分子生物学章节习题Word格式.docx

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4Edman降解法（D）对多肽进行测序

A用一段cDNA测序B按照质量C从C端到N端D从N端到C端

抗原决定部位或表位

抗原表位（antigenicdeterminant，AD）是决定抗原性的特殊化学基团，是由5～8个氨基酸组成的短序列。

大多存在于抗原物质的表面，有些存在于抗原物质的内部，须经酶或其他方式处理后才暴露出来。

6简述蛋白质的功能

蛋白质具有广泛的功能：

•酶可催化绝大多数生化反应，底物的结合取决于特异的非共价相互作用；

•当与配体结合时，膜受体蛋白将信号传入细胞内部；

•转运和储存，如血红蛋白在血液中转运氧、铁蛋白在肝脏内储存铁；

•胶原和角蛋白是重要的结构蛋白，肌动蛋白和肌球蛋白构成有收缩力的肌肉纤维；

•酪蛋白和卵清蛋白是为生长提供氨基酸的营养蛋白；

•免疫系统依赖抗体蛋白抵御感染；

•调节蛋白（如转录因子）具有结合并调节其他分子（如DNA）的功能。

7在蛋白质的四级结构中，维持空间构象稳定的力都有哪些？

蛋白质的四级结构（Quaternarystructure）是具有三级结构的各条多肽链之间，相互作用所形成的，更为复杂的聚合物的一种结构形式，主要描述蛋白质亚基空间排列，以及亚基之间的连接和相互作用，不涉及亚基内部结构。

蛋白质亚基之间主要通过疏水作用、氢键、离子键等作用力形成四级结构，其中最主要的是疏水作用。

C核酸的性质

1DNA中的一段5’-AGTCTGACT-3’序列等同于RNA中的哪一片段？

（A）

A5’-AGUCUGACU-3’B5’-UGTCTGUTC-3’

C5’-UCAGUCGUA-3’D5’-AGUCAGACU-3’

