275第十四章 基因工程技术原理与应用Word格式.docx
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23.噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的.其中来自质粒的结构主要是______和______;
来自噬菌体的主要结构是______。
24.λ噬菌体由于包装的限制,插入外源DNA片段后,总长度应在噬菌体基因组的______范围内。
25.引物在基因工程中至少有4方面的用途:
______、______、和______。
26.利用TaqDNA聚合酶进行PCR反应所得产物不是平末端,而是在______端带有一个突出的______;
据此人们设计了PCR产物的______克隆法。
27.简并引物PCR主要是依据蛋白质的氨基酸序列设计______引物来扩增相应的基因。
28.现有的克隆基因的策略大体上可以分为三类:
29.DNA重组连接的方法大致有4种:
______、______、______和______。
30.SD序列是mRNA分子中与______结合的序列,位于______密码子的上游;
在基因组中的对应位置是______位点与______位点之间。
31.携带有外源基因并能持久传递给子代的植物称为______植物;
这些外源基因就叫做______。
32.重组子的筛选有两层含义,一是______;
二是______。
33.限制性内切核酸酶切割DNA后产生5'
端突出的黏性末端,可以用______进行3'
端标记;
如果限制性内切核酸酶切割DNA后产生3'
端突出的黏性末端,可以用______进行5'
端标记。
34.为了获得单链标记的DNA探针可以采用以下三种方法:
35.根据Northern杂交的结果可以说明______;
根据Southern杂交的结果可以说明______;
根据western杂交的结果可以说明______;
根据原位杂交的结果可以说明______。
36.Northern杂交和Southern杂交的根本区别在于______和______。
37.欲将某一具有单链突出末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式,通常采用的方法有______和______。
38.由于不同构型的DNA插入EB的量的不同,它们在琼脂糖凝胶电泳中迁移率也不同,scDNA的泳动速度______;
ocDNA的泳动速度______;
1DNA居中。
39.在基因工程中,导入外源基因的主要方法有______、______、______和______等。
40.在基因组计划中用来构建人基因组DNA文库的载体通常有4种,分别是______、______、______和______。
41.反向PCR的方法通常用来______;
重组PCR的方法通常用来______;
原位PCR的方法通常用来______。
42.核酸凝胶电泳中常用的染料是______。
43.为对某一生物的基因进行全面的研究,只需建立______个基因组文库,同时必须建立______个cDNA文库。
44.双脱氧链终止法测定DNA碱基序列需要的试剂为______、______、______和______等。
45.TaqDNA聚合酶需要适当浓度的Mg2+才能发挥作用。
Mg2+浓度升高对TaqDNA聚合酶的效应是______;
Mg2+浓度降低,对TaqDNA聚合酶的效应是______。
46.普通质粒载体、入噬菌体载体、黏粒载体和噬菌粒的容量由大到小依次为______、______、______和______。
47.目前栽培面积较大的5种农作物是______、______、______、______和______。
其中以______为最大。
48.外源基因导入植物细胞的方法为______、______和______。
49.外源基因导人动物受精卵的方法有______、______、______、______和______。
50.大肠杆菌中选择性标记一般为______;
酵母菌中选择性标记一般为______。
51.核型多角体病毒有两种表现型______和______;
分别感染______和______。
二、判断题
1.限制与修饰现象是宿主的一种保护体系,它是通过对外源DNA的修饰和对自身DNA的限制而实现的。
()
2.限制性内切核酸酶在DNA中的识别/切割位点的二级、三级结构也影响酶切效率。
3.能够产生限制酶从而防御病毒的侵染的细菌,其本身的基因组DNA中没有该酶的识别序列。
4.限制性酶切图谱和限制性片段长度多态性图谱的区别在于前者是物理图谱,而后者是连锁图谱。
5.某一限制酶在一环状DNA上有3个切点,用此酶切割该环状DNA,可以得到3个片段。
6.基因工程中所使用的内切酶不仅具有内切核酸酶活性,也具有甲基化的活性。
