糖精钠的检测精编版Word格式文档下载.docx
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如用毛细管柱,能取得更好的峰形和灵敏度,但其稳定性及特异性不如填充柱。
一般可用非极性毛细管柱,0.530mm内径,10-15m长度。
色谱条件可能需用程序升温。
在气相色谱仪上的出峰次序为先出山梨酸,后出苯甲酸。
糖精钠不能直接用气相色谱进行检测,必须衍生化后才能汽化进样。
5选用液相色谱仪的注意事项
按照GB/T5009.29,流动相应为5:
95的甲醇:
0.02M醋酸铵溶液,但是这个比例仅是个参考值,我们在工作中应根据实际情况进行调节。
为什么用甲醇溶液?
甲醇有两个作用,
(1)防腐,液相色谱柱最怕流动相长菌,尤其霉菌。
甲醇可使蛋白质变性,有杀菌作用。
(2)调节流动相极性,这是最重要的一点。
甲醇在溶液中比例的较小变化都会使苯甲酸、山梨酸、糖精钠的保留时间发生明显的改变,因此可以通过改变流动相中甲醇含量,以调节这几个组分的出峰和分离,以得到较理想的色谱图。
5:
95是一个通用的比例,如减少甲醇含量,苯甲酸、山梨酸、糖精钠的出峰时间变慢,扩散效应增大,峰形较差,但这三组分的分离情况较好。
如增加甲醇含量,苯甲酸、山梨酸、糖精钠的出峰时间提前,扩散效应较小,峰形尖锐,但这三组分的分离情况可能受影响,产生重叠。
在选择条件时,只能通过实验手段,如配制3:
97,4:
96,5:
95,6:
96,7:
93的流动相,综合考虑分离效果和分离时间选择最佳比例。
不同柱的最适比例不同,举例来说,色谱科公司的液相柱最适比例为4:
96,而岛津公司液相柱的最佳比例为7:
93。
就是同一根柱,一年前和一年后的极性也会有变化,需调节溶液配比。
为什么使用0.02M醋酸铵溶液?
加入醋酸铵是为了调节离子强度,使待测物的峰形不致于变坏。
如果单独检测苯甲酸和糖精钠,加不加醋酸铵没有什么关系,都可以得到较好的峰形;
但是检测山梨酸时流动相一定要加醋酸铵,否则得不到一个完整的色谱峰,峰形呈破裂状。
醋酸铵溶液浓度不需严格控制,0.01M、0.02M、0.04M均可。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠在液相上的出峰次序很有特点。
在流动相5:
95及以下比例时,次序是苯甲酸、山梨酸、糖精钠(注意一下气相的出峰次序),逐步增大甲醇含量,苯甲酸、山梨酸的出峰时间逐步提前,而糖精钠是出峰时间迅速提前,随着甲醇比例的逐步增大(15%-30%),原先在最后出峰的糖精钠集次和前面的山梨酸、山梨酸重叠,并位于最前面,其次序变为糖精钠、苯甲酸、山梨酸。
再提高甲醇浓度,次序不变。
用高甲醇比例条件(甲醇15%以上)做出的三种标准物质色谱图峰形较好,出峰时间也较快,但做实际样品时干扰较大;
因此建议尽量使用低甲醇比例条件(甲醇5%左右)。
6苯甲酸、山梨酸超标时的判断
苯甲酸、山梨酸超标的样品较多,由于它们往往牵涉到一批货物是否合格,因此责任重大。
由于该方法定量较准确,因此遇到超标样品时应将精力集中于定性方面。
如同时有气相色谱仪和液相色谱仪,建议用这两种性质相差较大的仪器进行对照,如定量结果差不多,即可确认。
如只有气相色谱仪,应利用其在填充柱保留时间稳定的特性,同时进五针标准液和五针样品液(注:
峰面积应差不多,否则需对一方按比例稀释),如标准和样品液的保留时间相差时间超过1秒,可认为不是。
(如进针的技术不过关,请不要做此实验)
如用液相色谱仪,当检测器为二极管阵列检测器时,根据保留时间和紫外吸收图结合定性,当只有紫外检测器时,改检测波长为220nm,230nm,250nm,重复进标准和样品液,由标准和样品在不同波长的峰高比值看是否吻合。
如有微生物检测手段,可加样品于有菌培养基中,观察有无抑菌现象,如无抑菌现象则无防腐剂。
不是很推荐用双柱法,因为有时柱极性相差不大,反而会影响最终判断。
7糖精钠超标时的判断