2以下哪一个是对A-DNA的正确描述（C）

A是右手反向平行双螺旋，每圈10个碱基，碱基平面与螺旋轴垂直。

B是左手反向平行双螺旋，每圈12个碱基，有交替的嘌呤-嘧啶序列形成。

C是右手反向平行双螺旋，每圈11个碱基，碱基的朝向与螺旋轴有关。

D是球状结构，由单链核酸中形成的短的分子内螺旋构成。

3双链DNA变性涉及（B）

A断裂为短的双链片段B分开成为单链

CDNA骨架分解D碱基从戊糖-磷酸骨架上分离下来

4以下哪一个在260nm波长下具有最大单位质量吸收（B）

A双链DNAB单核苷酸CRNAD蛋白质

5Ⅰ型DNA拓扑异构酶（C）

A使连接数改变±

2B需要TAP

C将DNA双螺旋中的一条链打断D是抗生素类药物的靶向

6简述DNA的A、B、Z型双螺旋结构特点。

一般将沃森和克里克提出的双螺旋构型称为B-DNA。

B-DNA是DNA在生理状态下的构型。

活细胞中极大多数DNA以B-DNA形式存在。

但当外界环境条件发生变化时，DNA的构型也会发生变化。

当DNA在低温条件下，则以A-DNA形式存在。

A-DNA是DNA的脱水构型，它也是右手螺旋。

A-DNA比较宽而紧密，大沟深而窄，小沟宽而浅。

在体内DNA并不以A构型存在，但细胞内DNA-RNA或RNA-RNA双螺旋结构，却与A-DNA非常相似。

还有某些DNA序列可以以左手螺旋的形式存在，称为Z-DNA。

当某些DNA序列富含G-C，并且在嘌呤和嘧啶交替出现时，可形成Z-DNA。

但Z-DNA不是体内DNA的主要形式。

A-DNA、B-DNA和Z-DNA的主要结构特点

A-DNA

B-DNA

Z-DNA

螺旋方向

右手

左手

直径

约2.6nm

约2.0nm

约1.8nm

每一转的碱基对数

11

10

12（6个二聚体）

每对碱基旋转角度

33°

36°

60°

（每个二聚体）

每对碱基沿螺旋轴上升的距离

0.26nm

0.34nm

0.37nm

螺距

2.8nm

3.4nm

4.5nm

碱基对相对中心轴的倾斜角度

20°

6°

7°

大沟

窄，深

宽，深

平坦

小沟

宽，浅

糖苷键

anti

anti（嘧啶）

syn（嘌呤）

7RAN同DNA相比为何极不稳定？

因为RNA是单链结构，而DNA是双链双螺旋结构，有氢键存在，分子内作用力较强，所以更稳定。

其次RNA不稳定的主要原因是细胞及外界环境中有很多RNA酶，RNA极容易被降解掉。

D原核与真核生物的染色体结构

1以下哪一个是大肠杆菌和真核生物染色体的共同之处（D）

ADNA是环状的BDNA被包装成核小体CDNA位于核中DDNA是负超螺旋

2由166bpDNA组蛋白八聚体和组蛋白H1组成的复合体叫做（D）

A核小体核心B螺线管C30nm纤维D核小体

3分裂间期染色体转录发生在什么区域（C）

A端粒B着丝粒C常染色质D异染色质

4以下关于CpG岛和甲基化的陈述那个是错误的（A）

ACpG岛对DNaseⅠ有部分抗性

BCpG甲基化是真核生物对CpG突变为TpG的反应

CCpG岛出现在活性基因启动子附近

DCpG甲基化伴随着染色质失活

5以下哪个是高度重复DNA（C）

AAlu元件B组蛋白基因库CDNA微卫星D散在重复DNA

6名词解释：

端粒、卫星DNA、RNA编辑、持家基因、染色小体、核小体核心颗粒。

端粒：

是形成真核生物线性DNA分子末端的特化的序列，由数以百计的短重复序列构成，这些序列是端粒酶以独立于正常DNA复制的机制合成的。

它能保护染色体末端免遭降解。

卫星DNA：

是一类高度重复序列DNA离心后，不同层面的DNA形成了不同的条带。

根据荧光强度的分析，可以看到在一条主带以外还有一个或多个小的卫星带。

这些在卫星带中的DNA即被称为卫星DNA。

真核生物基因组中高度重复DNA由一些2bp至20~30bp的极短序列，以数千个拷贝的串联方式排列。

RNA编辑：

指在mRNA水平上改变遗传信息的过程。

具体说来，指基因转录产生的mRNA分子中，由于核苷酸的缺失，插入或置换，基因转录物的序列不与基因编码序列互补，使翻译生成的蛋白质的氨基酸组成，不同于基因序列中的编码信息的现象。

持家基因：

又称管家基因，是指所有细胞中均要表达的一类基因，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的，它是一类始终保持着低水平的甲基化并且一直处于活性转录状态的基因。

染色小体：

当核小体核心颗粒上有H1组蛋白结合时，用微球菌核酸酶酶解分离出的DNA片段为166bp，由这个166bp的DNA绕在组蛋白八聚体外面形成两圈超螺旋，并由H1分子在进口处将DNA“锁定”，这样的结构称之为染色小体。