7.用同一种限制性内切核酸酶切割载体和外源DNA得到黏性末端后,为防止它们自身环化,要用CIP将他们脱磷酸。
8.Gap和Nick的含义是不同的,前者是指DNA的单链中有较小的缺失,后者仅是断开了一个磷酸二酯键。
9.线状质粒与环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。
10.有a、b、c三个质粒,a和b能够共存于一个细胞中,a和c也可以共存于一个细胞中,所以b和c也一定能够共存于一个细胞中。
11.如果两个质粒可以稳定共存于一个细胞中,这两种质粒则属于同一个不亲和群。
12.能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。
13.置换型载体是指同一种限制性内切核酸酶在入DNA中具有两个切点,外源DNA通过取代这两个点间的片段被克隆。
14.噬菌体载体集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体,既能合成单链DNA,又能合成双链DNA。
15.λ噬菌体DNA和M13单链噬菌体DNA在成熟前的DNA复制都是用滚环模型。
16.所谓引物就是与DNA互补的一小段RNA分子。
17.简并引物是根据已知DNA序列设计的引物群。
18.通过原位杂交得到的阳性克隆就是重组子,但不能判断插入的外源基因是否表达了。
19.核酸杂交的原理是根据DNA分子间的互补。
20.突出的3'
端或凹端的3'
端都可以用Klenow酶进行末端标记。
21.用氯霉素处理细菌可以使内含的严紧型质粒大量扩增,从而极大地提高其产量。
22.为了在大肠杆菌中高效表达外源蛋白质,常需要考虑的因素有启动子的强弱、SD序列、蛋白的存在方式以及Poly(A)加尾信号等。
23.反转录酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶。
24.反转录酶催化的信息流是蛋白质→RNA→DNA。
25.在克隆载体pUC系列中,lacZ'
基因提供了一个外源基因的选择标记,蓝色的转化菌落通常表明克隆是失败的。
26.只有用同一种限制性内切核酸酶切割获得的DNA片段末端才能够用DNA连接酶连接起来。
三、选择题
1.第1个作为重组DNA载体的质粒是()。
A.pBR3222B.ColE1C.pSC101D.pUC18
2.RFLP产生自()。
A.使用不同的限制性内切核酸酶B.每种类型的染色体有两条
C.染色体中碱基的随机变化D.Southern印迹
E.不同探针的使用
3.Ⅱ型限制性内切核酸酶()。
A.具内切酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
B.仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性有另一种酶提供
C.限制性识别非甲基化的核苷酸序列
D.有外切核酸酶和甲基化酶活性
4.Ⅲ型限制性内切核酸酶()。
A.由两个亚基组成,仅识别半甲基化位点
B.甲基化和限制活性相互排斥:
MS亚基促使甲基化,R亚基促使限制
C.由两个亚基组成,在识别位点附近识别并进行甲基化或限制
D.在错配修复中起关键作用,因为酶结合到DNA上是以结构扭曲为基础,而不是序列错误识别
5.分析限制性内切核酸酶切割DNA所得到的片段长度有助于物理作图,这是因为()。
A.即使只有一种限制酶,因为DNA是线性的,所以也可以迅速准确确定限制片段序列
B.内切酶在等距离位点切割DNA,同时对于每个生物体的长度是特异的
C.DNA的线性意味着单限制酶切片段的长度之和等于DNA的总长
D.内切酶的消化活性是物种特异的
E.这一技术同时为核苷酸序列提供了广泛信息
6.通过限制酶切片段分析,可以对等位基因进行精确的分析比较,其原因是()。
A.限制性内切核酸酶只切割两个变异等位基因中的一个
B.它利用限制性位点作为遗传标记
C.一个特定细胞中等位基因的核苷酸序列不会是相同的
D.限制性内切核酸酶的酶切位点被限制在编码区域内
7.限制性片段长度多态性是()。
A.用于遗传的“指纹结构”模式分析的技术
B.二倍体细胞中的两个等位基因限制性图谱的差别
C.物种中的两个个体限制性图谱的差别
D.两个物种中个体间的限制性图谱的差别
E.两种酶在单个染色体上限制性图谱的差别
8.为了正确地构建一个真核基因组的物理图谱()。
A.必须分离单条染色体
B.必须从单倍体细胞中分离DNA,这样避免由于二倍体细胞中同源染色体的存在而产生的干扰
C.必须进行单个染色体分析
D.必须找到对于每个染色体只切割一次的限制酶
E.必须首先分离核DNA和细胞器DNA,然后分别对它们作图
9.在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制哪一项最好?
