MiRSNP与结直肠癌发生发展及化疗疗效的相关性研究Word格式.docx
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易感性;
化疗疗效
结直肠癌是临床常见的消化道恶性肿瘤,从全球范围来看,其发病率在女性恶性肿瘤中排名第二,男性中排名第三,在中国其死亡率排名第五,而且患病率呈逐年提升的趋势。
结直肠癌的的发生发展规律目前尚未完全清楚,但是与基因的关系是临床研究的主要方向之一[1-2]。
microRNA是在真核生物中普遍存在的非编码RNA序列,参与到细胞分化、调节、应激、凋亡等多个过程,SNP是人类最为常见的遗传标记物,个体因素所致的肿瘤发生、发展和药物化疗疗效差异,都与SNP有很大关系[3]。
MiRNA的相关SNP(MiR-SNP)不仅影响目标碱基对与miRNA的互补程度,也能影响miRNA对靶基因的调控功能,临床研究发现MiR-SNP共有rs174561、rs2043556、rs2289030和rs6505162四种基因模型,而rs174561与结直肠癌联系更为密切,为了观察其与结直肠癌发生发展及化疗疗效的相关性,笔者进行了本次研究。
1.资料与方法
1.1患者选择
其中男性患者301例,女性患者204例,年龄45-73岁,平均年龄(54.52±
6.81)岁。
低分化66例,中、高分化338例,肿瘤≤5cm256例,>
5cm113例,TNM分期为I+II期163例,III+IV期273例。
其中使用卡培他滨化疗患者214例,使用5-FU化疗171例,使用奥沙利铂化疗164例。
随机选择同一时期至我院进行健康体检的健康人群714例作为对照组,其中男性403例,女性313例,年龄45-75岁,平均年龄(55.06±
7.33)岁。
两组研究人员性别、年龄无统计学差异(P>
纳入标准[4]:
(1)进行结直肠癌化疗的患者。
(2)结直肠是原发病灶的患者。
(3)对本次研究知情同意。
排除标准[5]:
(1)来诊前进行过放化疗治疗的患者。
(2)结直肠是转移病灶。
(3)无结直肠癌家族史。
(4)不同意参与本次研究。
1.2方法
1.2.1研究方法
1.2.1.1全血DNA提取
病例组及对照组患者进行全血DNA提取。
首先取0.5ml抗凝全血,其中加入细胞裂解液,混匀,使DNA充分裂解,再加入1ml无菌双蒸水混匀,使用3000r/min离心机离心3min,去上清液,将DNA稀释缓冲液加入沉淀中,20%SDS,5MNaCl充分混匀,加入适量无菌双蒸水及酚-氯仿混合液,进行混合萃取,再离心分层,取水相转移至另外离心管,在其中加入无水乙醇,析出NDA。
将DNA采用离心方法分离,使用70%乙醇混合去盐,使用灭菌双蒸水溶解,最后对提取的DNA浓度进行测定。
1.2.1.2基因型测定
mircoRNA相关的SNPs位点均采用TYPER4.0软件分析质谱图,进行基因分型。
以DNA为模板进行PCR扩增,PCR扩增产物与8.5USAP酶37℃孵育40分钟,85℃孵育5分钟,热灭活。
将单碱基引物加入到iPLEX反应体系中进行延伸,用树脂对单碱基延伸产物脱盐。
样品从384孔板中转移到飞行时间质谱平台(MALDI-TOF)芯片上,由质谱仪检测。
在飞行时间质谱平台分析质谱图,获取基因型数据。
1.2.2分析指标[6]
观察rs174561基因型分布在病例组和对照组之间的差异,观察rs174561基因型与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、分化程度、TNM分期、病理类型、肿瘤类型的相关性,观察rs174561基因型与卡培他滨、5-FU、奥沙利铂化疗疗效及不良反应的相关性。
评估基因型与CRC的差异性,判定P<
0.05为结果有显著性差异。
根据比值比(oddsradios,ORs)和95%可信区间(95%confidenceintervals,95%CI),比较相应的等位基因与CRC相关性程度高低;
采用HWE(Hardy-weinberg)平衡,评价SNPs位点的基因型频率,判定P>
0.05为统计具有群体代表性[4]。
化疗疗效根据实体瘤的疗效评价标准(RECIST)判定[5],分为完全缓解(completeremission,CR)、部分缓解(partialremission,PR)、病情稳定(steadydisease,SD)和病情进展(progressdisease,PD)四个等级。
化疗疗效好判定为CR和PR,用R表示;
化疗疗效差为判定SD和PD,用D表示。
化疗不良反应评价标准根据WHO化疗药物毒性反应分度标准制定,共分为0度、I度、II度、III度、IV度5个等级。
1.3数据处理
用SPSS19.0统计学数据处理软件处理研究中所有相关数据,计量资料用均数±
标准差(x±
