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C正确。
转基因山羊细胞中转入的外源基因必须整合到山羊的基因组(细胞核DNA或线粒体DNA中)才能正常表达,所以人β-酪蛋白基因转录不在细胞质中进行,D错误。
【2015山东卷】36.(12分)
【生物—现代生物科技专题】
治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义。
流程如下:
(1)过程
采用的是细胞工程中的技术,过程
采用的是胚胎工程中的技术。
(2)体细胞进行体外培养时,所需气体主要有O2和CO2,其中CO2的作用是维持培养液(基)的。
(3)如果克隆过程中需要进行基因改造,在构建基因表达载体(重组载体)时必须使用和两种工具酶。
基因表达载体上除目的基因外,还需要有基因,以便选出成功导入基因表达载体的细胞。
(4)胚胎干细胞可以来自囊胚中的。
在一定条件下,胚胎干细胞可以分化形成不同的组织器官。
若将图中获得的组织器官移植给个体(填“A”或“B”),则不会发生免疫排斥反应。
36.
(1)(体细胞)核移植(早期)胚胎培养
(2)PH(3)限制性(核酸)内切酶(或:
限制酶)标记(4)内细胞团B
【解析】
(1)由图示可知,此为体细胞核移植技术流程。
表示利用个体A的去核卵(母)细胞和个体B的体细胞核通过核移植技术构建重组细胞;
表示将重组细胞进行早期胚胎培养至囊胚期;
然后从内细胞团中获取胚胎干细胞,定向诱导分化成所需要的组织器官进行器官移植。
(2)动物细胞培养需要适宜的外界条件,例如无菌无毒的环境、营养、温度和pH、气体环境等,其中CO2用以维持培养液的pH。
(3)基因工程中需要用限制酶切割目的基因和运载体,以获得相同的末端,再用DNA连接酶连接成基因表达载体;
基因表达载体包含目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点等结构,标记基因用于筛选成功导入基因表达载体的细胞。
【2015天津】8.纤维素分子不能进入酵母细胞,为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精,构建了含3种不同基因片段的重组质粒,下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图。
据图回答:
(1)本研究构建重组质粒时看选用四种限制酶,其识别序列如下图,为防止酶切片段的自身环接,可选用的限制酶组合是______或__________
(2)设置菌株Ⅰ为对照,是为了验证__________不携带纤维素酶基因。
(3)纤维素酶基因的表达包括__________和__________过程,与菌株Ⅱ相比,在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有______________________________。
(4)在以纤维素为唯一C源的培养基上分别培养菌株Ⅱ
、Ⅲ、Ⅳ,菌株___________不能存活,原因是________________
_________________。
(5)酵母菌生产酒精的细胞部位是___________,产生酒精时细胞的呼吸方式是___________,在利用纤维素生产酒精时,菌株Ⅳ更具有优势,因为导入的中重组质粒含有____________。
使分泌的纤维素酶固定于细胞壁,减少
因培养液更新二造成的酶的流失,提高酶的利用率。
答案:
(1)B(或C)C(或B)
(2)质粒DNA和酵母菌基因组
(3)转录翻译内质网、高尔基体
(4)
缺少信号肽编码序列,合成的纤维素酶不能分泌到胞外,细胞无可利用的碳源
(5)细胞质基质无氧呼吸A基因片段
【2015天津】7.DHA对脑神经发育至关重要。
以A、B两种单细胞真核藻为亲本,利用细
胞融合技术选育高产DHA融合藻。
两种藻特性如下表。
亲本藻
优势代谢类型
生长速率(g/L.天)
固体培养基上菌落直径
DHA含量(‰)
A藻
自养
0.06
小
0.7
B藻
异养
0.14
大
无
据表回答:
(1)选育的融合藻应具有A藻与B藻的优点。
(2)诱导融合前需用纤维素酶处理两种藻,其目的是获得。
(3)通过以下三步筛选融合藻,步骤可淘汰B藻,步骤可淘汰生长速成率较慢的藻落,再通过步骤获取生产所需的融合藻。
步骤a:
观察藻落的大小
步骤b:
用不含有机碳源(碳源——生物生长的碳素来源)的培养基进行光照培养
步骤c:
测定DHA含量
(4)以获得的融合藻为材料进行甲、乙、丙三组试验,结果如下图。
①甲组条件下,融合藻产生[H]的细胞器是;
丙组条件下产生ATP的细胞器是。
②与甲、丙两组相比,乙组融合藻生长速
率较快,原因是在该培养条件下。
甲、乙两组DHA产量均较高,但实际生产中往往采用甲组的培养条件,其原因是。
(1)产
生DHA、自养特性快速生长
(2)原生质体bac
