岛津SPD高效液相色谱仪确认方案Word下载.docx

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工作站：

工作站

N2000色谱工作站

生产厂家

大学智达自动化信息工程

1.2.仪器用途

该仪器用于样品含量、有关物质、聚合物等的检测。

2.目的

对该仪器进行安装确认、运行确认及性能确认，以确定仪器是否仍具有良好的检测性能，是否仍能满足日常分析测试工作的需要。

3.围

适用于岛津高效液相色谱仪SPD-15C的确认。

4.验证小组成员及职责

人员

部门

职责

项目负责人

负责确认方案的起草

负责按确认方案的要求参与并组织实施确认

负责收集确认记录，对确认结果进行分析，起草确认报告

负责对参与确认的检验人员进行确认方案及操作规程培训

组员

按确认方案，参与确认实验的操作

质量保证部

负责监督确认实施的进展情况

5.方案执行

所有的空白记录都要被填写，如果项目不适用，用单线划掉，签名并注明日期。

所有的测试项目都应完成，若未完成应记录，按偏差处理，并说明相关原因和解决的措施。

所有的偏差均要求记录，并用适当的方法评估其影响，并证明采取的纠正措施是可以被接受的。

偏差记录见确认记录中“6．偏差处理记录”。

6.容

6.1.文件检查

6.1.1.目的

确保与本次确认的相关文件都齐全。

6.1.2.程序

6.1.2.1.确定仪器使用说明书等相关原始资料和技术文件齐全。

6.1.2.2.相关人员接受了确认方案及相关操作规程的培训。

6.1.2.3.确认方案中涉及的所有仪器均经过校准，并在有效期，且有必需的相关证书。

6.1.3.可接受标准

根据确认记录中“1.文件检查记录”的要求，核对相关文件，确保文件完整。

相关人员接受了确认方案及相关操作规程的培训。

确保岛津SPD-15C高效液相色谱仪及其他仪器经过校准，在有效期，且有相应的证书。

6.1.4.原始记录

检查记录见确认记录“1.文件检查记录”及“2.仪器与试剂”。

6.2.具体确认步骤

6.2.1.仪器与试剂

6.2.1.1.要求

秒表：

分度值不大于0.1s；

分析天平：

最大称量不小于100g，最小分度不大于1mg；

温度计：

温度围0～100℃、最小分度值不大于0.1℃；

甲醇：

HPLC用；

丙酮：

分折纯；

紫外吸收标准溶液:

取120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/l硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，摇匀，即得重铬酸钾的硫酸溶液；

1×

10-7g/mL的萘/甲醇标准溶液；

10-4g/mL的萘/甲醇标准溶液。

6.2.1.2.具体见确认记录“2.仪器与试剂”。

6.2.2.安装确认

6.2.2.1.目的

由于在初始安装岛津SPD-15C高效液相色谱仪时，未进行系统的安装确认，故在本次确认中，重新对零配件和仪器的安装条件进行确认，保证各项检查项目结果合格，仪器的安装正确，且能正常运行。

6.2.2.2.程序

对照使用说明书，确认环境、电源等是否符合要求，具体确认步骤按“3.安装确认记录”进行。

6.2.2.3.可接受标准

实验室电源设计安装合理，环境良好，符合仪器安装要求。

环境、电源等符合仪器要求。

6.2.2.4.原始记录

运行确认结果见确认记录中“3.安装确认记录”。

6.2.3.运行确认

6.2.3.1.目的

确认岛津SPD-15C高效液相色谱仪的各项功能是否达到设计要求，并能顺利运行。

6.2.3.2.程序

6.2.3.2.1.运行确认开始前状态的确认

安装确认成功完成；

设备与电源连接正常。

6.2.3.2.2.操作功能键确认

按“4.1操作功能键确认”，确认仪器的主要操作功能键及其功能是否正常。

6.2.3.2.3.基本运行功能确认

按“4.2基本运行功能确认”，确认仪器的基本运行功能是否正常。

6.2.3.2.4.输液系统的确认

6.2.3.2.4.1.泵耐压的确认

将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为1mL/min，按说明书启动仪器，压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。

卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值39.2MPa的90%，保持5min无泄漏。

6.2.3.2.4.2.泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的确认。

按表1的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表1规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式