核小体核心颗粒加上一个H1分子构成染色小体。

核小体核心颗粒：

由长度为146bp的DNA区段与各两分子的H2A、H2B、H3和H4组蛋白八聚体组成。

7原核生物与真核生物基因表达主要区别？

原核生物

真核生物

RNA聚合酶

RNA聚合酶I

RNA聚合酶Ⅱ

启动子

有

终止子

无

前mRNA

编码蛋白质

单/多顺反子

单顺反子

mRNA两端

5’端磷酸3’端羟基

5’甲基帽3’polyA尾

RBS

转录、翻译

同时进行

在核内转录，胞质内翻译

EDNA复制

1一个典型的哺乳动物细胞中复制子的数目是（D）

A40~200B400C1000~2000D50000~100000

2原核生物中，后随链的引物是被（C）清除的。

A3’-5’外切核酸酶BDNA连接酶CDNA聚合酶ⅠDDNA聚合酶Ⅲ

3在大肠杆菌复制起始点处的基本起始蛋白是（A）

ADnaABDnaBCDnaCDDnaE

4如果细胞在R点前缺乏有丝分裂剂，它将进入（D）期

AG1BSCG2DG0

5以下哪一个陈述是正确的（A）

A一旦细胞与越过R点，细胞分裂就不可避免

BG1细胞周期蛋白-CDK复合体对Rb的磷酸化是进入S期的关键

CG1细胞周期蛋白-CDK复合体对E2F的磷酸化是进入S期的关键

D细胞周期蛋白D1和INK4p16是肿瘤抑制蛋白

6在真核生物中，常染色体优先在（A）复制

AS期早期BS期中期CS期晚期DG2期

7原核生物的质粒如果含有酵母的（C）就可以在酵母细胞中复制

AORCBCDRCARSDRNA

8简述原核生物的DNA复制过程。

起始复制是通过起始的速率来调控的。

E.coli的起始位点位于遗传基因座oriC，并与细胞膜相连。

oriC包含4个9bp的起始因子DnaA蛋白的结合位点。

当DnaB蛋白达到足够量，即形成由30~40个分子构成的复合体，每一个分子结合1分子ATP，在其周围的oriCDNA呈缠绕形。

该过程需要DNA形成负超螺旋。

负超螺旋有助于3个13bp长的富含AT的重复序列的解链，结果有利于DnaB蛋白的结合。

DnaB是DNA解旋酶，利用ATP水解的能量结合并解开双链DNA（或RNA），产生的单链泡被单链结合蛋白（SSB）所覆盖，以防止发生断裂及重新复性。

DNA引发酶结合到DNA上并合成一段短的RNA引物，从而引发第一个复制叉的先导链的复制，接下来是双向复制。

解旋亲本链DNA被DNA解旋酶及单链结合蛋白作用而解旋，产生的正超螺旋对于复制叉的不断前进不足，于是被Ⅱ型拓扑异构酶，即DNA旋转酶作用引入负超螺旋而得到不断释放。

延伸随着新形成的复制叉替代亲本链的后随链，1个包含DnaB解旋酶和DNA引物酶的引发体在后随链上合成多个RNA引物，DNA聚合酶Ⅲ全酶的二聚体延伸前导链及后随链，α亚基聚合DNA，ε亚基校正新生DNA分子，β亚基将聚合酶结合于DNA。

在每一个单体中的其余亚基各不相同，以保证全酶分别在先导链上和后随链上合成长的或短的DNA片段。

一旦后随链的引物被DNA聚合酶Ⅲ延伸，会由DNA聚合酶I的5’-3’外切核酸酶活性切去，同时用DNA填补缺口，然后DNA连接酶将后随链上的片段连成一体。

终止和分离E.coli的两个复制叉在与复制起始点成180°

的复制终点相遇，相互连锁的子链在DNA拓扑异构酶Ⅳ（一种Ⅱ型DNA拓扑异构酶）的作用下相分离。

9名词解释：

特许因子。

特许因子：

DNA复制起始所必须的，并在作用后失活的特定蛋白，只有在有丝分裂期核膜解体时才能进入核内，防止了复制完成前的再次起始。

FDNA损伤、修复与重组

1异常重组又被称为（B）

A位点特异性重组B转座C同源重组D转移损伤DNA合成

2在患有（C）的个体中缺乏对紫外线诱导DNA损伤的切除修复

A患遗传型结肠癌

BCrohn氏症

C典型的DNA修复酶缺乏病

DDNA修复酶缺乏病的变型

3名词解释：

异常重组。

异常重组（转座作用）：

完全不依赖于序列间的同源性，而使一段较短的DNA序列（如转座子或转座元件）转移进细胞基因组的几乎任何位置，但在形成重组分子时往往是依赖于DNA复制而完成重组的过程。