A.反应时间B.酶量C.反应体积D.酶反应的温度
10.限制性内切核酸酶可以特异性的识别()
A.双链DNA的特定碱基对B.双链DNA的特定碱基序列
C.特定的三联体密码D.以上都正确
11.下列酶中,催化反应不需要ATP的是()。
A.EcoKB.EcoBC.T4DNA连接D.BamHⅠ
12.限制性内切核酸酶的星号活性是指()。
A.在非常规条件下,识别和切割序列发生变化的活性
B.活性大大提高
C.切割速度大大加快
D.识别序列与原来的完全不同
13.下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?
A.甘油含量过量B.反应体系中含有有机溶剂
C.含有非Mg2+的二价阳离子D.酶切反应时酶浓度过低
14.DNA被某限制性内切核酸酶切割后,电泳得到的电泳带有些扩散,下列原因中哪一项不太可能?
A.酶失活B.底物DNA不纯,污染有蛋白质
C.酶切条件不合适D.由外切核酸酶污染
15.T4DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的,这种酶()。
A.催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源
B.既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接
C.是一种单肽酶,分子质量为74kDa
D.既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接
16.基因工程中,可以用碱性磷酸酶()。
A.防止DNA的自身环化B.降解1)NA样品中混杂的RNA
C.制备突出的3'
端D.上述方法都正确
17.Klenow酶与DNA聚合酶相比,前者丧失了()活性。
A.5'
→3'
合成酶B.3'
→5'
外切酶
C.5'
外切酶D.转移酶
18.下面关于松弛型质粒性质的描述中,不正确的是()。
A.质粒的复制只受本身的遗传结构的控制,而不受染色体复制机制的制约
B.可以用氯霉素作用进行扩增
C.通常带有抗药性标记
D.同严紧型质粒融合后,杂合质粒优先使用松弛型复制子
19.基因工程研究中所用的质粒大多是经过改造的,真正的天然质粒载体很少。
在下列载体中被视为基因工程载体的天然质粒是()。
A.pBR322B.pSC101C.pBSD.pUC18
20.下列载体中对外源DNA片段的容量最大的是()。
A.质粒B.黏粒C.酵母人工染色体(YAC)D.λ噬菌体
21.同一种质粒DNA可以以三种不同的形式存在,它们的迁移速率是()。
A.ocDNA>scDNA>1DNAB.scDNA>1DNA>ocDNA
C.1DNA>ocDNA>scDNAD.scDNA>ocDNA>1DNA
22.关于质粒的相容性,下面哪种说法不正确?
A.不同不相容群的质粒能够共存于同一细胞中
B.质粒可以分为若干个不相容群,但不能分为若干相容群
C.如果a、b两种质粒不相容,说明它们的复制机制相同
D.属于同一个不相容群的质粒,不仅复制机制相同,而且拷贝数和相对分子质量也相同
23.关于穿梭质粒载体,下面哪一种说法最正确?