（1）、式

（2）计算SS和SR。

SS=（

m-

S）/

S×

100%

（1）

SR=（

max-

min）/

m×

100%

（2）

式中：

m——

m=（W2-W1）/（ρt.t），流量实测值，mL/min；

W2——容量瓶+流动相的质量，g；

W1——容量瓶的质量，g；

ρt——试验温度下流动相的密度，g/mL；

t——收集流动相的时间，min；

m——同一组测量的算术平均值，mL/min；

S——流量设定值，mL/min；

max——同一组测量中流量最大值，mL/min；

min——同一组测量中流量最小值，mL/min。

表1

流量设定值/（mL/min）

0.5

1.0

2.0

测量次数

3

流动相收集时间/min

10

5

6.2.3.2.4.3.梯度误差

由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B经由5个阶梯从0变到100%，如图1所示。

将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。

求出A，B溶剂不同比例时的输出信号值，重复测量2次，计算平均值。

从B溶剂的含量及对应的输出信号值，按式（3）计算梯度误差Gci，取Gci最大者作为仪器梯度误差。

Gci=（

i-

m）/

100%（3）

Gci——第i阶段梯度误差（%）；

i——第i阶段输出信号值增量的平均值；

i=

（i-1）（i=0,1,2,3,4,5）；

m——各段输出信号值增量平均值的平均值；

m=

。

图1

6.2.3.2.5.柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的确认

将数字温度计探头固定在柱温箱，选择35℃和45℃进行确认。

按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。

平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。

6.2.3.2.6.紫外-可见光检测器的确认

6.2.3.2.6.1.波长示值误差和重复性

用一节空管代替色谱柱将液路连通，以水为流动相流量为1.0mL/min，采用步进进样方法，在235nm、257nm、313nm和350nm波长处检定仪器的波长示值误差。

从检测器波长较规定波长低5nm处开始到较规定波长高5nm处（例如确认257nm时，从252nm开始到262nm），从低于5nm开始，注入紫外吸收标准溶液10μL，待色谱峰出来完毕后再将检测器波长调高1nm，再注入紫外吸收标准溶液10μL，这样将得到一组不同波长的色谱峰，最高（或最低）色谱峰对应的波长与标准溶液波长之差，即为波长示值误差，示意图如图2；

每个波长重复测量三次，其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。

图2

6.2.3.2.6.2.基线噪声和基线漂移的确认

）hd选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流速为1mL/min，紫外检测器的波长选在254nm检测器灵敏度调到最灵敏档，开机预热，待仪器稳定后（约60min）记录基线60min，从30min基线上读出噪音值（峰对峰的最大宽度），用工作站色谱图显示的物理量（mv）作单位表示；

从60min基线上读出基线漂移值（坐标轴放大后读取），基线漂移用1h基线偏离原点的值（mv/h）表示。

6.2.3.2.6.3.最小检测浓度的确认

在6.2.3.2.6.2.的色谱条件下，注入10μL或20μL1×

10-7g/mL的萘/甲醇标准溶液，记录色谱图，按式（4）计算最小检测浓度cL。

cL=

（4）

cL——最小检测浓度，g/mL；

Nd——检测器基线噪声峰高，mv；

c——标准溶液浓度，g/mL；

H——标准溶液的色谱峰高，mv；

V——进样体积，μL。

6.2.3.2.7.自动进样器进样量准确度误差的确认

取1.5ml进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样器上让其进样10次，每次10μl。

进样完成后再精密称定其重量，按式（5）由重量差计算进样量准确度。

进样准确度=

×

100%（5）

Ma——进样前进样瓶重（mg）；

Mb——进样后进样瓶重（mg）；

V——进样体积，μL；

ρt——试验温度下（自动进样器设置温度）流动相的密度，mg/μL。

.—0

6.2.3.3.原始记录

运行确认结果见确认记录中“4.运行确认记录”。

6.2.3.4.可接受标准

6.2.3.4.1.仪器的主要功能键及其功能正常，仪器的基本运行功能正常。

6.2.3.4.2.泵耐压的确认：

输液管路接口紧密牢固，在5min无泄漏。

6.2.3.4.3.泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR：

流量为0.5mL/min时SS≤5%，SR≤3%；

流量为1.0mL/min时SS≤3%，SR≤2%；

流量为2.0mL/min时SS≤2%，SR≤2%。

6.2.3.4.4.梯度误差GC：

GC不超过±

3%。

6.2.3.4.5.柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC：

ΔTS不超过±

2℃；

TC不超过1℃。

6.2.3.4.6.波长示值误差和重复性：

波长示值误差不超过±

2nm；

波长重复性优于2nm。

6.2.3.4.7.基线噪声和基线漂移：

基线噪声不超过5×

10-4mv；

基线漂移不超过5×

10-3mv/h。

6.2.3.4.8.最小检测浓度：

最小检测浓度不超过1×

10-7g/mL的萘/甲醇溶液。

6.2.3.4.9.自动进样器进样量准确度误差：

进样误差不得过2%。

6.2.4.性能确认

6.2.4.1.目的

确认岛津SPD-15C高效液相色谱仪的整机性能是否符合规定，达到定性、定量重复性的要求。

6.2.4.2.程序

6.2.4.2.1.性能确认开始前状态的确认

运行确认成功完成；

仪器与电源连接正常。

6.2.4.2.2.性能确认（定性、定量重复性的确认）

将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，检测波长为254nm，柱温设定为40℃,待基线稳定后注入10μL的1×

