TSVD56201黄连上清片 微生物限度检查方法Word文件下载.docx

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适用于本公司生产的黄连上清片微生物限度检查：

微生物计数法和控制菌检查法。

5.培训：

在本方案实施前，已对方案实施过程中涉及人员进行培训，以保证方案顺利实施，并做好培训记录，培训记录见附表1。

6.试验条件

6.1.供试品规格：

批号：

6.2.培养基及试剂

培养基名称

培养基批号

生产厂家

6.3.试验用菌株

菌种名称

菌种编号

菌种来源

6.4.检验仪器及相关设备

仪器名称

仪器型号

仪器厂家

7.计数方法适用性试验

7.1.需氧菌总数及霉菌和酵母菌计数方法适用性试验

7.1.1菌液制备

7.1.1.1接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、沙门菌的新鲜培养物至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。

7.1.1.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至100ml沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。

7.1.1.3.接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7天，加3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，取1ml菌液加0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。

7.1.2.试验操作方法：

试验分3组，进行3次独立的平行试验。

7.1.2.1.供试液的制备：

取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇使溶解，作为1:

10供试液。

7.1.2.2.试验组：

上述制备好的供试液，加入铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉试验菌悬液，混匀，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。

取1ml分别注入平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，待凝固后，30～35℃培养三天，白色念珠菌、黑曲霉30～35℃培养五天，计数；

取上述制备好的供试液，加入白色念珠菌、黑曲霉菌悬液，混匀，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu，取1ml分别倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，待凝固后，20～25℃培养五天，计数。

7.1.2.3.供试品对照组：

取供试液100ml，加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，混匀。

7.1.2.4.菌液对照组：

取各试验菌液1ml，分别加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，混匀，使每1ml供试液中菌落数不大于100cfu，每株试验菌平行制备2个平板，置规定温度培养。

7.1.2.5.试验组：

试验可接受标准：

试验组菌落数减去供试品对照组菌落的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5-2.0范围内。

7.1.2.8.测定结果：

阳性菌

次数

活菌组菌数（cfu/ml）

试验组菌数（cfu/ml）

供试液对照菌数（cfu/ml）

比值

1号皿

2号皿

均值

细菌数

霉菌数

金黄色葡萄球菌

铜绿假单胞菌

枯草芽孢杆菌

黑曲霉

白色念珠菌

结论:

检查人/日期：

复核人/日期：

8.控制菌检查法的试验

8.1耐胆盐革兰阴性菌方法适用性

8.1.1.供试液的制备：

取供试品10g，加胰酪大豆胨液体培养基至100ml，振摇使溶解，作为1:

8.1.2.试验组：

取1:

10供试液2份，每份100ml，一份加入大肠埃希菌液1ml，一份加入铜绿假单胞菌液1ml，于20～25℃中培养2小时。

8.1.3阳性对照组：

取胰酪大豆胨液体培养基2份，每份100ml，一份加入大肠埃希菌液1ml，一份加入铜绿假单胞菌液1ml，于20～25℃中培养2小时。

阴性对照组：

取胰酪大豆胨液体培养基100ml，于20～25℃中培养2小时。

8.1.4定性试验：

取各组项下的培养液10ml，分别接种至肠道菌增菌液体培养基100ml中，于30～35℃中培养24～48小时后。

分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，于30～35℃中培养18～24小时。

8.1.5定量试验：

取各组培养液，用胰酪大豆胨液体培养基分别稀释制成1：

10和1：

102的溶液，分别取1ml的试验组培养液（0.1g）、1:

10溶液（0.01g）和1:

