PBS缓冲液的配方Word文档格式.docx

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6.85149

6.94555

7.03862

7.13367

7.22872

7.32377

7.419ml81ml

7.51684

7.61387

7.710.50.5

7.88.591.5

7.9793

8.05.394.7

分子生物学常用溶液配制

2008-8-25热门指数:

3471

一、分子生物学常用贮存液的配制

1．30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】将29g丙烯酰胺和1gN，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。

加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。

用滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。

【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。

称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。

一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman1号滤纸过滤以纯化之。

在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。

2．40%丙烯酰胺

【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20gN，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。

继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。

【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。

3．放线菌素D溶液

【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中，1:

10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。

放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。

【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。

只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。

4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液

【配制方法】在0.8ml水中溶解60mgATP,用0.1mol/LNaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃

5．10mol/L乙酸酰溶液

【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。

6．10%过硫酸铵溶液

【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。

7．BCIP溶液

【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃

8．2×

BES缓冲盐溶液

【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6gNaCl和0.027gNa2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。

9．1mol/LCaCl2溶液

【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54gCaCl2?

6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。

【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。

10．2.5mol/LCaCl2溶液

【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2?

6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液

【配制方法】用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。

【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。

12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液

【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/lTris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。

碱基波长（nm）消化系数（ε）[L/（mol?

cm）]

A2591.54×

104

G2531.37×

C2719.10×

103

T2607.40×

比色杯光径为1cm时,吸光度=εM

13．0.5mol/lEDTA（pH8.0）溶液

【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?

2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20gNaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。

【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。

14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）

【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

【注意】小心：

溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。

15．2×

HEPES缓冲盐溶液

【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2PO4?

2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/lNaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。

用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。

16．IPTG溶液

【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2gIPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

17．1mol/L乙酸镁溶液

【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。

18．1mol/LMgCl2溶液

【配制方法】在800ml水中溶解203.4gMgCl2?

6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。

【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。

19．β-巯基乙醇（BME）溶液

【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。

【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。

20．NBT溶液

【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

21．酚/氯仿溶液

【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris?

HCl（pH7.6）抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/lTris?

HCl（pH=7.6）液层,保存于4℃。

【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。

所有操作均应在化学通风橱中进行。

与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液

【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。

如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。

【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。

一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。

凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

PMSF在水溶液中不稳定。

应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。

PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。

pH值为8.0时,20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>

8.6）并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。

23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液

【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2（1034×

105Pa）高压下蒸气灭菌20min。

保存于室温。

24．1mol/L乙酸钾（pH=7.5）溶液

【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。

25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）

【配制方法】在60ml5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液

【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。

27．5mol/LNaCl溶液

【配制方法】在800ml水中溶解292.2gNaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。

28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液

【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。

【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。

29．20×

SSC溶液

【配制方法】在800ml水中溶解175.3gNaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/lNaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

30．20×

SSPE溶液

【配制方法】在800ml水中溶解17.5gNaCl、27.6gNaH2PO4?

H2O和7.4gEDTA,用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml10ml/LNaOH）,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

31．100%三氯乙酸溶液

【配制方法】在装有500gTCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。

32．1mol/LTris溶液

【配制方法】在800ml水中溶解121.91gTris碱,加入浓HCl调节pH值至所需值。

pHHCl7.470ml7.660ml8.042ml

应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

【注意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。

尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。

Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。

例如：

0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。

33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/lTris）

【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2（1.034×

105Pa）高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。

34．X-gal溶液

【配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。

用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。

保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。

X-gal溶液无须过滤除菌。

二、常用抗生素溶液

抗生素贮存液a工作浓度

浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒

氨苄青霉素50mg/ml（溶于水）-20℃20μg/ml60μg/ml

羧苄青霉素50mg/ml（溶于水）-20℃20μg/ml60μg/ml

氯霉素34mg/ml（溶于乙醇）-20℃25μg/ml170μg/ml

卡那霉素10mg/ml（溶于水）-20℃10μg/ml50μg/ml

链霉素10mg/ml（溶于水）-20℃10μg/ml50μg/ml

四环素b5mg/ml（溶于乙醇）-20℃10μg/ml50μg/ml

a：

以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。

所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

b：

镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。

三、常用的电泳缓冲液

缓冲液使用液浓贮存液（每升）

Tris-乙酸（TAE）1×

：

0.04mol/LTris-乙酸50×

242gTris碱

　0.001mol/LEDTA57.1ml冰乙酸

　　100ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）

Tris-磷酸（TPE）1×

:

0.09mol/LTris-磷酸10×

10gTris碱

　0.002mol/LEDTA15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）

　　40ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）

Tris-硼酸（TBE）a0.5×

0.045mol/LTris-硼酸5×

54gTris碱

　0.001mol/LEDTA27.5硼酸

　　20ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）

碱性缓冲液b1×

50mmol/LNaOH1×

5ml10mol/LNaOH

　1mmol/LEDTA2ml0.5mmol/LEDTA（pH8.0）

Tris-甘氨酸c1×

25mmol/LTris5×

15.1gTris

　250mmol/L甘氨酸94g苷氨酸（电泳级）（pH8.3）

　0.1%SDS50ml10%SDS（电泳级）

实验室常用技术参数资料

（二）

2003-11-1热门指数:

6468

二、常用缓冲液

　　1．分子克隆常用缓冲液

　　2．磷酸缓冲液

（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※

pH1mol/LK2HPO4（ml）1mol/LKH2PO4（ml）

5.88.591.5

6.013.286.8

6.219.280.8

6.427.872.2

6.638.161.9

6.849.750.3

7.061.538.5

7.271.728.3

7.480.219.8

7.686.613.4

7.890.89.2

8.094.06.2

（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※

pH1mol/LNa2HPO4（ml）1mol/LNaH2PO4（ml）

5.87.992.1

6.012.088.0

6.217.882.2

6.425.574.5

6.635.264.8

6.846.353.7

7.057.742.3

7.268.431.6

7.477.422.6

7.684.515.5

7.889.610.4

8.093.26.8

　　※:

用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：

　　pH=pK’+1g（[质子受体]/[质子供体]）

　　在此，pK’=6.86（25℃）。

　　3．电泳缓冲液

　　测序凝胶加样缓冲液

　　98%去离子甲酰胺

　　10mol/LEDTA（pH8.0）

　　0.025%二甲苯青FF

　　0.025%溴酚蓝

　　甲酰胺：

许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。

不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与DowexXG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。

常用的电泳缓冲液

　　说明：

　　①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×

溶液，出现沉淀后则予以废弃。

　　以片都以1×

TBE作为使用液（即1：

5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。

但0.5×

的使用液已具备足够的缓冲容量。

目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：

10稀释的贮存液作为使用液。

　　进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×

TBE以提供足够的缓冲容量。

　　②碱性电泳缓冲液应现用现配。

　　③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

　　2×

SDS凝胶加样缓冲液：

　　100mmol/LTris?

HCl（6.8）

　　200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）

　　4%SDS（电泳级）

　　0.2%溴酚蓝

　　20%甘油

　　不含DTT的2×

SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。

　　4．凝胶加样缓冲液

缓冲液类型6×

缓冲液贮存温度

Ⅰ0.25%溴酚蓝

4℃

0.25%二甲苯青FF

40%（W/V）蔗糖水溶液

Ⅱ0.25溴酚蓝

室温

15%聚蔗糖（Ficoll400）

Ⅲ0.25%溴酚蓝

30%甘油水溶液

Ⅳ0.25%溴酚蓝

　碱性加样缓冲液:

300mmol/LNaOH

6mmol/LEDTA

Ⅴ18%聚蔗糖（Ficoll400）

0.15%溴甲酚绿

　　使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：

增大样品密度；

以确保DNA均匀进入样品孔内；

使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。

溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。

以0.5×

TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。

在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。

　　选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。

但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。

　　5．各种pH值的Tris缓冲液的配制

各种pH值的Tris缓冲液的配制　

所需pH值（25℃）0.1mol/LHCl的体积

7．145．7

7．244．7

7．343．4

7．442．0

7．540．3

7．638．5

7．736．6

7．834．5

7．932．0

8．029．2

8.126.2

8.222.9

8.319.9

8.417.2

8.514.7

8.612.4

8.710.3

8.88.5

8.97.0

　　某一特定pH值的0.05mol/LTris缓冲液的配制：

将50ml0.1mol/LTris碱溶液与上表所示相应体积（单位：

ml）的0.1ml/LHCl混合，加水将体积调至100ml

（2）温度对50mmol/LTris?

HCl液pH值的影响

4℃25℃37℃

8．17．57．2

8．27．67．3

8．37．77．4

8．47．87．5

8．57．97．6

8．68．07．7

8．78．17．8

8．88．27．9

8．98．38．0

9．08．48．1

9．18．58．2

9．28．68．3

9．38．78．4

9．48．88．5

　　（6）常