10-4g/mL萘/甲醇标准溶液；

连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，以保留时间计算其定性测量重复性误差，以峰面积计算其定量测定重复性误差。

按式（6）计算相对标准偏差RSD。

RSD6定性（定量）=

（6）

RSD6定性（定量）——定性（定量）测量重复性相对标准偏差；

——第i次测得的保留时间或峰面积；

——6次测量结果的算术平均值；

i——测量序号。

6.2.4.3.原始记录

性能确认结果见确认记录中“5.性能确认记录”。

6.2.4.4.可接受标准

定性测量重复性（6次测量）RSD不超过1.5%；

定量测量重复性（6次测量）RSD不超过2.0%。

6.3.再确认

6.3.1.在一般正常情况下，每年再确认一次。

6.3.2.如遇任何重大变更：

如更换重要零件或重大维修项目，完成后均需要再次确认，以证明各种重大变更不会对现有使用效果产生影响。

6.4.确认结论

确认结论见确认记录中“7.确认结论”。

6.5.确认报告

确认报告见《岛津SPD-15C高效液相色谱仪确认报告》。

7.参考文件

本方案依据下面列出规或资料的有关条款，结合本公司需求制定。

7.1.《药品生产质量管理规（2010年修订）》

7.2.《中华人民国药典（2010版二部）》

7.3.《药品GMP指南·

质量控制实验室与物料系统》

7.4.《岛津SPD-15C紫外-可见检测器说明书》

7.5．《岛津LC-15C溶剂输送泵说明书》

7.6.《岛津SIL-20AC自动进样器说明书》

7.7.《液相色谱仪检定规程JJG705-2002》

岛津SPD-15C高效液相色谱仪确认记录

1.文件检查记录

1.1.仪器原始资料及操作规程检查

文件名称

文件编号/档案号

文件保存地点

岛津SPD-15C高效液相色谱仪使用说明书

岛津系列高效液相色谱仪操作规程

岛津系列高效液相色谱仪维护保养操作规程

岛津系列高效液相色谱仪清洁操作规程

检查人

检查日期

复核人

复核日期

结论：

评价人：

日期：

年月日

1.2.文件培训检查

培训容

培训讲师

参加人员

日期

是否有培训记录

岛津SPD-15C高效液相色谱仪确认方案

高效液相色谱法操作规程

2.仪器与试剂

2.1.仪器

仪器

型号

级别/

规格

编号

生产

厂家

校准

有效期

是否有

校准报告

是否符合要求

秒表

分析天平

温度数据采集仪

温湿度计

2.2.试剂

品名

批号

级别

（纯度）

供应商/来源

是否

符合要求

甲醇

丙酮

基准重铬酸钾

硫酸

10-7g/mL的萘/甲醇标准溶液

10-4g/mL的萘/甲醇标准溶液

评价人：

3.安装确认记录

项目

可接受标准

结果

室环境

室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，无直射，排风良好。

环境温度

室温在15～30℃，温度变化不超过3℃，室湿度在20%～85%围。

安装位置

仪器应平稳地放置在工作台上周围无强烈的机械震动和电磁干扰源。

电源

电源电压为（220±

22）V，频率为（50±

0.5）HZ，以稳压器输出。

接地

仪器接地良好。

4．运行确认记录

4.1.操作功能键确认

输液泵【POWER】

按下输液泵【POWER】输液泵通电，输液泵显示屏亮，等待约3秒输液泵显示屏显示主界面。

输液泵排气阀【DRAIN】

可逆时针打开输液泵排气阀【DRAIN】1/2圈。

输液泵【purge】

逆时针打开输液泵排气阀【DRAIN】1/2圈，按下【purge】输液泵开始排气。

5分钟后自动停止。

输液泵【pump】

按下输液泵【pump】键，输液泵开始输液。

输液泵【sleep】

按下输液泵【sleep】键，输液泵控制面板灯灭，进入睡眠状态。

输液泵【edit】

按下输液泵【edit】进入梯度编辑界面。

输液泵【Enter】

按下输液泵【edit】进入梯度编辑界面，输入时间5min，再按下【Enter】键，即设置初始梯度执行时间为5min。

输液泵【del】

按下输液泵【edit】进入梯度编辑界面，输入时间5min，再按下【Enter】键，即设置初始梯度执行时间为5min，再按下【del】键删除设置的时间。

输液泵【CE】

在梯度编辑界面按下【CE】键，返回上级菜单。

输液泵【func】

按下输液泵【func】键，进入输液泵菜单，再次按下【func】键，进入下一菜单。

输液泵【conc】