当检测糖精钠超标时,除了采用二极管阵列检测器或波长验证,还可以利用糖精钠的荧光特性,用荧光检测器进行验证。
荧光条件是激发波长为277nm,荧光波长为410nm。
只有当用荧光检测器和用紫外检测器做出的定量结果相差不多,才可以判断为是。
还有一个简单粗糙、却也行之有效的验证方法,即感官法。
糖精钠是一种甜味剂,用舌头可以感觉到它的甜味,如果含量超标,一定能尝出来。
8标准溶液的配制贮存问题
苯甲酸、山梨酸、糖精钠的标准溶液如用水、乙醇作基体,一般几个月后会严重降解,。
如用甲醇溶解再放于冰箱冷冻层,可保持稳定一两年。
因此推荐用甲醇作溶剂。
在配制标准溶液时,初学者常犯的错误多为用甲醇溶解苯甲酸钠,用水溶解苯甲酸,晃了半天才发现怎么也不没溶解。
应该用弱碱性水溶解苯甲酸钠、山梨酸钾,用甲醇溶解苯甲酸、山梨酸。
9苯甲酸、山梨酸的应用范围
首先应注意到,并不是所有食品都需要加入防腐剂,只有那些富含营养物质,且需要长时间暴露于空气的才有这样的需要,否则对厂家来说会增加不必要的成本。
酱油、酱料、咸菜、浓缩果汁等由于开封后不可能短期内吃完,月饼等需在货架上摆放,如不加防腐剂很快会发霉变质,有添加防腐剂的必要。
而利乐装或易拉罐装的饮料由于很快可以食用完毕,即在细菌大量繁殖前己被消化了,因而没有添加的必要。
苯甲酸、山梨酸如果要起到防腐的作用,含量就不能太低。
如果我们检测样品时只有几个ppm的浓度,有可能是从原料中带来的或由其它添加剂转化来的,而不是厂家出于防腐目的加入的。
苯甲酸、山梨酸也只是防腐剂中的两种。
并不是所有需要加入防腐剂的食品都会添加苯甲酸、山梨酸,有可能使用防霉剂或其它种类的防腐剂,或自行规定需冷藏(如某些月饼)。
因此有些食品检测不出也属正常。
另外,我们应该比较清楚地理解苯甲酸与苯甲酸钠、山梨酸与山梨酸钾之间的关系。
在食品中添加防腐剂通常以苯甲酸钠、山梨酸钾形式加入,它们不易汽化,易溶于水,但不溶于甲醇等有机试剂;
而苯甲酸、山梨酸易汽化,易溶于有机试剂,但是几乎不溶于水。
检测时要注意有机酸及其盐类之间的转换。
GB/T16345-1996
前 言
本标准非等效采用国外标准。
本标准的附录A是提示的附录。
本标准由卫生部卫生监督司提出。
本标准负责起草单位:
卫生部食品卫生监督检验所负责起草;
参加起草单位:
北京市卫生防疫站,中国预防医学科学院环境卫生监测所。
本标准主要起草人:
杨祖英、张平伟、孙淳、姚孝元、郑兰波。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。
中华人民共和国国家标准
饮料中乙酰磺胺酸钾(安赛蜜)的测定 GB/T16345-1996
DeterninationofAcesulfameKinBeverage
----------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 范围
本标准规定了饮料中乙酰磺胺酸钾的测定方法。
本标准适用于汽水、可乐型饮料、果汁、果茶等食品中乙酰磺胺酸钾的
测定。
也适用于糖精钠的测定。
本法取样量为2.5g时,最低检出限为乙酰磺胺酸
钾、糖精钠各50mg/kg(L)。
2 原理
样品中乙酰磺胺酸钾、糖精钠经高效液相反相柱C18分离后,以保留时间
定性,峰高或峰面积定量。
3 试剂
有机溶剂需重蒸
3.1 甲醇:
分析纯
3.2 乙腈:
3.3 0.02mol/L硫酸铵溶液:
称取硫酸铵2.642g,加水溶解至1000mL。
3.4 硫酸溶液:
10%。
3.5 中性氧化铝:
层析用,100~200目。
3.6 乙酰磺胺酸钾,糖精钠标准储备液:
精密称取乙酰磺胺酸钾、糖精钠各0.1000g,
用移动相溶解后移入100mL容量瓶中,并用移动相稀释至刻度,即含乙酰磺胺酸
钾、糖精钠各1mg/mL的溶液。
3.7 乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准使用液:
吸取乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准储备液2mL
于50mL容量瓶,加移动相至刻然后分别吸取此液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于
10mL容量瓶中,各加移动相至刻度,即得各含乙酰磺胺酸钾,糖精钠0.004mg/mL、
0.008mg/mL、0.012mg/mL、0.016mg/mL、0.020mg/mL的混合标准液系列。
3.3 移动相:
0.02M硫酸铵(740~800)+甲醇(170~800)+甲醇(170~150)+乙腈(90~50)
+10%H2SO4(1mL)。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪
4.2 超声清洗仪(溶剂脱气用)
4.3 离心机
4.4 抽滤瓶
4.5 G3耐酸漏斗
4.6 微孔滤膜0.45μm
4.7 层析柱,用10mL注射器筒代替较好,内装3cm高的中性氧化铝。
5 分析步骤
5.1 样品处理
5.1.1 汽水:
将样品温热,搅拌除去二氧化碳或超声脱气。
吸取样品2.5mL于25mL
容量瓶中。
加移动相至刻度,摇匀后,溶液通过微孔滤膜过滤,滤液备作HPLC分
析用。
5.1.2 可乐型饮料:
将样品温热,搅拌除去二氧化碳或超声脱气,吸取已除去二氧
化碳的样品2.5mL,通过中性氧化铝柱,待样品液流至柱表面时,用移动相洗脱,
收集25mL洗脱液,摇匀后超声脱气,此液备作HPLC分析用。
5.1.3 果茶、果汁类食品
吸取2.5mL样品,加水约20mL混匀后,离心15分钟(4000转/分),上清液全
部转入中性氧化铝柱,待水溶液流至柱表面时,用移动相洗脱。
收集洗脱液25mL,
混匀后,超声脱气,此液作HPLC分析用。
5.2 测定
5.2.1 HPLC参考条件
分析柱:
大连化物所生产的SpherisorbC18、4.6×
150mm。
粒度5μm。
移动相:
0.02M硫酸铵(740~800)+甲醇(170~150)+乙腈(90~50)+10%H2SO4(1mL)。
波长:
214μm
流速:
0.7mL/分
5.2.2 标准曲线:
分别进含乙酰磺胺酸钾、糖精钠0.004mg/mL、0.008mg/mL、
0.012mg/mL、0.016mg/mL、0.020mg/mL混合标准溶液各10μL,进行HPLC分析,
然后以峰面积为纵坐标,以乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量为横坐标,画标准曲线。
5.2.3 样品测定:
进5.2项下的样品处理后的样品溶液10μL,测定其峰面积,从标
准曲线查得测定液中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的量。
HPLC色谱图见下:
见附图
1 乙酰磺胺酸钾;
2 糖精钠;
3 咖啡因;
4 天门冬酰苯丙氨酸甲酯
6 结果
6.1 计算
C×
1000
X=------------------------------------
V2
m×
--------×
V1
式中:
X—样品中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量g/kg或g/L。
C—由标准曲线上查得进样液中乙酰碘胺酸钾、糖精钠的量,mg/mL。
V1—样品稀释液总体积、mL。
V2—HPLC测定进进样的体积,mL。
m—样品质量,g。
6.2 本标准检出限
仪器检出限0.04μg;
方法检出限:
乙酰磺胺酸钾、糖精钠各0.004mg/mL(g),
标准曲线范围乙酰磺胺酸钾、糖精钠各为0.004mg/mL~0.020mg/mL。
方法回收率
为88.0~105%,平均回收率为92.12%、SX=4.8,相对标准差(R.S.D)=5.0%。
附录A
(提示的附录)
方法评价
A1:
方法评价
本标准规定了用高效液相测定饮料中乙酰磺胺酸钾、糖精钠,并能同时
