小动物活体成像操作说明手册Word文档下载推荐.docx
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满。
此时应停止,不要过分灌注。
顺时针旋紧螺丝帽。
为防止泄漏,请仔细
检查螺丝帽已旋紧。
图7.2氧气阀图7.3蒸发器置于OFF
图7.4氧气压力计,前面板开关ON图7.5拧下蒸发器螺母
图7.6监视最大刻度线
7.3设备操作
步骤一
在开始程序前分别称量两个乙氟醚(Isoflurane)活性炭过滤器(如图7.7),在过滤罐上用不可擦除的标记记录这些信息和日期。
图7.7图7.8步骤1,称量过滤器步骤2,打开排气泵
步骤二
打开前面板上的排气泵的电子开关(如图7.8)确认流速超过每分钟6公升(LPM)。
步骤三
打开高压氧气罐或其它供应源确保氧气供应(如图7.9)注意:
推荐的氧气压力是每平方英寸55磅(或每平方英寸35,65磅之间的任意值,请根据需要选择)。
图7.9图7.10步骤3,打开氧气供应打开成像暗箱的气体开关
步骤四
打开IVIS系统成像暗箱的气体开关(如图7.10,在暗箱右侧)
步骤五
打开XGI-8前面板上的绿色氧气开关。
(如图7.11)
图7.11图7.12步骤5,打开XGI-8氧气开关步骤6,把蒸发器旋钮设置到0,
步骤六
把蒸发器旋钮设置到0,(如图7.12)
步骤七
打开前面板上标记着“IVISFlowon/off”的开关(麻醉气体流向IVIS分支管,如图7.13)使用流量计设置流速。
注意:
使用能使动物处于麻醉状态的最低量麻醉即可,最初建议如需麻醉5只成年鼠使用0.25公升每分钟的流量。
图7.13图7.14步骤7,打开“IVISFlow”步骤8,打开流向感应箱的开关
步骤八
打开标记着“CHAMBEROn/off”的开关(麻醉气体流向感应箱),如图7.14所示。
设置感应箱流量计的流速为1.5公升每分钟。
步骤九
确认“IVISMANIFOLD”的流速,可以根据需要进行调整。
步骤十
关上“IVISMANIFOLD”和“INDUCTIONCHAMBER”的开关。
不要再调整流速计了。
步骤十一
合理设置蒸发器的百分比,典型值是百分之2.5(如图7.15),可以根据需要进行调整。
图7.15图7.16步骤11,设置蒸发器的百分比步骤12,把动物放入感应箱
步骤十二
把动物放置在感应箱内(如图7.16),关上并锁紧箱子。
步骤十三
打开“INDUCTIONCHAMBER”开关,注意,第一次运行的时间是最长的因为要把感应箱和管子充满试剂。
步骤十四
打开“IVISMANIFOLD”开关,等一段时间(通常是二分钟到五分钟之间),麻醉气体到达分支管的锥形鼻塞处,然后把动物从感应箱中拿出来。
步骤十五
在把动物从感应箱拿出之前要关掉“CHAMBEROn/off”开关。
步骤十六
快速的把动物拿出来放在锥形鼻塞处(如图7.17)。
如果先前没把多余不用的分支管堵住,此时用特制的黑色橡胶塞塞住(型号是PN10168)。
图7.17图7.18步骤16,将需要麻醉的动物放置好蒸发器置于OFF步骤十七
为了减少麻醉剂的泄漏,在不移动动物时要把感应箱关紧。
步骤十八
当上述动物过程完成后,把蒸发器设置到关的位置(如图7.18)。
步骤十九
打开“CHAMBEROn/off”开关,让纯氧流进感应箱5分钟。
步骤二十
直到感应箱充满氧气后,关掉“CHAMBEROn/off”开关。
步骤二十一
把氧气罐关上,切断氧气供应。
步骤二十二
打开所有的开关让设备减压。
当IVISMANIFOLD流量计和感应箱流量计的指示球下降到指示管的底部说明XGI,8减压完毕。
步骤二十三
关上XGI,8的氧气开关(如图7.19)。
图7.19步骤23,关闭氧气开关步骤二十四
当流量计停止不动时关掉所有的开关,关上排气泵。
如果需要,准备好以备下次使用。
第八章故障处理
8.1气体泄漏
1)在任何时候检测到XGI,8麻醉系统发生泄漏,使用者应当立刻关闭氧气供
应。
联系龙脉得的技术部获取帮助。
2)使用者可以自己维护系统的其它外部泄漏,如管子和连接处。
但是需要使用
一个合适的泄漏检测装置例如SNOOP来隔绝泄漏源。
3)如果遇到气体减少的情况,但没有检测到泄漏,请检测管子有没有打结和阻
塞。
4)旋紧接口,替换裂的和损坏的管子。
5)如果气体减少怀疑有泄漏,隔绝系统的各部分以减少可能的泄漏,检查经常
操作的部分如管子的连接处或连接到暗箱的管子有没有打结。
8.2动物感应箱的定时更换
假设所有的气体流动正常,没有泄漏。
可能说明需要校准蒸发器或其它XGI-8服务。
8.3更换XGI-8的保险丝
在正常情况下,XGI-8不需要更换保险丝。
如果泵看上去作用效果不显著并且没有声音时,可能需要更换保险丝。
如果需要经常更换保险丝说明XGI,8工作不正常,请联系龙脉得的技术部获取帮助。
1)确认电力供应稳定,可以用以下方法检查,在同一插座上使用另一个差不多
相同功率的设备。
如果工作正常说明电力供应正常。
很有可能是XGI-8保险
丝坏了。
2)更换保险丝,如附录C图示。