(3)
线粒体、叶绿体线粒体
融合藻既能光能自养又能异养
融合藻利用光能和简单的无机物即能生长,不需要添加葡萄糖,可降低成本,也可防止杂菌生长
【2015天津】6、2015年2月3日,英国议会下院通过一项历史性法案,允许以医学手段培育“三亲婴儿”。
三亲婴儿的培育过程可选用如下技术路线。
据图分析,下列叙述错误的是()
A、该技术可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代
B、捐献者携带的红绿色盲基因不能遗传给三亲婴儿
C、三亲婴儿的染色体全部来自母亲提供的细胞核
D、三亲婴儿的培育还需要早期环胎培养和胚胎移植等技术
C
【2015江苏卷】33.(8分)荧光原位杂交可用荧光标记的特异DNA片段为探针,与染色体上对应的DNA片段结合,从而将特定的基因在染色体上定位。
请回答下列问题:
(1)DNA荧光探针的制备过程如图1所示,DNA酶玉随机切开了核苷酸之间的键,从而产生切口,随后在DNA聚合酶玉作用下,以荧光标记的为原料,合成荧光标记的DNA探针。
(2)图2表示探针与待测基因结合的原理。
先将探针与染色体共同煮沸,使DNA双链中键断裂,形成单链。
随后在降温复性过程中,探针的碱基按照原则,与染色体上的特定基因序列形成较稳定的杂交分子。
图中两条姐妹染色单体中最多可有条荧光标记的DNA片段。
(3)A、B、C分别代表不同来源的一个染色体组,已知AA和BB中各有一对同源染色体可被荧光探针标记。
若植物甲(AABB)与植物乙(AACC)杂交,则其F1有丝分裂中期的细胞中可观察到个荧光点;
在减数第一次分裂形成的两个子细胞中分别可观察到个荧光点。
33.【答案】(8分)
(1)磷酸二酯脱氧核苷酸
(2)氢碱基互补配对
4
【2015江苏卷】32.(9分)胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。
图1是该方法所用的基因表达载体,图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B分别表示
-半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白)。
(1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是。
(2)图1中启动子是摇银摇酶识别和结合的部位,有了它才能启动目的基因的表达;
氨苄青霉素抗性基因的作用是。
(3)构建基因表达载体时必需的工具酶有。
(4)茁-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达,可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部,其意义在于。
(5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键,用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链,且
-半乳糖苷酶被切成多个肽段,这是因为。
(6)根据图2中胰岛素的结构,请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。
你的推测结果是,理由是。
32.【答案】(9分)
(1)终止子
(2)RNA聚合作为标记基因,将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来
(3)限制酶和DNA连接酶
(4)防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解
(5)
-半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸,而胰岛素A、B链中不含甲硫氨酸
(6)至少2个两条肽链的一端各有一个游离的氨基,氨基酸R基团中可能还含有
游离的氨基
【2015江苏卷】20.下图为制备人工种子部分流程示意图,下列叙述正确的是()
A.胚状体是外植体在培养基上脱分化形成的一团愈伤组织
B.该过程以海藻酸钠作为营养成分,以CaCl2溶液作为凝固剂
C.可在海藻酸钠溶液中添加蔗糖,为胚状体提供碳源
D.包埋胚状体的凝胶珠能够隔绝空气,有利于人工种子的储藏
【答案】C
【2015江苏卷】3.下列关于动物细胞工程和胚胎工程的叙述,正确的是()
A.乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养
B.细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行
C.采用胚胎分割技术产生同卵多胚的数量是有限的
D.培养早期胚胎的培养液中含维生素、激素等多种能源物质