按下输液泵【conc】键，进入梯度初始比例设置界面。

输液泵【run】

按下输液泵【run】键，输液泵run指示灯亮，输液泵开始执行梯度输液。

检测器【POWER】

按下检测器【POWER】键，检测器通电，显示屏亮，进入自检界面，等待约3分钟，检测器显示屏显示主界面。

检测器【func】

按下检测器【func】键，进入检测器菜单界面，再按下检测器【func】键，进入下一菜单。

检测器【enter】

按下检测器【func】键一次，显示波长设置菜单，按下【enter】键，进入波长设置界面，输入254nm再按下【enter】键即设置254nm为检测波长。

检测器【del】

按下检测器【func】键一次，显示波长设置菜单，按下【enter】键，进入波长设置界面，输入254nm，再按下【del】键即删除254nm。

检测器【CE】

再按下【CE】键返回上级菜单。

检测器【zero】

在检测器工作状态下，按下【zero】键，检测器显示屏上显示0.00AU。

检测器【sleep】

按下检测器【sleep】键，检测器控制面板灯灭，进入睡眠状态。

自动进样器【POWER】

按下自动进样器【POWER】键，自动进样器通电，显示屏进入主界面。

自动进样器【purge】

按下【purge】键，自动进样器进入自动清洗进样口，25min后停止。

自动进样器【edit】

按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单。

自动进样器【enter】

按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单，再按下【enter】键进入进样程序编辑。

自动进样器

【del】

按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单，按下【del】克对编辑好的程序删除。

【CE】

按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单，按下【del】克对编辑好的程序删除，再按下【CE】键返回上级菜单。

【start/stop】

按下【start/stop】键，自动进样器开始按程序设定进样。

自动进样器【sleep】

按下自动进样器【sleep】键，检测器控制面板灯灭，进入睡眠状态。

柱温箱电源键

按下电源开关键，电源键指示灯亮，温度显示屏亮。

柱温箱【◣】

连续按下柱温箱【◣】键温度设置显示屏SV光标在不同的温度位数间闪烁。

柱温箱【▲】

按下柱温箱【▲】温度设定值增加

柱温箱【▼】

按下柱温箱【▼】温度设定值降低

4.2.基本运行功能确认

项目

输液泵基本运行功能确认

按下输液泵【POWER】输液泵通电，输液泵显示屏亮，等待约3秒输液泵显示屏显示主界面，逆时针打开输液泵排气阀【DRAIN】1/2圈，按下【purge】输液泵开始排气，5分钟后自动停止，顺时针拧紧输液泵排气阀再按下【func】键，进入菜单界面，流速光标闪烁，输入1.0，按下【enter】即设置流速为1.0mL/min，按下【CE】键返回，按下【pump】键，输液泵开始以1.0mL/min流速运行。

检测器基本运行功能确认

按下检测器【POWER】键，检测器通电，显示屏亮，进入自检界面，等待约3分钟，检测器显示屏显示主界面，按下检测器【func】键一次，显示波长设置菜单，按下【enter】键，进入波长设置界面，输入254nm再按下【enter】键即设置254nm为检测波长，在检测器工作状态下，按下【zero】键，检测器显示屏上显示0.000AU。

自动进样器基本运行功能确认

按下自动进样器【POWER】键，自动进样器通电，显示屏进入主界面，按下【purge】键，自动进样器进入自动清洗进样口，25min后停止，按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单，依次输入进样盘号、初始进样瓶号、结束进样瓶号、重复进样次数、进样量、进样时间，按下【enter】键，再按下【CE】键返回，待仪器显示屏显示READY后，按下【start/stop】键，自动进样器开始按程序设定进样。

柱温箱基本运行功能确认

按下电源开关键，再按下柱温箱【◣】键，再【▲】【▼】键设定目标温度35℃，等待一段时间后，柱温箱温度显示屏PV显示温度35℃。

4.3.输液系统确认记录

4.3.1.泵耐压的确认

泵耐压测试

堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值39.2MPa的90%，保持5min无泄漏。