s)表示,并采用t检验,计数资料采用(n,%)表示,采用χ2检验,以P<
0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1两组rs174561基因型与结直肠癌易感性之间关系
这其中,与rs174561的等显性模型中的T/T基因型相比,C/C基因型(OR=0.516,95%CI=0.370-0.718)疾病易感性更低。
详见表1。
表1rs174561的基因型分布
Model
Genotype
Cancer
Control
OR(95%CI)
P-value
Codominant
T/T
236(45.5%)
250(38.9%)
1.00
C/T
210(40.5%)
243(37.8%)
0.915(0.708-1.183)
0.500
C/C
73(14.1%)
150(23.3%)
0.516(0.370-0.718)
<0.001
Dominant
C/T-C/C
283(54.5%)
393(61.1%)
0.763(0.603-0.964)
0.024
Recessive
T/T-C/T
446(85.9%)
493(76.7%)
0.538(0.395-0.732)
Overdominant
T/T-C/C
309(59.5%)
400(62.2%)
1.119(0.883-1.418)
0.353
2.2rs174561与结直肠癌肿瘤大小的相关性
在肿瘤大小上,rs174561等显性模型中尺寸≤5cm的基因型C/T为44.6%和C/C为11.1%,尺寸>5cm的基因型C/T为71.4%和C/C为29.8%;
与rs174561等显性模型中T/T基因型相比,C/T基因型(OR=0.276,95%CI=0.159-0.478)患病的肿瘤尺寸>
5cm的风险更低,而C/C基因型(OR=2.167,95%CI=1.261-3.723)患病的肿瘤尺寸>
详见表2。
表2rs174561与肿瘤大小的相关性
Tumorsize≤5cm
Tumorsize>
5cm
136(44.3%)
72(55.0%)
137(44.6%)
20(15.3%)
0.276(0.159-0.478)
34(11.1%)
39(29.8%)
2.167(1.261-3.723)
0.005
171(55.7%)
59(45.0%)
0.652(0.432-0.983)
0.041
273(88.9%)
92(70.2%)
3.404(2.030-5.708)
170(55.4%)
111(84.7%)
0.224(0.132-0.379)
2.3rs174561与结直肠癌肿瘤TNM分期的相关性
在TNM分期上,rs174561隐性基因模型中pT1+pT2的基因型C/C为9.0%,pT3+pT4的基因型C/C为17.7%;
rs174561超显性基因模型中pT1+pT2的基因型C/T为45.8%,pT3+pT4的基因型C/T为35.6%;
与rs174561隐性模型中T/T-C/T基因型相比,C/C基因型(OR=2.161,95%CI=1.166-4.005)患病的pT3+pT4风险更高;
与rs174561超显性基因模型中T/T-C/C相比,C/T基因型(OR=0.655,95%CI=0.445-0.965)患病的pT3+pT4风险更低。
详见表3。
表3rs174561与TNM分期的相关性
pT1+pT2
pT3+pT4
70(45.2%)
156(46.7%)
71(45.8%)
119(35.6%)
0.752(0.500-1.130)
0.170
14(9.0%)
59(17.7%)
1.891(0.990-3.613)
0.054
85(54.8%)
178(53.3%)
0.940(0.641-1.377)
0.750
141(91.0%)
275(82.3%)
2.161(1.166-4.005)
0.014
84(54.2%)
215(64.4%)
0.655(0.445-0.965)
0.032
2.4rs174561与结直肠癌肿瘤病理类型的相关性
在病理类型上,rs174561等显性模型中Infiltratingtype的基因型C/T为37.3%,Polyptype的基因型C/T为54.2%,与等显性模型中T/T基因型相比,C/T基因型(OR=2.108,95%CI=1.067-4.166)患病的Polyptype风险更高;
rs174561等显性模型中Polyptype的基因型C/T为54.2%和C/C为16.9%,Ulcertype的基因型C/T为33.6%和C/C为12.5%,与等显性模型中T/T相比,C/T基因型(OR=0.332,95%CI=0.200-0.548)和C/C基因型(OR=0.394,95%CI=0.199-0.782)患病的Ulcertype风险更低;
