StepOnePlus型PCR仪操作规程和PCR仪简易设置指南Word格式文档下载.docx
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启动电脑,打开定量PCR仪电源开关:
双击桌面“StepOneSoftware”图标,出现Login登录界面,点击“OK”,打开软件。
起始界面如图所示,点击红色椭圆的三角图标,展开软件功能按钮。
点击左侧“SetUp”功能选项中的“AdvancedSetup”高级设置向导。
在打开的设置界面,左侧为导航树,选择不同的功能选项,右侧显现为不同的设置功能。
默认条件下,显示为“ExperimentProperties”实验属性。
右侧界面,带有红色*号位置需要输入或者通过鼠标进行选择。
不带*号位置为选填,可以保持空白。
在途中位置输入实验名称,该名称根据需要进行填写。
选择仪器类型、实验类型、荧光标记方法以及反应速度。
左侧导航树,选择“PlateSetup”设置选项。
右侧“DefineTargets”选项下“TargetName”处设置检测基因的名称,如FluA,Reporter下拉菜单选择“FAM”,Quencher下拉菜单选择“None”
点击“AddNewTarget”,并按照第7步所述进行设置。
根据需要添加所需基因,如SWH1、SWFluA1和RNP。
在“DefineSamples”填写检测样本的名称,如果需要多个样本,通过“AddNewSample”添加多个样本。
鼠标点击“AssignTargetsandSamples”切换设置界面。
鼠标滑倒图中椭圆所处位置,变化为双向箭头,通过拖动鼠标,可以改变左右两侧窗口大小。
鼠标选择样品放置的位置,如B4,鼠标勾选样品名称及所要检测的基因。
根据样品孔的数量,依次进行设置。
鼠标拖动椭圆位置,向下拖动。
在“Selectthedyetouseasthepassivereference”的下拉菜单处选择“None”
点击“RunMethod”设置反应条件:
在“ReactionVolumePerWell”处输入反应体积,如20ul或者25ul。
点击温度或者时间,通过输入数值可以更改温度的大小及时间的长短。
在“NumberofCycles”可以输入循环数。
根据试剂盒的说明书,改变反应条件。
在软件上,Stage指温度阶段,有HoldingStage和CyclingStage两种类型。
HoldingStage只有一个Step(温度步骤),CyclingStage可以有几个Step(温度步骤),并且多次循环该温度参数。
点击“AddStage”可以选择添加Stage及类型。
在CyclingStage可以添加Step(温度步骤)
选中某个温度步骤,如黄色区域所指的60℃位置。
点击“AddStep”,选择Before(之前)或者After(之后),即可添加温度步骤,根据需要更改温度或者时间。
选择采集荧光的温度步骤。
选择采集温度的步骤:
点击“DataCollection”图标,使其处于激活状态,如72℃。
同时,点击55℃下“DataCollection”图标采集图标,使其处于未激活状态。
点击“Save”保存实验,再点击“STARTRUN”开始运行实验。
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