3)翘出保险丝屉,更换保险丝。
4)装上保险丝屉和电源接口。
5)如果更换保险丝没有解决问题,请联系龙脉得的技术部获取帮助。
XenogenIVISLuminaII系统
中文简易操作手册中文简易操作手册
IVISLuminaII系统开机
1.启动计算机;
2.开启相机电源,开启主机电源(为在imagingchamber后方),如需荧光检测
开启荧光光源电源;
3.仪器开启后,点选桌面上LivingImage图标,启动程序;
4.启动程序后,系统会要求点选个人ID进入。
若为新使用者,请键入三的英文
字母作为ID名称;
5.画面出现controlpanel,按下“initializeIVISsystem”,启动整套IVIS系统;
-106.待机器完成启始动作后,controlpanel中的温度状态灯号为红色,等候约5
分钟后温度降低,灯号转绿就可进行影像获取工作,此外按下温度灯号也可
以观测目前CCD的温度及设定载台温度。
IVISLuminaII系统关机
一般不建议作关机动作,因为软件会进行每天的背景值侦测作业,所以计算机及主机都不建议关闭。
除非有长时间不会使用到机器,才建议作关机作业。
1.关闭软件:
请点选主画面中“Livingimage”中的“Exit”;
2.依次关闭仪器电源(荧光光源电源,相机电源,主机电源);
3.关闭计算机电源。
Livingimage软件操作
1.将老鼠或样品放入观察箱中关上门后,调整controlpanel中的参数设定。
2.模式选择:
依照样品种类选择“luminenscence”或者“fluorescence”。
3.ExposureTime:
单位有sec及min可选择。
可利用鼠标或是数字键更改数字。
4.Binning:
依所需影像画质选择,Binning数值越高,灵敏度越高但分辨率越低。
6.f/stop光圈:
光圈大小,1>
2>
4>
8,光圈越大,采集光信号越多。
7.Fieldofview:
视野大小选择,共有ABCD四种高度选择。
选择后,系统会自动调整载台高度。
9(调整好参数,按下“acquire”获取图片。
10.如果进行荧光成像,选择相应的激发波长和发射波长。
11(影像获取后,需进行影像分析。
先选择ROI的形状:
有四种ROI可供选择:
Circle,square,contour,grid(Countour为计算机自动圈选,Grid格状适用于microtiterplate)。
12(按下“Create”键,就会在影像上出现ROI圈选区,可利用鼠标调整ROI
的大小及位置。
13(按下“measurement”键,就会获得ROI区域的定量数值。
14.当您完成影像获取后,需储存档案,点击“SaveLivingImageData”。
15(选择“AllLivingImageDataFiles”,此为rawdata,会储存未经任何修改的
档案模式,方便后续定量分析作业。
16(若要读取之前的影像,点击“BrowseLIData”,之后选择欲读取的档案
路径,利用鼠标双重敲击该档案,即可读取。
序列的
设置和
采集:
注:
本指南通
过手动输入的
光谱分离的步
骤。
Living
Image4.0软件版本包括一个autoexposure自动曝光设置和ImagingWizard成像向导。
有关如何使用这两个功能,请参阅各自的快速参考指南。
您还可以在theSpectralUnmixingWizardSetupreferenceguide找到有关的信息。
这些功能旨在尽可能方便用户,我们强烈建议您利用这些优势时,执行这些步骤。
1。
如果您没有使用autoexposure自动曝光,首先用特定的激发和发射波长确定最佳成像时间。
2。
调整曝光时间避免成像饱和-低于60,000但是高于600counts。
3。
单击SequenceSetup,在SequenceEditor中输入序列。
建议的顺序应包括特异激发荧光和背景的序列。
举例说明,AlexaFluor680PeakEx.679nm/Em.702nm
•特定的激发/发射:
Excitation675nm/Emission720-780nm(请记住,激发波长和第一个发射波长要有40-50nm的距离。
)
•背景:
Excitation605nm/Emission660-780nm(我们选择在AlexaFluor达到峰值之前605nm激发背景。
这样光谱分离算法能更特异的识别到两个独立的来源,更有效分离。
在上面的例子中,我们用了一个发射扫描。
这意味着我们要扫描发射光以辨别高峰。
不过,我们也可以使用两个发射滤光片和多个激发光来做激发扫描。
注:
要确保激发和发射光之间的带隙足够大,以便激发光不能通过发射光滤片到达CCD。
至少要有45-50nm的分隔。
这就是为什么我们不用675nm/Emission700nm的配对。
4。
在控制面板中,设置荧光成像的参数(exposuretime,binning,F/stop,excitationfilter,
emissionfilter).