rs174561等显性模型中Infiltratingtype的基因型C/C为20.9%,Ulcertype的基因型C/C为12.5%,与等显性模型中T/T基因型相比,C/C基因型(OR=0.464,95%CI=0.217-0.990)患病的Ulcertype风险更低。
详见表4-1、4-2、4-3。
表4-1rs174561与病理类型的相关性
Infiltratingtype
Polyptype
28(41.8%)
34(28.8%)
25(37.3%)
64(54.2%)
2.108(1.067-4.166)
14(20.9%)
20(16.9%)
1.176(0.505-2.743)
0.707
39(58.2%)
84(71.2%)
1.774(0.947-3.324)
0.074
53(79.1%)
98(83.1%)
0.773(0.361-1.653)
0.506
42(62.7%)
54(45.8%)
1.991(1.078-3.677)
0.028
表4-2rs174561与病理类型的相关性
Ulcertype
125(53.9%)
78(33.6%)
0.332(0.200-0.548)
29(12.5%)
0.394(0.199-0.782)
0.008
107(46.1%)
0.346(0.216-0.557)
203(87.5%)
0.700(0.377-1.299)
0.258
154(66.4%)
0.427(0.272-0.672)
表4-3rs174561与病理类型的相关性
0.699(0.380-1.285)
0.249
0.464(0.217-0.990)
0.047
0.615(0.355-1.065)
0.083
0.541(0.267-1.095)
0.088
0.851(0.484-1.497)
0.575
2.5rs174561与结直肠癌肿瘤类型的相关性
在肿瘤类型上,rs174561等显性基因模型中Colon的基因型C/T为42.3%,Rectal的基因型C/T为34.3%;
rs174561显性基因模型中Colon的基因型C/T-C/C为58.1%,Rectal的基因型C/T-C/C为48.1%;
与rs174561等显性模型中T/T基因型相比,C/T基因型(OR=0.655,95%CI=0.442-0.970)患病的Rectal风险更低;
与rs174561显性基因模型中T/T相比,C/T-C/C基因型(OR=0.669,95%CI=0.467-0.960)患病的Rectal风险更低。
详见表5。
表5rs174561与肿瘤类型的相关性
Colon
Rectal
117(41.9%)
109(51.9%)
118(42.3%)
72(34.3%)
0.655(0.442-0.970)
0.035
44(15.8%)
29(13.8%)
0.707(0.414-1.210)
0.206
162(58.1%)
101(48.1%)
0.669(0.467-0.960)
0.029
235(84.2%)
181(86.2%)
0.856(0.515-1.421)
0.547
161(57.7%)
138(65.7%)
0.712(0.491-1.032)
0.073
2.6rs174561与结直肠癌肿瘤浸润深度的相关性
在直肠癌肿瘤浸润深度上,rs174561各分型与其无明显相关性。
详见表6。
表6rs174561与浸润深度的相关性
T1+T2
T3+T4
OR(95%CI)
32(46.4%)
194(46.2%)
23(33.3%)
167(39.8%)
1.198(0.674-2.127)
0.538
14(20.3%)
59(14.0%)
0.695(0.348-1.389)
0.303
37(53.6%)
226(53.8%)
1.008(0.605-1.679)
0.997
55(79.7%)
361(86.0%)
0.642(0.336-1.228)
0.180
46(66.7%)
253(60.2%)
1.320(0.771-2.259)
0.311
2.7rs174561与结直肠癌肿瘤淋巴转移的相关性
在直肠癌肿瘤淋巴转移上,rs174561各分型与其无明显相关性。
详见表7。
表7rs174561与淋巴转移的相关性
Lymphnodemetastasis=no
Lymphnodemetastasis=yes
89(45.9%)
137(46.4%)
81(41.8%)
109(36.9%)
0.874(0.591-1.294)
0.502
24(12.4%)
49(16.6%)
1.326(0.760-2.314)
0.320
1
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