G基因操作

1细菌培养物中某种质粒的存在通常用（B）来确定

A蓝白颜色筛选B在抗生素存在下生长

C一种限制酶降解D琼脂凝胶电泳

2碱性磷酸酶（D）

A将双联DNA片段连接起来B在DNA的5’端加上一个磷酸基团

C切断双联DNAD从DNA的5’端脱去一个磷酸基团

3转化是（A）

A细菌吸收一个质粒B细菌表达一个基团

C细菌吸收一个噬菌体D从细菌中分离一个质粒

4T4DNA连接酶（A）

A需要ATPB将具有相邻3’-磷酸和5’-羟基的双链DNA片段连接

C需要NADHD将单链DNA连接起来

5在琼脂糖凝胶电泳中（D）

ADNA向负极移动B超螺旋质粒泳动的比其带切口的异构体慢

C大分子比小分子泳动快D溴化乙锭被用来显色DNA

黏末端、亚克隆、回文序列、单克隆、cDNA文库

黏末端：

含有单链末端的限制性内切核酸酶酶解产物被称为黏末端，具有突出末端，其特性在于它们可通过单链末端的碱基配对，与其他任何具有相同突出序列的末端结合。

亚克隆：

将已克隆的DNA片段从一载体向另一载体的转移的过程。

回文序列：

双链DNA中的一段倒置重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构，这段序列被称为回文序列。

单克隆：

带有重组DNA的宿主细胞的增殖构成了一群具有遗传一致性的个体，称为单克隆。

cDNA文库：

以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合，称为该细胞的cDNA文库。

7作为载体所具有的三大特点？

•具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点，能够在宿主细胞中独立复制，并稳定地保存；

•具有多种单一的限制酶切位点；

•具有合适的选择性标记，分子量小，以提高其装载能力。

H克隆载体

1蓝白筛选被用于（D）

A检测细菌中某一质粒的存在B提示一个克隆化DNA片段的性质

C表示一个克隆化基因D检测质粒中某一插入片段的存在

2多克隆位点（B）

A含有许多拷贝的克隆化基因

B是对克隆所用的限制酶的选择具有灵活性

C是对克隆所用的生物种类的选择具有灵活性

D含有许多拷贝的同一种限制酶切位点

3λ噬菌体对大肠杆菌的感染一般用（C）检测

A细菌对某种抗生素的抗性B单菌落在琼脂平板上的生长

C琼脂平板上产生裂解细菌区域D细菌DNA的限制性消化

4哪一个载体适用于150kbDNA片段的克隆（C）

A质粒Bλ噬菌体CBACDYAC

5要在植物中表达一个外源基因，应该选用哪个载体（D）

A杆状病毒载体B反转录病毒载体CYep载体DT-DNA载体

cos位点

cos位点：

当λ噬菌体DNA进入细菌细胞后，便迅速通过黏性末端配对形成双链环状的DNA分子，这种黏性末端结合形成双链的区域称为cos位点。

7质粒、λ噬菌体、黏粒、BAC、YAC载体最大可分别容纳多大DNA片段？

优缺点各是什么？

载体

插入的片段大小上限（kb）

优点

缺点

质粒

具有合适的选择性标记，分子量小，并稳定地保存

可能在DNA的纯化过程中发生链的断裂

λ噬菌体

23

无需体外包装，转染的效率比质粒的转化效率高，可通过溶原反应整合到宿主基因组

包装过程复杂，效率不稳定，用途没有质粒广泛

黏粒

45

包含质粒的复制起点、选择性标记以及λ噬菌体cos位点，在氨苄青霉素的选择压力下扩增

λ噬菌体颗粒包装过程复杂，效率不稳定

BAC载体

350

稳定、容易转化、在大肠杆菌宿主中生长迅速、应用标准质粒小量制备技术

拷贝数小，制备难度大

YAC载体

1000

对巨大基因组的大规模结构进行作图时很有效

克隆的片段在增殖中会丢失部分DNA

I基因文库与筛选

1以下关于基因组文库陈述哪两个是错误的（AE）

A基因组文库是用cDNA制备的

B包括某种生物所有基因的基因组文库，必定是代表性文库

C若要含有某种生物的所有基因，基因子文库就必须含有最少的重组子

DDNA必须先被切成适合用于所用的载体的大小

E真核生物DNA的基因组文库通常用质粒载体

2以下对cDNA克隆步骤的描述哪一个是正确的（A）

AmRNA的反转录，第二链合成，cDNA末端修饰，连接到载体上

BmRNA制备，用反转录酶合成cDNA，用末端转移酶合成第二链，连接到载体上

C用RNA聚合酶合成mRNA，mRNA的反转录，第二链合成，连接到质粒上

D双链cDNA合成，限制酶消化，加接头，连接到载体上

3以下哪一种方法对于筛选文库是无效的（D）

A用核酸探针对菌落和（或）噬菌体溶出的DNA进行杂交

B用目标蛋白的抗体筛选表达文库

C从其生物活性的表达文库中筛选克隆

D用抗体作探针对菌落和（或）噬菌体溶出的DNA进行杂交

4什么是基因组文库？

一个生物体的基因组DNA用限制性内切酶部分酶切后，将酶切片段插入到载体DNA分子中，所有这些插入了基因组DNA片段的载体分子的集合体，将包含这个生物体的整个基因组，也就是构成了这个生物体的基因组文库。