LI4.0有自动曝光功能,请参阅自动曝光快速参考指南AutoexposureQuickReferenceGuide以供参考。
建议您尽可能使用此功能。
光谱分离可以用表面荧光和透射荧光两种模式。
用透射荧光和光谱分离时,先选用于成像的透射点。
参见TransilluminationSequenceSetupQuickReference
Guide设置透射光成像序列。
5。
点击获取序列AcquireSequence.
光
谱
分
离
:
1
。
打
开
图
像
序
列并把Units转成RadiantEfficiency。
在Analyze标签中,选取要分析的图像。
记住要检查每个图像在600-60,000Counts。
如果有饱和的图片或低强度的图片,请取消选择不用于分析。
3。
按StartUnmixing。
“SelectDataMask”窗口将会打开。
选择“Photograph”或“DrawMask”后,紫色代表要分析的区域。
在照片模式下,使用threshold滑块或向上/向下箭头来调整紫色区域大小使之与要分析的对象匹配,注意不要包括图像以外的任何区域。
如果使用DrawMask,只需在分析对象上画一个正方形或椭圆
然后点击下一步Next。
形(如下图所示)。
输入ImagingSubject,如果是老鼠或者电子小鼠,选中Autofluorescence。
选择FoodSignal如果动物没有事先喂alfalfafreefood(不含苜蓿食物)。
6。
选择要分离的探针数,可以通过选择框右上方的绿色加号(+)来添加探针。
从下拉框选择的已知或是未知的探针。
最多可以选择三个探针用于光谱分离。
7。
在MatchProbeLabels复选框将自动标上相应的光谱成分-探针。
8。
UseConstraints标签会自动选择光谱成分有助于光谱分离。
建议使用constraints以协助重建。
不过我们将在本参考指南的初步重建中不使用constraints以演示如何手动输入。
9。
点击完成Finish。
10。
该光谱
分离结果
将出现。
每
幅图像自
动标明,每
个图像的
顶部中心
有标签。
这
里的例子,
有自发荧
光和
AF680。
复
合图像是
自发荧光图像叠加AF680图像用不同的颜色来表示的。
重要提示:
综合形象是纯粹的定性的和无法定量。
光谱图有时很复杂。
设置约束:
有时,你可能无法有效地从荧光背景中分离开信号峰。
这通常发生在特定的信号低,难以背景区分的情况下。
通常是背景在特定的荧光点信号位置是缺失的。
自发荧光应该是均匀分布的,在特定信号所在区也是存在的。
可以通过查看Spectratab来显示结果-注意如何在下端(highpassend)光谱的荧光曲线变平。
由于光谱分离算法没有约束进行初步分析,有时可以应用某些限制来得到较好的分离效果。
有两种方法可以做到这一点,首先是给曲线算法加个初始猜测InitialGuess,并使用这个猜测适应现有数据。
到图像窗口的Spectra标签。
点击绿色+并选择特定的曲线用来适应下拉菜单中的结果。
下拉菜单中列有最常见的激发和发射荧光的曲线。
这将会添加特定的光谱曲线图(注意左边的蓝色曲线)。
选择ToolPalette上的SpectralUnmixing下的Options.
4
请注意第一行对应第一个光
谱成分。
在这个的例子中,我们要
根据添加光谱的形状来用
InitialGuess(Init)来约束第二个光谱AF680。
在第2步添加的曲线现在会出现在下拉菜单中。
选择要使用的约束的曲线。
选择右下方的Update。
选定的曲线将被用来作为“模具”来限定数据,结果就是光谱图下方的信号和背景有了更大的分离。
用这种办法,我们现在可以更有效的分开AF680信号和自发荧光。
现在可通过产生的图像中看到TissueAF一致的信号。
第二种方法是设置一个光谱的HighPass。
信号低于HighPass将会是被归零。
如果你要分离的特定荧光不在我们的软件重视使用这种方法。
要使用特定荧光光谱的起点作为HighPass点。
比如AlexaFluor680,我们会用其光谱的最低点660nm。
1。
选择ToolPalette上的SpectralUnmixing的Optionstab。
在HP
(代表
High
Pass)下,
选择和曲
线开始最
接近的滤
过。
如上
所述,在这里我们选择了660nm。
然后选择Options窗口右下方的Update,这时你可以看到,用已知的信息已经将660nm处归零来重新塑造光谱曲线。
4。
和initialguessconstraint一样,结果就是两个光谱成分的更好的分离,你可以看到在图像上有一个一致的背景荧光信号。
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- 动物 活体 成像 操作 说明 手册