农产品安全与检测实习总结Word格式.docx
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(4)田间试验的设计(试验次数,地点,小区,供试作物,施药方法和次数等)
(5)最终残留量试验(施药剂量,次数和时间,采收间隔期等)
(6)消解动态实验(消解动态和半衰期的表示,试验种类,试验的剂量)
(7)残留试验的样品采集和运输
(8)结果计算和表述
三、实验部分
A.微生物污染及检测
1.微生物污染检测之大肠菌群的测定
1.1实验目的
掌握农产品检验过程中大肠菌群的测定方法以及了解大肠菌群的食品卫生学意义,巩固课程所学知识。
1.2实验材料
1.2.1实验样品:
清水
1.2.2实验用具:
试管160*16、杜氏小管、脱脂棉、橡皮筋、移液枪、枪头、小烧杯、标签纸、伊红美兰培养基。
1.3检测方法
乳糖发酵实验:
样品稀释后(保证最高稀释度的试管均为阴性反应),选择3个稀释度,每个稀释度接种到3个乳糖发酵管中。
36℃±
1℃培养24h±
2h,,观察是否产气。
1.4操作步骤
1.4.1乳糖发酵管的制备与灭菌
根据乳糖发酵培养基的说明书,配制乳糖发酵培养基,分装到9支试管中,并将杜氏小管倒置于试管内,灭菌,备用。
1.4.2大肠菌群的检测
分别取自来清水的含菌稀释液(x10)1ml,0.1ml和0.01ml,分别接种到乳糖发酵管中,每个稀释度3支,置36℃±
1℃温箱内,培养24h±
2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告无大肠菌群。
1.5实验结果与分析
1.5.1图像展示
[实验前][实验后]
1.5.2结果分析
实验结果显示乳糖发酵管都不产气,说明华农的自来水中无大肠菌群。
2.黄曲霉毒素B1酶联免疫定量测试
2.1实验目的
了解固相酶联免疫吸附(ELISA)原理;
掌握AFB1含量的测定方法及样品稀释液的配制。
2.2实验原理
利用固相酶联免疫吸附(ELISA)原理,通过抗黄曲霉毒素B1抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应以及酶的催化显色反应相结合来检测黄曲霉毒素B1(AflatoxinB1,AFB1),适用于各类食品、原粮及其制品、饲料及相关原料中AFB1的定量检测,特点是灵敏度高,特异性好,操作简便,结果易判读。
2.3实验用品
①包被抗体的反应板96/48/24孔
②A试剂:
样品稀释液一瓶
③B试剂:
AFB1标准溶液一套(0.0.1,0.25,0.5,1.2ng/ml)
④C试剂:
酶标抗原4/2/1瓶
⑤D试剂:
酶标抗原稀释液一瓶
⑥E试剂:
浓缩洗涤液一瓶
⑦F试剂:
显色底物液a一瓶
⑧G试剂;
显色底物液b一瓶
⑨H试剂:
终止液一瓶
⑩反应板框架一块
Added样品稀释液(A试剂)的配制方法:
①先配制PBS缓冲液体(ph7.4):
3.0gNa2HPO4.12H2O,0.25gNaH2PO4.2H2O,8.7gNaCl定容至1000ml。
可根据实验需要按比例配制。
②样品稀释液:
取100ml甲醇,加入900mlPBS缓冲液(PH7.4),混匀即得样品稀释液。
可根据实验要求按比例配制。
2.4实验准备
2.4.1样品处理
取0.5g油样于25ml小烧杯中,用20ml石油醚分数次将试样转移到125ml分液漏斗中,准确加入25.0ml甲醇水(1+1)溶液,加塞振摇5min,静置分层,放出下层甲醇水提取液,此液为样品提取液。
根据样品的国家允许量标准,用A试剂将样品提取液进行适当稀释,即为待测样液。
2.4.2试剂配制
2.4.2.1每瓶C试剂(酶标抗原)中准确加入1.5mlD试剂(酶标抗原稀释液),充分溶解,配成实验用酶标抗原溶液,2—8度保存。
2.4.2.2取适量E试剂(浓缩洗涤液)用蒸馏水稀释20倍待用。
2.5实验步骤
2.5.1试剂平衡:
将测试盒于室温中放置15min以上,平衡至室温。
2.5.2小孔编号;
根据实验需要截取相应孔数放置反应板框架上。
设定一号孔为仪器调零孔,2—7号孔为AFB1标准对照孔,其余孔为样品孔。
2.5.3洗涤;
每孔加入250ul左右洗涤液,洗涤液不得溢出,放置1min后,甩掉洗涤液,在吸水纸上拍干,重复洗板一次。
2.5.4反应组成:
依次加入配制好的溶液及待测液。
2.5.5反应;
将反应板放入37度恒温培养箱中孵育30min。
2.5.6洗涤;
取出反应板,用力甩掉反应液,拍干。
每孔加入250ul左右洗涤液,洗涤液不得溢出,放置2min后,甩掉洗涤液,在吸水纸上拍干,重复洗板4次。
2.5.7显色;
每孔分别加入F试剂(显色底物液a)和G试剂(显色底物液b)各50ul,摇匀,将反应板放入37摄氏度恒温培养箱中显色15min。
2.5.8终止与仪器测定:
每孔分别加入H试剂(终止液)50ul,摇匀后用酶标测定仪(或黄曲霉毒素B1专用测定仪)在415nm波长处测定各孔的吸光度A值。
2.5.9样品定量计算:
将系列AFb1标准溶液(0,0.1,0.25,0.5,1,2ng/ml)测得的吸光度A值,绘制成标准曲线。
横坐标为标准浓度的常用对数值(lgC),纵坐标为各标准液孔A值与0ng/ml标准液孔的A值的比值。
计算待测样品孔A值与A(0mg/ml)的比值,查标准曲线,可得到相应待测样液浓度(C)的常用对数值lgC,对其求反对数,可求出待测样液的AFB1浓度C。
2.6实验结果与分析
2.6.1据测定,可得到各标准溶液和待测样液的吸光度,经处理,如下表所示:
孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
吸光度A
0.265
0.264
0.322
0.346
0.464
0.658
0.817
0.927
0.966
0.965
0.933
0.967
矫正结果
--
-0.001
0.057
0.081
0.199
0.393
0.552
0.662
0.701
0.700
0.668
0.702
A/A0
-57
-81
-199
-393
-552
-662
-701
-700
-668
-702
2.6.2以标准浓度的常用对数值(lgC)为横坐标,各标准液孔A值与0ng/ml标准液孔的A值的比值为纵坐标,做标准曲线,但由于条件所限和数据的不完整,未能导出图表。
2.6.3计算:
待测样品孔的平均吸光度A值=(0.662+0.701+0.7+0.668+0.702)/5=0.6866,则
A样品/A0=0.6866/(-0.001)=-686.6
据标准曲线函数可知Y=-399.13x-384.29
x(lgC)=0.757则C=10^0.757=5.715
将待测液的A样品/A=-686.6代入上述回归方程,得
按下列公式计算出样品中AFB1的含量:
AFB1含量(ng/g)=C*(V/m)*D
上式中:
C:
待测样液中AFB1含量(ng/ml),为5.715ng/ml.
V:
样品提取液体积,为20ml.
m:
样品质量,为5.0g.
D:
样品稀释倍数.为1
则AFB1含量(ng/g)=C*(V/m)*D=5.715*(20/5)*1=22.86ng/g
B.农药残留检验
1.毒死蜱在生菜上的残留动态试验
1.1实验器材
带砂芯玻璃层析柱,研钵,具塞量筒,150mL烧瓶,漏斗,5ml容量瓶,称量天平,手术剪,50ml量筒,铁架台,气相色谱(HP6890,FPD)。
1.2实验药品
40%毒死蜱乳油,乙腈,丙酮,石油醚,甲醇,无水硫酸钠,NaCl,弗罗里硅土,活性炭。
1.3实验原理
农药名称:
毒死蜱(chlorpyrifos)
分子式:
C9H11Cl3NO3PS
分子量:
350.5
理化性质:
原药为白色颗粒状结晶,室温下稳定,有硫醇臭味,密度1.398(43.5℃),熔点41.5~43.5℃,蒸气压为2.5mPa(25℃),水中溶解度为1.2mg/L,溶于大多数有机溶剂。
有机磷类农药毒死蜱具有高效低毒广谱杀虫效果,具有触杀、胃毒和熏蒸作用,广泛应用于叶菜类和瓜果类蔬菜的害虫防治。
目前有关毒死蜱残留的研究主要集中在检测方法、残留监控(标准)、植物修复以及残留去除(降解)技术等方面。
1.4实验步骤
1.4.1田间试验部分(2011.5.9华南农业大学跃进北农场)
1.4.1.1试验小区面积20m2,采用常规手动喷雾器对蔬菜进行喷雾处理(10mL40%毒死蜱乳油兑水3L)。
1.4.1.2分别于施药后两小时、一天、二天、三天、五天、七天在试验小区随机取样。
1.4.2实验室实验部分(2011.5.10~17华南农业大学资环院楼629室)
1.4.2.1样品前处理
1.4.2.1.1提取:
蔬菜切碎、混匀,称取10g于研钵中,加40mL乙腈,研碎,过滤至具塞量筒,加入8gNaCl,手摇1min,静置分层,取20mL上清液于150mL烧瓶中,在50℃下浓缩近干,过经活化的自制层析柱净化。
1.4.2.1.2净化:
带砂芯玻璃层析柱(25cm×
1.5cmi.d.),采用干法装柱法从下至上依次装1cm无水硫酸钠、4g+0.5g的弗罗里硅土+活性炭、1cm无水硫酸钠,轻轻敲实。
将弗罗里硅土用10.0mL丙酮+石油醚(20%+80%)预淋条件化,当溶剂液面到达柱吸附层表面时,加入样品溶液,用烧瓶接收洗脱液,用40mL丙酮+石油醚(20%+80%)淋洗弗罗里硅土。
将收集液浓缩近干,用丙酮定容至5mL,在50℃下浓缩近干,用甲醇定容只5ml,上机分析。
1.4.2.2气相色谱测定条件
仪器:
气相色谱(HP6890,FPD);
柱温采用程序升温方式:
从80℃以30℃/min的升温速率升至240℃并保留2min,然后以10℃的升温速率升至260℃,并保留5min;
进样口温度:
260℃;
检测器温度:
300℃;
进样量:
1μL。
1.5实验结果及分析
1.5.1毒死蜱标样相关数据。
浓度(ppm)
峰面积
141005
26578
0.5
13744
0.1
2741
0.05
1252
经excel处理,得毒死蜱标样的线性关系图和线性相关公式,由此可以计算出样品的浓度。
1.5.2样品的相关数据
采样间隔天数
保留时间
样品浓度(ppm)
样品中的农药含量(ug/g)
0(2h)
8.105
0.4389
11876
0.3657
1(24h)
8.110
0.3624
9720
0.3020
2(48)
0.2853
7535
0.2378
3(72h)
0.2704
7113
0.2253
5(120h)
8.107
0.2178
5627
0.1815
7(168h)
0.1884
4794
0.1570
由上表可知,随着时间的推移,样品的浓度逐步降低,降解速率较为平缓基本呈均匀态势降低;
农药降解的速度和时间,与是否种植有适当植物,天气和环境等因素都有关联。
毒死蜱是一种有机磷杀虫杀螨剂。
具有触杀、胃毒和熏蒸作用,是广谱杀虫杀螨剂,无内吸作用。
在植株体上的不同部位持效期不同(整体表现为根>
茎>
叶),因而在土壤中的残效期较长,一般2至3个月。
所以在生菜上的降解速度快也与毒死蜱的性质有关。
1.5.3消解动态和半衰期
Ct=COe-kt
Ct:
时间t时的农药残留量,单位为mg/kg。
C0:
施药后的原始沉积量单位为mg/kg。
k:
消解系数。
t:
施药后时间,单位为d或h。
1.6附图(各个样品按照时间顺序依次的色谱图)
峰面积:
四、参观学习
A.整体流程。
B.学习成果
1.观摩了快速检测农药残留的新方法。
2.了解了农产品安全检测方面的最新实用技术进展。
3.认识了自身专业知识的不足。
五、心得体会
快乐是时光总是那么短暂,这次农产品安全检测实习不仅让我们所学习的专业知识参与实践,还教会了我对待事情要有认真负责的态度、对学术研究要有严谨的工作作风。
而且,在团队的合作中,要讲究分工合作,分工合理,工作程序详细具体,每一步骤都有一定的操作规范,使效率最大化。
在食品安全日益严重的今天,作为植物保护专业的我,深感自身所肩负的责任与使命,我有必要,也有义务去维护我们的农产品安全卫生。
食品安全问题整日益威胁这老百姓的生活,对水源等日常必需品的微生物含量检测能有效的反应其受污染程度,有助于我们的选择。
再者,就目前来说,化学防治还是在农业防治中占主要地位,而农药残留问题将越来越引起人们的重视。
而此次农产品安全实习正是从这两方面主要的检测手段入手,理论参与实践,使我投身到农产品安全检测的第一线,巩固了我的理论知识的同时,也增加了我的专业技能,提高了我自身的职业素质。
实习过程当中也出现了不少问题,比如开始的时候,由于操作不规范,导致制作出来的层析柱不够细致,层析效果不好,这将极大地影响了整个实验结果,但后来通过我们组员的总结,及时地发现问题,并克服了这样一个难题。
培养了我们发现问题,解决问题的能力。
农产品安全检测实习将告一段落,在收获开心的同时,我们也学到很多专业技能,这对以后的工作以及继续学习都是有很大帮助的。
实习会结束,但我们的学习精神不会结束,在以后的学习生活中,要发继续扬艰苦奋斗的精神以及对科学严谨的态度,奋发图强。
感谢三位老师在实习期间的细心引导与教育,使学生受益匪浅。
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索。
路在自己的脚下,这次实习将是我人生又一个好的开端,相信今后的路会走的更加坚实。
2019-07-142011-05-21记于广州
六、参考文献
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[3]ZHANGZhi—yong,YUXiang—yang,WANGDong—lan,ZHANGCun—zheng,LIUXian-jin.UptakeandTranslocationofChlorpyrifosinTwoLeafyVegetables.JournalofAgro—EnvironmentScience,2010,29(3):
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[4]YUANYu-wei,SIChao-guang,LINHuan,WANGJing,YEZhi-hua.ResidualDynamicsofChlorpyrifos,FenvalerateandBeta-CypermethrininCabbage.JournalofAgro-EnvironmentScience,2008,27(3):
1199-1202.
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