【2015四川卷】9.(11分)将苏云金杆菌Bt蛋白的基因导入棉花细胞中,可获得抗棉铃虫的转基因棉,其过程如下图所示(注:
农杆
菌中Ti质拉上只有T-DNA片段能转移到植物细胞中)。
(1)过程①需用同种____酶对含Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。
为将过程②获得的含重组质粒的农杆菌筛选出来,应使用____培养基。
(2)过程③中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养,旨在让__进入棉花细胞;
除尽农杆菌后,还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养,目的是________。
(3)若过程④仅获得大量的根,则应在培养基中增加____以获得芽;
部分接种在无激素培养基上的芽也能长根,原因是________。
(4)检验转基因棉的抗虫性状,常用方法是____。
种植转基因抗虫棉能减少___的使用,以减轻环境污染。
(1)限制 选择
(2)T-DNA 筛选获得T-DNA片段的植物细胞
(3)细胞分裂素浓度 顶芽端合成的生长素向基部运输,促进根的分化
(4)投放棉铃虫 农药
(1)过程①需用同种限制性核酸内切酶(限制酶)对含Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。
为将过程②获得的含重组质粒的农杆菌筛选出来,应使用选择培养基。
(2)过程③中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养,旨在让重组质粒中的T-DNA片段进入棉花细胞;
除尽农杆菌后,还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养,目的是筛选出含目的基因的受体细胞。
(3)若过程④仅获得大量的根,则应在培养基中增加细胞分裂素以获得芽;
部分接种在无激素培养基上的芽也能长根,原因是部分细胞也能产生生长素,促进生根。
(4)检验转基因棉的抗虫性状,常用方法是直接接种害虫,观察其生存情况。
种植转基因抗虫棉能减少农药的使用,以减轻环境污染。
【2015北京卷】5、在应用农杆菌侵染植物叶片获得转基因植株的常规实验步骤中,不需要的是()
A、用携带目的基因的农杆菌侵染植物细胞
B、用选择培养基筛法导入目的基因的细胞
C、用聚乙二醇诱导转基因细胞的原生物质融合
D、用适当比例的生长素和细胞分裂素诱导愈伤组织生芽
5【答案】C
【2015重庆卷,6,6分】6.下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述,正确的是
A.表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获得
B.表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点
C.借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来
D.启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用
【解析】由于胰岛素基因只在胰岛B细胞中表达,因此在肝细胞中无胰岛素基因的转录产物mRNA,A项错误;
胰岛素基因的转录启动于启动子,而不是复制原点,B项错误;
抗生素抗性基因可作为标记基因在含有抗生素的培养基中将受体细胞筛选出来,C项正确;
终止密码子位于信使RNA,不位于DNA上,启动子和终止子均在胰岛素基因转录中起作用;
【2015新课标卷Ⅱ,40,15分】40.【生物——选修3:
现代生物科技专题】
(15分)
已知生物体内有一种蛋白质(P),该蛋白质是一种转运蛋白,由305个氨基酸组成。
如果将P分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸,240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸,改变后的蛋白质(P1)不但保留P的功能,而且具有了酶的催化活性。
回答下列问题:
⑴从上述资料可知,若要改变蛋白质的功能,可以考虑对蛋白质的进行改造。
⑵以P基因序列为基础,获得P1基因的途径有修饰基因或合成基因。
所获得的基因表达时是遵循中心法则的,中心法则的全部内容包括的复制;
以及遗传信息在不同分子之间的流动,即:
。
⑶蛋白质工程也被称为第二代基因工程,其基本途径是从预期蛋白质功能出发,通过
和,进而确定相对应的脱氧核苷酸序列,据此获得基因,再经表达、纯化获得蛋白质,之后还需要对蛋白质的生物进行鉴定。
(1)氨基酸序列(或结构)(1分,其他答案合理也给分)
(2)PP1(每空2分,共4分)DNA和RNA(或遗传物质)(2分)DNA→RNA、RNA→DNA