5简述菌落及噬菌斑杂交原理。

把基因组中含有特定碱基序列的噬菌体，通过与RNA或DNA杂交，再从多数噬菌体的噬菌斑中选出的方法。

将在琼脂培养基上形成的噬菌体的噬菌斑，拓印移于硝酸纤维素滤纸上，再用碱处理将噬菌体粒子破坏使DNA变性，然后使之固定于硝酸纤维素滤纸上，再与用放射性同位素标记的特定的RNA或DNA片段进行杂交，通过放射自显影法来识别含有所需DNA序列的噬菌体的噬菌斑，然后根据其在硝酸纤维素滤纸上的位置，从原来的琼脂培养基对应位置处中选出与其对应的噬菌斑。

包括转移，结合，杂交，检测，鉴别。

J克隆DNA的分析与应用

1一个线性DNA片段的一端被100%标记且有3个EcoRI位点，如果该片段被EcoRI部分消化并得到所有可能产生的片段，将会有多少片段被标记，多少片段未被标记？

A4,6B4,4C3,5D3,3

酶切片段：

被标记：

AABABCABCD；

未被标记：

BBCBCDCCDD

2以下关于PCR的陈述哪一个是错误的？

（D）

APCR循环包括模板变性，引物退火和核苷酸聚合

BPCR要用热稳定的DNA聚合物

C理想的PCR引物要长度和G+C含量都相似

DPCR条件的优化通常包括镁离子浓度的变化和聚合温度的变化

E如果PCR的效率达到100%，那么在n个循环之后目标分子将被扩增2n倍

3以下关于基因作图技术的陈述哪两个是正确的（CD）

AS1核酸酶作图法确定的是基因中的非转录区

B引物延伸法确定的是基因中的非转录区

C凝胶阻滞法可以显示蛋白能否与某一DNA片段结合并阻滞该片段通过琼脂糖凝胶的迁移

DDNaseI足迹法确定蛋白结合到某一DNA片段中的哪一个区域

E基因启动子中DNA序列的功能可以通过将其连接到报道基因下游并分析其表达来确定

4关于诱变技术的陈述哪一个是错误的（A）

A外切酶Ⅲ将DNA的一条链从5’凹端按5’-3’方向切除

B外切酶Ⅲ将DNA的一条链从3’凹端按3’-5’方向切除

C在PCR中可以用诱变引物来引入碱基变化

D可以用诱变引物、单链模板和DNA聚合酶来引入碱基变化

E可用限制酶产生缺失突变

5关于基因克隆的陈述哪一个是错误的（B）

A可以用克隆来大量表达重组蛋白

BDNA足迹法被用于检测与DNA结合的蛋白

C被克隆的基因可被用于检测致病基因的携带者

D基因治疗是通过将正确的基因导入病人体内以纠正原有的错误

E遗传修饰生物已被用来生产临床上有重要用途的蛋白

6简述PCR原理、特点

PCR的基本原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板序列的两端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，不断重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。

因为新合成的DNA也可以作为模板，因而PCR可使DNA的合成量呈指数增长。

包括变性，引物退火，延伸三步。

特点：

灵活，时间短，高效，专一性强。

灵敏度高，简便，纯度要求低。

7简述几种PCR派生技术

①复合PCR：

PCR可用于扩增同一反应中多个DNA片段，用多套引物。

②反向PCR：

先用限制性内切酶消化DNA，然后用连接酶连接环化，一对背对背的引物可用于从已知序列区域扩增该圆环以获得5’到3’侧翼区直到连接的限制位点。

③cDNA末端快速扩增：

RACE（rapid-amplificationofcDNAends）是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段，通过往两端延伸扩增从而获得完整的3’端和5’端。

④PCR诱变：

将特异突变引入到一特定DNA片段中。

⑤定量PCR：

在扩增前的样品中加入已知数量的相似DNA片段，如含有短的缺失的DNA片段，两种产物的比例取决于加入的缺失片段数量，并可算出目标分子的数量。

⑥不对称PCR：

只有一条链被扩增。

K原核生物的转录

1以下关于转录的陈述哪两个是正确的（BD）

ARNA合成按3’-5’方向进行的

BRNA聚合酶按5’-3’方向沿DNA有义链移动

CRNA聚合酶按5’-3’方向沿DNA模板链移动

D转录所得到的RNA与模板链互补

ERNA聚合酶将核苷酸添加到正在生成的RNA链的5’端

FRNA聚合酶将脱氧核苷酸添加到正在生成的RNA链的5’端

2以下关于大肠杆菌RNA聚合酶的陈述哪一个是错误的（B）

A全酶包括σ因子B核心酶包括σ因子

C需要Mg2+才有活性D需要Zn2+才有活性

3以