测定咖啡因、知门冬酰苯丙氨酸甲酯,且简化样品处理,国内外未见同时测定这
四种物质的报导。
A2 方法验证
A2.1 柱层析洗脱液的研究
样品通过中性氧化铝小柱后,比较了水、移动相两种洗脱剂,结果表明
水不能洗脱乙酰磺胺酸钾、糖精钠,而移动相能洗脱乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖
啡因、天门冬酰苯丙氨酸甲酯。
A2.2 乙酰磺胺酸钾、糖精钠在中性氧化铝柱上流出曲线
吸取100mg/L的加标乙酰磺胺酸钾、糖精钠的可乐,M(过已用少量水润湿
的中性氧化铝小柱,然后以流动相洗脱,连续收集7管,每管5mL,用HPLC测定每
管中乙酰磺胺酸钾、糖精钠量。
结果表明,从第4管起均未检出乙酰磺胺酸钾、糖
精钠。
A2.3 HPLC移动相的研究
本标准研究了醋酸铵缓冲液+甲醇、醋酸铵缓冲液+异丙醇系统,硫酸铵
缓冲液+甲醇系统,试验结果表明硫酸铵缓冲液+甲醇系统能分离乙酰磺胺酸钾、
糖精钠、咖啡因、天门冬酰苯丙氨酸甲酯。
见图及表。
移动相试验表
┌─────────────┬────────────────────┐
│移动相│Rt│
││乙酰磺糖精钠咖啡因天门冬酰苯│
││氨酸钾丙氨酸甲酯│
├─────────────┼────────────────────┤
│0.02m硫酸胺+甲醇+10%硫酸│3.0103.6379.00210.870│
│
(1)700+300+1│2.8703.47911.19713.582│
│
(2)720+280+l│3.2924.62213.96016.320│
│(3)750+250+1││
│0.02硫酸胺+甲+乙+10%硫酸│3.3294.4359.73414.520│
│(4)750+200+50+1│3.9695.0509.91515.620│
│(5)740+170+90+1││
└─────────────┴────────────────────┘
以上表看出、移动相(5)较好。
A2.4 标准曲线
在实验条件下,取不同浓度的乙酰磺胺酸钾、糖精钠混合标准使用注
0.004mg/mL、0.008mg/mL、0.012mg/mL、0.016mg/mL、0.020mg/mL各进样10μL,
整百,整千加减法教学反思进行HPLC分析,然后以峰面积对乙酰磺胺酸钾、糖精钠浓度作图,画标准曲线。
教育调查报告小学乙酰磺胺酸钾的回归方程r=0.998,Y=99264.4+3.34×
107X;
糖精钠的回归方程为
探索发现生命尔雅答案r=0.998,Y=161944+7.26×
107X。
乙酰磺胺酸钾、糖精钠的线性范围是0~0.020mg/mL。
有机化学试题及答案A2.5 回收试验
校长在家长会上的讲话 选择不含乙酰磺胺酸钾、糖精钠的汽水、果汁、果茶进行加标试验,分别
教学科研加入50mg/L,100mg/L的两个不同浓度,依法操作、测得回收率为88~105%,平均
改革开放的历史性标志是()。
回收率为92.12%,Sx=4.8,相对标准差(R.S.D)=5.0%。
A3 验证结果
本标准委托北京市卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所
验证,验证时采用已加入100mg/L的乙酰磺胺酸钾、糖精钠的可乐饮料为统一样
品。
A=单位平均测得值为:
乙酰磺胺酸钾浓度为105.6mg/L、回收率为
105.6%,Sx=4.97,相对标准差(R.S.D)为4.71%;
糖精钠测得浓度为98.3mg/L,回
收率98%,标准差Sx为2.45,O`对标准偏差(R.S.D)为2.49%。
教师的情绪管理
武术期末考试试卷
教师教育理念一句话----------------------------------------------------
(完)
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