RNA→蛋白质(或转录、逆转录、翻译)(3分)
(3)设计蛋白质的结构推测氨基酸序列(每空2分,共4分)功能(1分)
【解析】本题考查蛋白质工程相关知识,难度较小。
(1)对蛋白质的氨基酸序列(或结构)进行改造,可达到改变蛋白质的功能的目的。
(2)以P基因序列为基础,获得P1基因,可以对P基因进行修饰改造,也可以用人工方法合成P1基因;
中心法则的全部内容包括DNA的复制、DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白质(或转录、逆转录、翻译)。
(3)蛋白质工程的基本途径是从预期蛋白质功能出发,通过设计蛋白质结构和推测氨基酸序列,推测相应的核苷酸序列,并获取基因。
经表达的蛋白质,要对其进行生物功能鉴定。
【2015新课标卷Ⅰ,40,15分】40.[生物——选修3:
现代生物科技专题]
HIV属于逆转录病毒,是艾滋病的病原体。
(1)用基因工程方法制备HIV的某蛋白(目的蛋白)时,可先提取HIV中的,以其作为模板,在的作用下合成。
获取该目的蛋白的基因,构建重组表达载体,随后导入受体细胞。
(2)从受体细胞中分离纯化出目的蛋白,该蛋白作为抗原注入机体后,刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是。
该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV,检测的原理是。
(3)已知某种菌导致的肺炎在健康人群中罕见,但是在艾滋病患者中却多发。
引起这种现象的根本原因是HIV主要感染和破坏了患者的部分细胞,降低了患者免疫系统的防卫功能。
(4)人的免疫系统有癌细胞的功能,艾滋病患者由于免疫功能缺陷,易发生恶性肿瘤。
(1)RNA逆转录酶cDNA(或DNA)
(2)抗体抗原抗体特异性结合
(3)T(或T淋巴)(4)监控和清除
(1)HIV属于逆转录病毒,它的遗传物质是RNA,在逆转录酶的作用下可以逆转录为cDNA,用于构建基因表达载体,从而制备HIV的某蛋白。
(2)HIV的某蛋白作为抗原进入机体后,能刺激人体产生针对该抗原的一种特殊的分泌蛋白——抗体;
可用该抗体进行抗原—抗体进行杂交来检测血清中是否含有HIV。
(3)HIV病毒营寄生生活,寄生在T淋巴细胞内,T细胞参与体液免疫和细胞免疫,因此少了T细胞,特异性免疫几乎全部丧失,降低了机体的免疫功能。
(4)人体的免疫系统具有防卫、监控和清除的功能,可及时清除体内产生的癌细胞,艾滋病患者的整个免疫功能缺陷,机体会发生一系列顽固性机会感染和肿瘤的发生。
(2015安徽卷,31Ⅱ,9分)Ⅱ(9分)科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊,以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白,其技术路线如图。
(1)由过程①获得的A为_____________________。
(2)在核移植之前,必须先去掉受体卵母细胞的核,目的是_______________________。
受体应选用___________期卵母细胞。
(3)进行胚胎移植时,代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生______________,这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。
(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆,理论上可获得无限个转基因绵羊,这是因为__________________________________________________。
31Ⅱ、[答案]
(1)含目的基因的表达载体。
(2)保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞MⅡ
(3)免疫排斥反应
(4)整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养
[解析]
(1)根据题意可知,要将人凝血因子IX基因导入绵羊胎儿成纤维细胞,必须构建基因表达载体,所以由过程①获得的A为基因表达载体。
(2)为保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞,在核移植之前,必须先去掉受体卵母细胞的核。
受体应选用减数第二次分裂中(MⅡ中)期卵母细胞。
(3)进行胚胎移植时,代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生免疫排斥反应,这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。