A.在不同的宿主中具有不同的复制机制
B.在不同的宿主中使用不同的复制起点
C.在不同的宿主中使用不同的复制酶
D.在不同的宿主中具有不同的复制速率
24.能够用来克隆30kb以上大小外源DNA片段的质粒载体是()。
A.charomidB.plasmidC.cosmidD.phagemid
25.Ti质粒()。
A.存在于所有农杆菌细胞中B.作为双链DNA被转移
C.在植物中导致肿瘤D.在植物细胞中作为染色体外质粒
26.建cDNA文库时,首先需分离细胞的()。
A.染色体DNAB.线粒体DNA
C.总mRNAD.tRNAE.rRNA
27.下面关于细菌人工染色体的特征描述,除了()外都正确。
A.通过电激法将其转化大肠杆菌比CaCl2的转化率提高了10~100倍
B.细菌人工染色体在细菌中以超螺旋环状存在,使分离操作相对容易
C.细菌人工染色体在大肠杆菌中保持高拷贝数
D.克隆到细菌人工染色体上的外源片段可以直接进行序列测定以获得末端序列
28.M13K07是一种辅助噬菌体,可以用来帮助噬菌粒制备单链DNA,这是由于()。
A.M13K07能够进行滚环复制,得到大量单链噬菌体DNA
B.M13K07能够提供成熟包装蛋白质
C.M13K07提供成熟包装所需的信号
D.M13K07提供噬菌粒进行单链复制所需的所有蛋白质
29.黏粒是一种人工构建的载体,()。
A.具有cos位点,因此可以进行体外包装
B.具有质粒DNA的复制特性,必须利用CaClz制备的感受态细胞转化入大肠杆菌
C.进入受体细胞后,可引起裂解反应
D.进入受体细胞后,可引起溶原化反应
30.重叠群是一群克隆,在这个克隆群体中各克隆()。
A.相互间重叠B.都是来自不同生物间的克隆
C.插入片段位于不同染色体的不同区段D.位于同一染色体的不同区段
31.关于多克隆位点的描述不正确的是()。
A.仅位于质粒载体中B.具有多种酶的识别序列
C.不同酶的识别序列可以有重叠D.一般是人工合成后添加到载体中的
32.关于DNA接头在基因工程中的作用,下面的说法中哪一项不正确?
A.给外源DNA添加适当的酶切位点B.人工构建载体
C.调整外源基因的可读框D.增加调控元件
33.cDNA文库包括该种生物的()。
A.某些蛋白质的结构基因B.所有蛋白质的结构基因
C.所有的结构基因D.内含子和调控区
34.用下列方法进行重组体的筛选,表明出现了外源基因的产物的方法是()。
A.Southern印迹B.Northern印迹
C.Western印迹D.菌落原位杂交
35.报道基因()。
A.必须是原核生物的基因
B.以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动区
C.产物容易检测
D.能用于确定启动子何时何处有活性
36.在蓝白斑筛选法中,IPTG的作用是()。
A.诱导宿主合成β-半乳糖苷酶的羧基端
B.诱导宿主合成β-半乳糖苷酶的氨基端
C.作为酶反应的底物
D.作为显色反应的指示剂
37.用菌落原位杂交法筛选重组子时,()。
A.需要外源基因的转录产生mRNA,才能进行。
B.需要外源基因的翻译产生蛋白质,才能进行。
C.所用探针必须与克隆的基因有同源性
D.上述说法都正确
38.切口平移是指在()作用下,使()带上放射性标记。
A.DNA聚合酶Ⅰ,RNAB.DNA聚合酶Ⅰ,DNA
C.DNA聚合酶Ⅲ,RNAD.DNA聚合酶Ⅲ,DNA
39.用于Northern杂交的探针可以是放射性标记的()。
A.DNAB.dNTPC.抗体D.抗原
40.随机引物标记探针,下列各项中哪一项是不正确的?