100（0.001g）的溶液接种至肠道菌增菌液体培养基100ml中，于30～35℃中培养24～48小时后。

（所加菌液均不得大于100cfu/ml）

定性试验结果

名称

检验结果

大肠埃希菌

试验组

阳性对照组

阴性对照组

定量试验结果

0.1g

0.01

0.001g

0.01g

8.2大肠埃希菌方法适用性试验

8.2.1.供试品的处理：

取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，振摇使溶解，混匀，作为1：

10的供试液。

8.2.2.增菌培养

8.2.2.1.试验组：

取供试液10ml和不大于100cfu/ml大肠埃希菌液1ml加入胰酪大豆胨液体培养基100ml中，于30～35℃中培养18～24小时。

8.2.2.2.阳性对照组：

取试验稀释液10ml和不大于100cfu/ml大肠埃希菌液1ml加入胰酪大豆胨液体培养基100ml中，于30～35℃中培养18～24小时。

8.2.2.3.阴性对照组：

取试验稀释液10ml加入胰酪大豆胨液体培养基100ml中，于30～35℃中培养18～24小时，

8.2.3.选择和分离培养

取上述增菌培养的培养物各1ml，分别接种至麦康凯液体培养基100ml中，于42～44℃中培养24～48小时，取各麦康凯液体培养物分别划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，于30～35℃中培养18～72小时后观察菌落形态。

8.2.4.试验可接受标准：

阴性对照组应无菌落生长，试验组和阳性对照组应有菌落生长，且试验组的菌落形态应与阳性对照的相同。

8.2.5.大肠埃希菌测定结果

检测结果

阳性对照

阴性对照

8.3.沙门菌方法适用性

8.3.1试验组：

取供试品10g接种胰酪大豆胨液体培养基至100ml中，加入不大于100cfu/ml乙型副伤寒沙门菌1ml，混匀，于30～35℃中培养18～24小时。

取培养物0.1ml接种至10mlRV沙门增菌液体培养基中，于30～35℃中培养18～24小时后。

取少量RV沙门增菌液体培养基划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上，于30～35℃中培养18～48小时。

8.3.2阳性对照组：

取不大于100cfu/ml乙型副伤寒沙门菌1m接种胰酪大豆胨液体培养基至100ml，混匀，于30～35℃中培养18～24小时。

8.3.3阴性对照组：

取胰酪大豆胨液体培养基至100ml，混匀，于30～35℃中培养18～24小时后。

附表1：

微生物限度检查方法试验培训签名表

方案名称

黄连上清片微生物限度检查方法适用性试验培训

培训时间

年月日

序号

姓名

1

11

21

2

12

22

3

13

23

4

14

24

5

15

25

6

16

26

7

17

27

8

18

28

9

19

29

10

20

30

黄连上清片微生物限度检查方法适用性试验报告

3.1.QC：

3.2.QC主管、质量部长：

3.3.质量授权人：

PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液

20161108

北京奥博星生物科技有限公司

胰酪大豆胨液体培养基

20171020

胰酪大豆胨琼脂培养基

20160830

沙氏葡萄糖琼脂培养基

20161102

麦康凯琼脂培养基

20151105

麦康凯液体培养基

RV沙门菌增菌液液体培养基

20151030

肠道增菌液液体培养基

20151028

三糖铁琼脂培养基

20151018

紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基

木糖赖氨酸脱氧胆酸钠琼脂培养基

20160222

CMCC（B）44102

中国食品药品检定研究院

乙型副伤寒沙门菌

CMCC（B）50094

CMCC（B）10104

金黄色葡萄糖菌

CMCC（B）26003

CMCC（F）98001

枯草芽胞杆菌

CMCC（B）63501

CMCC（F）98003

电子天平

YB2002

上海力能电子仪器公司

超净工作台

SW-CJ-2FD

苏州净化设备有限公司

生物安全柜

BSC-B00IIA

上海搏讯实业有限医疗设备厂

生化培养箱

LRH-250-II

广东省医疗器械厂

霉菌培养箱

MJ-160B

上海悦丰仪器仪表有限公司

7.1.2.1.供试液的制备

取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇使溶解，作为1:

取上述制备好的供试液，加入铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉试验菌悬液，混匀，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。

7.1.2.86测定结果：

99

86

93

89

77

82

0.9

87

94

91

75

84

79

88

90

74

81

92

98

85

83

1.0

78

80

71

73

69

64

67

53

62

58

70

66

68

52

60

56

0.8

54

65

72

61

63

47

50

55

41

59

结论：

本品按<

<

中国药典>

>

2015版四部微生物限度检查方法验证，结果表明可按常规法进行需氧

菌霉菌和酵母菌计数。

检查人/日期：

100的溶液，分别取1ml的试验组培养液（0.1g）、1:

+

-

8.2.1.供试品的处理

取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，振摇使溶解，混匀，作为1：

（所加菌液均不