(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆,理论上可获得无限个转基因绵羊,这是因为整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养。
【2015福建卷,33,10分】33.【生物-现代生物科技专题】
(10分)
GDNF是一种神经营养因子。
对损伤
的神经细胞具有营养和保护作用。
研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图1所示),并导入到大鼠神经干细胞中,用于干细胞基因治疗的研究。
请回答:
(1)在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中,使用胰蛋白酶的目的是。
(2)构建含GDNF基因的表达载体时,需选择图1中的限制酶进行酶切。
(3)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接,连接产物经筛选得到的载体主要有三种:
单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图1所示)。
为鉴定这3种连接方式,选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切,并对酶切后的DNA片段进行电泳分析,结果如图2所示。
图中第泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
(4)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后,为了检测GDNF基因是否成功表达,可用相应的与提取的蛋白质杂交。
当培养的神经干细胞达到一定的密度时,需进行
培养以得到更多数量的细胞,用于神经干细胞移植治疗实验。
[答案]
(1)使细胞分散开
(2)XhoⅠ(3)②(4)抗体传代
[命题立意]本题考查动物细胞培养和基因工程的相关知识,考查学生推理能力,运用所学知识分析问题和解决问题的能力。
难度适中。
[解析]
(1)动物细胞培养时,可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶作用,使细胞分散开。
(2)质粒上有XhoⅠ识别位点,而且在启动子之后,所以选用XhoⅠ限制酶进行酶切。
(3)泳道①仅有一种条带,属于载体自连;
泳道②有两种条带,且长度分别与质粒和GDNF基因长度相同,为正向连接;
泳道③有两种条带,长度与BamHⅠ酶切后结果相同,为反向连接。
(4)检测基因是否表达采用抗原抗体杂交法。
培养动物细胞采用动物细胞培养法,当细胞密度达到一定程度,需要进行分瓶,进行传代培养。
【2015重庆卷,8,20分】8.(20分)某课题组为解决本地奶牛产奶量低的问题,引进了具高产奶基因但对本地适应性差的纯种公牛。
(1)拟进行如下杂交:
♂A(具高产奶基因的纯种)×
♀B(具适宜本地生长基因的纯种)→C
选择B作为母本,原因之一是胚胎能在母体内正常。
若C中的母牛表现为适宜本地生长,但产奶量并不提高,说明高产奶是性状。
为获得产奶量高且适宜本地生长的母牛,根据现有类型,最佳
杂交组合是,后代中出现这种母牛的概率是(假设两对基因分别位于不同对常染色体上)。
(2)用以上最佳组合,按以下流程可加速获得优良个体。
精子要具有受精能力,需对其进行处理;
卵子的成熟在过程中完成。
在过程4的培养基中含有葡萄糖,其作用是。
为筛选出具有优良性状的母牛,过程5前应鉴定胚胎的。
子代母牛的优良性状与过程的基因重组有关。
(3)为了提高已有胚胎的利用率,可采取技术。
(1)生长发育或胚胎发育隐性♂A×
♀C1/8
(2)获能或增强活力③供能性别、高产奶和适宜生长的基因②
(3)胚胎分割
(1)由于胚胎能在母体内进行正常的胚胎发育,所以可选择适宜当地生长的纯种牛做母本。
用纯种高产奶牛与适宜当地生长的纯种牛杂交,获得了C牛,表现为适宜当地生长,但产奶量并没提高,这说明不适宜当地生长是隐性性状,适宜当地生长是显性性状,高产奶是隐性性状,低产奶是显性性状。
由于控制奶牛的产奶量的基因和对本地的适应性的基因分别位于不同的染色体上,说明他们在遗传时遵循基因的自由组合定律,若控制奶牛的产奶量的等位基因为A和a,对本地的适应性的的等位基因为B和b,可推知雄牛A的基因型为aabb,雌牛B为AABB,C为AaBb,可见要获得产奶量高且适宜当地生长的母牛(aaB),最佳的实验组合为♂A×
♀C,此时后代出现所需牛(aaBb)的概率为1/4×
1/2=1/8。
(2)精子需获能后才具备受精的能力;
由于排卵时排出的卵子只发育到减数MⅡ,而减数第二次分裂形成卵细胞是在受精过程中完成的,即卵子的成熟是在体外受精过程中完成;
在胚胎培养过程中,培养基中的葡萄
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