血栓源学说、血流动力学学说、中层平滑肌细胞增生学说、内皮细胞损伤学说及损伤应答和炎症学说等,其中任意一种学说均不能全面解释AS的发生与发展。
选择合适的动物成功建立动物模型是研究AS发病机制及探讨治疗措施的重要条件。
大鼠虽具有较强的抗AS特性,但它作为实验动物,具有以下三点优点:
(1饲养方便、成本低廉、获取容易、生存能力强、死亡率低,应用范围广泛;
(2它属杂食类动物,生理解剖与人类相似;
(3重要的是可用于实验研究的商用抗体种类丰富[7-8]。
鉴于以上的三点优点,本实验把大鼠作为AS模型的实验动物。
有学者认为单纯大剂量VD3或高胆固醇饲料均无法形成典型AS[9-13]。
因此,本实验在传统的高胆固醇饲料中不但增加了丙基硫氧嘧啶(抑制甲状腺功能、胆酸钠(促进胆固醇吸收及白糖(既克服了丙基硫氧嘧啶的苦味又能促进大鼠的血糖的升高,而且再通过腹腔注射VD370万U/kg作为钙离子诱导剂引起动脉钙超负荷的方法建立AS模型。
实验结果表明,VD3联合高脂饲料能导致血清中的Ca2+、TG、TC、HDL-C及LDL-C升高,引起的动脉病变早期损伤内皮细胞,破坏动脉管壁内皮的完整性,形成动脉粥样硬化。
由此得出结论:
用高脂饲料及VD370万U/kg可快速诱发大鼠AS。
而且此方法建立的AS模型与以往的AS模型相比具有:
实验周期短、动物存活率高及模型稳定性高的优点。
在实验过程中还必须注意两点:
(1胆固醇含量
过高可导致大鼠死亡,所以在实验中要不断调整高脂饲料中胆固醇的含量,增加动物存活率;
(2大鼠有用爪子刨食浪费饲料的习惯,在给予饲料时采取每日少给多次。
综上所述,大鼠作为研究AS的模型动物已显露出独特的优势,用VD3联合高脂饲料4周后可快速建立大鼠AS模型。
但由于大鼠受环境、遗传等多方面因素的影响,使这个模型在血脂水平、病变形态、药物反应等方面都与人类AS发生、发展过程及病变形态存在着差别。
随着人们对AS的发病机制认识不断加深,AS模型的建立方法也会不断改进,将来一定会在短时间内建立更精确模仿人类病理生理的AS模型。
4
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(收稿:
2009-07-06
编辑:
吴淑金
[1]
[2][3][4][5]
[6][7][8]
[9][10][11][12][13]76543210
对照组
高脂组
模型组
肝系数(%
图3大鼠肝系数改变
3571
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