A.双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的
B.不需用DNA酶Ⅰ预处理
C.反应时可用Klenow酶
D.反应时可用DNA聚合酶Ⅰ
41.在切口平移标记DNA探针时只能使用()。
A.Klenow酶B.DNA聚合酶Ⅰ
C.DNA聚合酶ⅡD.DNA聚合酶Ⅲ
42.要对一双链的DNA分子进行3'
端标记可用()。
C.T4DNA聚合酶D.T7DNA聚合酶
43.在细菌转化实验中,如将DNA酶加入培养基,将使转化()。
A.不能实现B.加速C.不受影响D.失去规律
44.以质粒为载体将重组DNA导入受体细胞的过程称为()。
A.转化B.转导C.接合D.转染
45.选用融合蛋白的表达策略的主要优点是()。
A.容易检测表达蛋白B.构建表达载体方便
C.表达产物较稳定D.易获得有天然活力的蛋白质
46.目前在转基因小鼠中常用的基因敲除技术是根据()的原理而设计的。
A.反义核苷酸的抑制作用B.转座成分的致突变作用
C.离体定向诱变作用D.同源重组
47.外源基因在大肠杆菌中高效表达受很多因素影响,其中SD序列的作用是()。
A.提供一个mRNA转录终止子B.提供一个mRNA起始点
C.提供一个核糖体结合位点D.提供一个翻译的终点
48.从大肠杆菌的两个菌株中提纯的一种质粒,一个可以被某种限制性内切核酸酶切开而另一个不可以,是因为()。
A.该质粒在一个菌株中有切割B.该质粒在一个菌株中是线性的
C.该质粒在一个菌株中被甲基化了D.不能被酶切的质粒是线性的
49.当大量的RNA与有限的DNA杂交时()。
A.所有的DNA都杂交上了B.50%的DNA杂交上了
C.50%的RNA杂交上了
D.没有RNA杂交上,而所有的DNA全部复性成为双链DNA
50.下列哪个酶要求有引物才能发挥作用()。
A.限制性内切核酸酶B.DNA连接酶
C.末端转移酶D.反转录酶
51.下列哪种酶不能用于聚合酶链反应(PCR)?
A.TaqDNA合成酶B.T7DNA合成酶
C.引物酶D.Klenow片段
52.胰岛素通常以融合蛋白的方式在大肠杆菌中表达,利用融合处有一个甲硫氨酸残基,可以用何种方法将胰岛素从融合蛋白上切下来。
A.氢氟酸裂解B.羟氨裂解C.蛋白水解酶D.溴化氰裂解
53.有关理想质粒载体的特点,正确的是()。
A.为线性单链DNAB.含有多种限制酶的单一切点
C.含有同一限制酶的多个切点D.其复制受宿主控制
E.不含耐药基因
54.PCR变性温度一般为()。
A.94℃B.85℃C.72℃D.62℃E.55℃
55.在基因工程技术中,不常用到的酶是()。
A.限制性内切核酸酶B.DNA聚合酶C.DNA连接酶
D.反转录酶E.DNA解链酶
56.cDNA是指()。
A.在体外经反转录合成的与RNA互补的DNA
B.在体外经反转录合成的与DNA互补的DNA
C.在体外经转录合成的与DNA互补的RNA
D.在体内经转录合成的与DNA互补的RNA
57.基因组代表一个细胞或生物体的()。
A.部分遗传信息B.整套遗传信息C.可转录基因
D.非转录基因E.可表达基因
58.在基因工程中通常所使用的质粒存在于()。
A.细菌染色体B.酵母染色体C.细菌染色体外
D.酵母染色体外E.以上都不是
59.就分子结构而论,质粒是()。
A.环状双链DNA分子B.环状单链DNA分子C.环状单链RNA分子
D.线状双链DNA分子E.线状单链DNA分子
60.在已知序列信息的情况下,获取目的基因的最方便方法是()。
A.化学合成法B.基因组文库法C.cDNA文库法
D.聚合酶链反应E.差异显示法
61.催化聚合酶链反应的酶是()。
A.DNA连接酶B.反转录酶C.末端转移酶
D.碱性磷酸酶E.TaqDNA聚合酶
62.将PstI限制酶切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连接属()。
A.同聚物加尾连接B.人工接头连接C.平端连接
D.黏性末端连接E.非黏性末端连接
63.限制性内切核酸酶切割DNA后产生()。
A.3'
磷酸基末端和5'
羟基末端B.5'
磷酸基末端和3'
羟基末端
C.3'
磷酸基末端D.5'
羟基末端和3'
E.3'
羟基末端、5'
羟基末端和磷酸
64.基因工程技术中实现目的基因与载体DNA连接的酶是()。
A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.D
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